QuantiFast Probe PCR Kits

For fast, real-time PCR and two-step qRT-PCR using sequence-specific probes

  • Sensitive detection of even low copy targets
  • Accurate detection of a wide range of template amounts
  • Faster results with a time savings of up to 60%
  • Optimized, ready-to-use master mix for reliable results without optimization
  • One cycling protocol for all standard and fast cyclers
QuantiFast Probe PCR Kits deliver fast and sensitive quantification of gDNA and cDNA targets by real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes. Q-bond technology and an optimized master mix enable shorter real-time PCR run times, not only on fast cyclers with short ramping times, but also on standard cyclers. The combination of a hot start and a unique PCR buffer system in the ready-to-use master mix ensures highly sensitive qPCR on any real-time cycler without the need for optimization. Two kit formats are available: the QuantiFast Probe PCR Kit for cyclers that require ROX dye for fluorescence normalization, and the QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit for all other cyclers. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
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QuantiFast Probe PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water
204254
¥54,000
QuantiFast Probe PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204256
¥250,000
QuantiFast Probe PCR Kit (4000)
For 4000 x 25 µl reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204257
¥350,000
QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (without ROX dye), 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204354
¥54,000
QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water
204356
¥240,000

QuantiFast Probe PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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PCR時間を顕著に短縮|幅広いダイナミックレンジと高感度を実現|感度を損なわずにより迅速な結果を実現|高感度な2ステップRT-PCR|107倍希釈したテンプレートの検出|特異的なプライマーアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
QuantiFast Probe Kitsは、標準的なサイクラーで2ステップリアルタイムRT-PCRのトータルPCR時間を最大60%短縮(40サイクル実施、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。
|QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kitにより、Mastercycler ep realplexを用い、2ステップPCRで93%のPCR効率で幅広いテンプレート量からの正確な遺伝子発現解析が実現された。ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液とユビキチン(調節タンパク質)用のPrimer ExpressでデザインしたTaqManアッセイを用いてduplicateで反応(25 µl)を行なった。NTC:No Template Control。|ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液(0.01 ng~100 ng)とIL1RN(サイトカイン)用TaqMan Gene Expression Assaysを用いてABI PRISM 7900上でduplicateで反応を行なった。QuantiFast Kitは、Supplier AIIの標準的なサイクリングキット(標準的サイクリングプロトコールを使用)と比較してより高い感度を示し、非常に低いCT値とわずか10 pgのcDNAからの転写物の定量を実現した。|ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液(100 ng~0.01 ng)とPrimer ExpressでデザインしたIL8(ケモカイン)用TaqManアッセイを用いてABI PRISM 7900上で反応を行なった(triplicate)。[A] QuantiFast Kitは、[B] Supplier Iのキット(標準的なサイクリングプロトコールを使用)を使用した場合より高い感度を示し、より低いCT値とわずか0.01 ngのcDNAからの転写物の定量を実現した。|Supplier Rのb-2ミクログロブリン用プライマーとFRETプローブのセットを用いて、LightCycler 2.0によりduplicateで2ステップRT-PCR反応を行なった。QuantiFast Kitの増幅プロットは、キットが広範囲なダイナミックレンジを持つことを示している。|バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

QuantiFast Probe PCR Kits deliver highly sensitive results, outperforming other real-time PCR kits (see table "Sensitive two-step RT-PCR on the iCycler iQ" and figure and Sensitive two-step RT-PCR). PCR run times are reduced by up to 60% (see figure "Significantly reduced PCR times"), allowing you to achieve fast PCR results without compromising on PCR performance (see figure "Faster results without compromising sensitivity"). You can also greatly increase your sample throughput or efficiently share a cycler with other users.

Sensitive two-step RT-PCR on the iCycler iQ
Mean CT value
Human leukocyte cDNA (ng) QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit Kit from Supplier BV
100 29.13 31.13
10 32.50 34.43
1 36.15 40.00
No template control 40.00 40.00
Triplicate reactions were run using a Primer Express designed TaqMan® assay for IL8 (a chemokine). The QuantiFast Kit provided lower CT values than the kit from Supplier BV (which was used according to a fast-cycling protocol), allowing transcript quantification from just 1 ng cDNA.

QuantiFast Probe PCR Kits allow accurate quantification over a wide dynamic range (see figure "Wide dynamic range and high sensitivity"). Template dilutions of up to 7 logs can be reliably detected (see table "Detection over 7 logs of template in two-step RT-PCR on the LightCycler 2.0 " and figure "Detection over 7 logs of template").

Detection over 7 logs of template in two-step RT-PCR on the LightCycler 2.0
Mean CT value
Human leukocyte cDNA QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit Kit from Supplier R
100 ng 11.99 14.56
10 ng 15.54 17.99
1 ng 19.22 22.16
100 pg 22.63 25.14
10 pg 26.43 30.15
1 pg 30.02 34.43
100 fg 33.42 37.10
No template control 40 40.00
PCR efficiency 90% 80.1%
Duplicate reactions were run using a set of primers and FRET probes for β-2 microglobulin from supplier R. The QuantiFast Kit provided lower CT values and higher PCR efficiency that the kit from Supplier R (which was used according to the fast cycling protocol ).
原理

QuantiFast Probe PCR Kits deliver highly sensitive and rapid results over a wide dynamic range on both standard and fast cyclers. The kits are designed for use with all types of sequence-specific probes, including hydrolysis probe detection (e.g., TaqMan and other dual-labeled probes) and FRET probes. A specially developed, fast PCR buffer contains the novel additive Q-Bond, which significantly reduces denaturation, annealing, and extension times (see figure "Fast primer annealing"). The buffer also contains a balanced combination of K+ and NH4+ ions, which promote specific primer annealing, enabling high PCR specificity and sensitivity (see figure "Specific primer annealing"). In addition, HotStarTaq Plus DNA Polymerase provides a stringent hot start, preventing the formation of nonspecific products.

Components of 2x QuantiFast Probe PCR Kit*
Component Features and benefits Benefits
HotStarTaq Plus DNA Polymerase
3 min activation at 95ºC
Set up of qPCR reactions at room temperature
QuantiFast Probe PCR Buffer Balanced combination of NH4+ and K+ ions Specific primer annealing ensures reliable PCR results
Unique Q-Bond additive Faster PCR run times, enabling faster results and more reactions per day
ROX dye Normalizes fluorescent signals on Applied Biosystems and, optionally, Agilent instruments Precise quantification on cyclers that require ROX dye. Does not interfere with PCR on any real-time cycler
* Also contains dNTP mix (dATP, dCTP, dGTP, and dTTP). ROX dye is either present in the master mix or as a separate solution.
操作手順

QuantiFast Probe PCR Kits contain ready-to-use master mixes that eliminate the need for optimization of reaction and cycling conditions. Simply add template DNA, primers, and probe to the master mix and follow the protocol in the handbook to get fast and reliable results on any real-time cycler. Kits are available with or without ROX passive reference dye in the master mix, enabling use on virtually any real-time cycler (see table).  Due to the optimized ROX concentrations, detection of even low copy numbers is achieved through automatic data analysis.

Choosing the right QuantiFast Probe PCR Kit
ROX dyeKit Compatible cyclers
Supplied in master mix QuantiFast Probe PCR Kit All cyclers from Applied Biosystems except Applied Biosystems 7500
Supplied in a separate tube QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit Applied Biosystems 7500, and cyclers from Agilent, Bio-Rad, Cepheid, QIAGEN, Eppendorf, Roche, and other suppliers
.

For optimal results in real-time two-step RT-PCR, we recommend synthesizing cDNA using the QuantiTect Reverse Transcription Kit. The kit provides fast cDNA synthesis in just 20 minutes with integrated removal of genomic DNA contamination. 

QuantiFast Probe Assays are predesigned, genomewide assays that use hydrolysis, probe-based detection. They are delivered with the QuantiFast Probe PCR Kit for guaranteed results in singleplex, two-step qRT-PCR.

アプリケーション

QuantiFast Probe PCR Kits can be used for probe-based gene expression analysis of cDNA targets and quantitative gDNA analysis on any real-time cycler. This includes instruments from Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, and Agilent. For the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, we recommend using the Rotor-Gene Probe PCR Kit, which has been specially developed for fast cycling on these instruments.

Feature
Specifications
Applications Probe-based, real-time PCR, two-step RT-PCR
Reaction type Real-time and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type cDNA, DNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes Sequence-specific probes
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. Roche LightCycler®, Corbett Rotor-Gene, Applied Biosystems)
With or without ROX Available with ROX in master mix and with ROX as separate vial

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FAQ
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サイエンティフィック・ポスター
1
キットハンドブック
2
For fast, quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
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配列特異的なプローブを用いた迅速なリアルタイムPCRおよび2ステップRT-PCR 用
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画像
Significantly reduced PCR times
PCR時間を顕著に短縮
QuantiFast Probe Kitsは、標準的なサイクラーで2ステップリアルタイムRT-PCRのトータルPCR時間を最大60%短縮(40サイクル実施、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。
Wide dynamic range and high sensitivity in two-step RT-PCR on the Mastercycler ep realplex.
幅広いダイナミックレンジと高感度を実現
QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kitにより、Mastercycler ep realplexを用い、2ステップPCRで93%のPCR効率で幅広いテンプレート量からの正確な遺伝子発現解析が実現された。ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液とユビキチン(調節タンパク質)用のPrimer ExpressでデザインしたTaqManアッセイを用いてduplicateで反応(25 µl)を行なった。NTC:No Template Control。
Faster results without compromising sensitivity on the ABI PRISM 7900
感度を損なわずにより迅速な結果を実現
ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液(0.01 ng~100 ng)とIL1RN(サイトカイン)用TaqMan Gene Expression Assaysを用いてABI PRISM 7900上でduplicateで反応を行なった。QuantiFast Kitは、Supplier AIIの標準的なサイクリングキット(標準的サイクリングプロトコールを使用)と比較してより高い感度を示し、非常に低いCT値とわずか10 pgのcDNAからの転写物の定量を実現した。
Sensitive two-step RT-PCR on the ABI PRISM 7900.
高感度な2ステップRT-PCR
ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液(100 ng~0.01 ng)とPrimer ExpressでデザインしたIL8(ケモカイン)用TaqManアッセイを用いてABI PRISM 7900上で反応を行なった(triplicate)。[A] QuantiFast Kitは、[B] Supplier Iのキット(標準的なサイクリングプロトコールを使用)を使用した場合より高い感度を示し、より低いCT値とわずか0.01 ngのcDNAからの転写物の定量を実現した。
Detection over 7 logs of template in two-step RT-PCR on the LightCycler 2.0.
107倍希釈したテンプレートの検出
Supplier Rのb-2ミクログロブリン用プライマーとFRETプローブのセットを用いて、LightCycler 2.0によりduplicateで2ステップRT-PCR反応を行なった。QuantiFast Kitの増幅プロットは、キットが広範囲なダイナミックレンジを持つことを示している。
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
特異的なプライマーアニーリング
バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。
Fast primer annealing with Q-Bond
プライマーの高速なアニーリング
[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。