QuantiTect SYBR® Green PCR Kits

SYBR Green I을 이용하여 quantitative, real-time PCR과 two-step RT-PCR를 수행하는 master mix 입니다
  • Guaranteed performance — unique PCR system with integrated hot start
  • 까다로운 PCR 조건 맞추는 작업 없이 바로 실험 진행
  • 고감도 detection — 적은 양의 transcript에서의 특이적 증폭
  • 보다 넓은 linear range — 어떤 real-time cycler에서도 넓은 range에 걸쳐 정확한 정량 가능
  • No need to optimize reaction and cycling conditions

The QuantiTect SYBR Green PCR Kit provides highly specific quantification of gDNA and cDNA targets by real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I detection. The combination of a hot start and a unique qPCR buffer system ensures highly specific and sensitive real-time quantification of gDNA and cDNA targets. The dNTP mix includes dUTP, allowing optional treatment with UNG. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.

製品名 Cat. no. List price:
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (40)
Trial kit for 40 x 50 µl reactions: 1 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2 ml RNase-Free Water
204141
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QuantiTect SYBR Green PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204143
¥54,500
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 20 ml RNase-Free Water
204145
¥201,000
QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 100 µl UNG Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204163
¥58,500

QuantiTect SYBR® Green PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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2ステップRT-PCR|特異性の高い増幅|ABI PRISM 7700で非常に感度の高い定量|幅広い範囲で直線性のある高感度定量|特異性と感度の高い定量|高感度のリアルタイムPCR|特異的なプライマーアニーリング|
QuantiTect SYBR® Green PCR Kitを用いると、手間と時間のかかる反応条件の至適化を行なう必要がない。即使用可能なPCRマスターミックスにテンプレートとプライマーを添加するだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーを用いて反応を開始できる。|他社のDNAポリメラーゼと比較した結果、ユニークなバッファーと組み合わせたHotStarTaq DNA Polymeraseのみが497 bp フラグメントを特異的に増幅した(1 µgのヒトゲノムDNAに添加した50 コピーのHIV-pol-遺伝子コンストラクトからのフラグメント)。M:マーカー。|トウモロコシから精製したゲノムDNA 50 ng(トウモロコシはCFTR遺伝子を含んでいない)を含む反応液にヒトCFTR遺伝子フラグメントを組み込んだプラスミドをテンプレートとして5~1 x106コピー数添加して、ABI PRISM 7700を用いて増幅した。CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)はcAMP依存性塩素イオンチャンネルである。NTC:No Template Control。|ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトBAX用のQuantiTect Primer Assayと表記のキットを用いてRotor-Gene 3000で解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応では蛍光強度の上昇が見られないことは、QuantiTect Primer Assayによる特異的な検出を実証している。NTC:No Template Control。Norm.Fluoro.:正規化された蛍光。|ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトIL8用のQuantiTect Primer Assay と表記のキットをApplied Biosystems 7500を用いて解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応で蛍光強度の上昇が見られないことにより、QuantiTect SYBR® Green PCR KitとQuantiTect Primer Assayの組み合わせが特異的な検出であることを実証している。NTC:No Template Control。|UNG 前処理とSYBR® GreenベースのリアルタイムPCR は、[A]QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit あるいは[B] R 社のキットとUNG を用いて行なった。ヒト白血球cDNA の10倍段階希釈液(100 pg ~100 ng)とMyc(がん原遺伝子)用QuantiTect Primer Assay を用いてLightCycler 480 上でduplicateで反応を行なった。融解曲線解析(挿入図)は、R 社よりもQuantiTect Kit を用いた方がPCR 特異性の高いことを示した。|バランスの取れたKCl および(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーのPCRテンプレートへの特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|
パフォーマンス

QuantiTect SYBR Green PCR Kits allow specific quantification over a wide linear range (see figure "Specific quantification over a wide linear range"). HotStarTaq DNA Polymerase provides the most stringent hot start compared with other polymerases, further increasing the specificity of the reaction (see figure "Highly specific amplification"). The unique composition of PCR buffer and HotStarTaq DNA Polymerase enable quantification of even low-abundance transcripts — as few as 5 copies of a target can be accurately detected (see figure "Highly sensitive quantification"). When used in combination with the QuantiTect Reverse Transcription Kit and QuantiTect Primer Assays, the QuantiTect SYBR Green PCR Kit delivers sensitive and reliable results (see figure "Specific and sensitive quantification").

The combination of the specially optimized UNG solution and the proven PCR master mix in the QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit ensures effective elimination of carried-over PCR products together with reliable quantification of target sequences (see figure "High specificity in real-time PCR").

原理

QuantiTect SYBR Green PCR Kits contain an optimized, ready-to-use master mix for highly specific and sensitive real-time quantification cDNA targets using SYBR Green I. The fluorescent dye SYBR Green I in the master mix enables the analysis of many different targets without having to synthesize target-specific labeled probes. A balanced combination of K+ and NH4+ ions in the PCR buffer promotes specific primer annealing and enables high PCR specificity and sensitivity (see figure "Specific primer annealing"). In addition, HotStarTaq DNA Polymerase provides a stringent hot start, preventing the formation of nonspecific products.

QuantiTect SYBR Green PCR master mix also contains dUTP, enabling pretreatment with uracil-N-glycosylase (UNG) prior to starting PCR, which ensures that any contaminating PCR products do not affect subsequent PCR reactions.

Components of 2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit
ComponentFeatures Benefits
HotStarTaq DNA Polymerase 15 min activation at 95ºC Set-up of qPCR reactions at room temperature
QuantiTect SYBR Green PCR Buffer Balanced combination of NH4+ and K+ ions Specific primer annealing ensures reliable PCR results
dNTP mix Includes dUTP, which partially replaces dTTP and enables optional UNG treatment of reactions Eliminates contamination from carryover of PCR products by optional UNG treatment
SYBR Green I dye Yields a strong fluorescent signal upon binding double-stranded DNA Highly sensitive quantification
ROX dye For normalization of fluorescent signals on Applied Biosystems and, optionally,  Agilent instruments Precise quantification on cyclers that require ROX dye. Does not interfere with reactions on other real-time cyclers
操作手順

QuantiTect SYBR Green PCR Kits overcome the need for optimization of reaction conditions, which can be tedious and time-consuming. Simply add primers and DNA template to the ready-to-use PCR master mix, and start the reaction (see flowchart "Two-step RT-PCR"). Follow the protocol in the handbook to get fast and reliable results on any real-time cycler. If required, reactions can be pretreated with uracil-N-glycosylase (UNG) to eliminate carryover of PCR products from previous reactions. 

For optimal results in real-time two-step RT-PCR, we recommend synthesizing cDNA using the QuantiTect Reverse Transcription Kit. The kit provides fast cDNA synthesis in just 20 minutes with integrated removal of genomic DNA contamination.

Highly specific results in gene expression analysis are guaranteed when QuantiTect SYBR Green PCR Kits are used in combination with QuantiTect Primer Assays. These are genomewide, bioinformatically validated primer sets for detecting transcripts from human, mouse, rat, and many other species. QuantiTect Primer Assays can be easily ordered online at GeneGlobe. 

アプリケーション

The QuantiTect SYBR Green PCR Kit is for use in gene expression analysis of cDNA targets and quantitative gDNA analysis. QuantiTect SYBR Green PCR Kits are compatible with all available real-time cyclers, including instruments from Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, and Agilent. For the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, we recommend using the Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit, which has been specially developed for fast cycling on these instruments.

Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets
Reaction type Real-time PCR and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type DNA, cDNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQ
39
FAQ ID -1056
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FAQ ID -1083
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-20
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FAQ ID -539
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FAQ ID -551
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FAQ ID -564
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FAQ ID -729
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FAQ ID-751
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FAQ ID -849
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FAQ ID -850
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キットハンドブック
4
For use with QuantiTect PCR Kits to eliminate carryover of PCR products
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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For quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I
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SYBR Green I を用いたリアルタイム定量PCRおよび2ステップRT-PCR用
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クイックスタートプロトコール
1
MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
PCR and two-step RT-PCR.
2ステップRT-PCR
QuantiTect SYBR® Green PCR Kitを用いると、手間と時間のかかる反応条件の至適化を行なう必要がない。即使用可能なPCRマスターミックスにテンプレートとプライマーを添加するだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーを用いて反応を開始できる。
Highly specific amplification.
特異性の高い増幅
他社のDNAポリメラーゼと比較した結果、ユニークなバッファーと組み合わせたHotStarTaq DNA Polymeraseのみが497 bp フラグメントを特異的に増幅した(1 µgのヒトゲノムDNAに添加した50 コピーのHIV-pol-遺伝子コンストラクトからのフラグメント)。M:マーカー。
Highly sensitive quantification on the ABI PRISM 7700.
ABI PRISM 7700で非常に感度の高い定量
トウモロコシから精製したゲノムDNA 50 ng(トウモロコシはCFTR遺伝子を含んでいない)を含む反応液にヒトCFTR遺伝子フラグメントを組み込んだプラスミドをテンプレートとして5~1 x106コピー数添加して、ABI PRISM 7700を用いて増幅した。CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)はcAMP依存性塩素イオンチャンネルである。NTC:No Template Control。
Specific quantification over a wide linear range on the Rotor-Gene 3000.
幅広い範囲で直線性のある高感度定量
ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトBAX用のQuantiTect Primer Assayと表記のキットを用いてRotor-Gene 3000で解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応では蛍光強度の上昇が見られないことは、QuantiTect Primer Assayによる特異的な検出を実証している。NTC:No Template Control。Norm.Fluoro.:正規化された蛍光。
Specific and sensitivie quantification on the Applied Biosystems 7500.
特異性と感度の高い定量
ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトIL8用のQuantiTect Primer Assay と表記のキットをApplied Biosystems 7500を用いて解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応で蛍光強度の上昇が見られないことにより、QuantiTect SYBR® Green PCR KitとQuantiTect Primer Assayの組み合わせが特異的な検出であることを実証している。NTC:No Template Control。
High specificity in real-time PCR.
高感度のリアルタイムPCR
UNG 前処理とSYBR® GreenベースのリアルタイムPCR は、[A]QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit あるいは[B] R 社のキットとUNG を用いて行なった。ヒト白血球cDNA の10倍段階希釈液(100 pg ~100 ng)とMyc(がん原遺伝子)用QuantiTect Primer Assay を用いてLightCycler 480 上でduplicateで反応を行なった。融解曲線解析(挿入図)は、R 社よりもQuantiTect Kit を用いた方がPCR 特異性の高いことを示した。
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
特異的なプライマーアニーリング
バランスの取れたKCl および(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーのPCRテンプレートへの特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。