TAGZyme System

His-tagged 단백질의 발현 및 His-tag 제거에 사용

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TAGZyme DAPase Enzyme (2.5 U)

Cat. No. / ID: 34362

약 50mg의 태그된 단백질 처리용: 2.5units DAPase Enzyme, 20mM Cysteamine-HCl (1 mL)

€784.00

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EnzymeVector

TAGZyme Enzyme

TAGZyme pQE Vector

Quantity

2.5 U (1 mL)

50 U (25 mL)

수량

TAGZyme System은/는 분자생물학 분야에 사용하기 위한 것입니다. 이 제품은 질병의 진단, 예방, 또는 치료용이 아닙니다.

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특징

TAGZyme 효소에 의한 제거에 최적화된 발현된 His-tag
효율적인 His-tag 제거: 37°C에서 단 30분 안에 >95% 달성
N-말단 His-tagged 단백질의 고수준 발현
고순도 최종 산물
Ni-NTA 방식으로 오염 물질을 완전히 제거

제품 세부 정보

TAGZyme Enzyme DAPase는 최대 10mg의 His-tagged 단백질에서 매우 특이적이고 효율적으로 His-tag를 제거할 수 있는 충분한 효소를 포함하고 있습니다. TAGZyme System은 TAGZyme pQE-2 벡터를 사용하여 발현된 고유한 DAPase 중지 시점을 포함하는 단백질에서 His-tag를 제거하는 데 사용할 수 있습니다.

성능

TAGZyme DAPase Enzyme은 TAGZyme pQE-2 벡터를 사용하여 발현된 '중지 시점'까지 N-말단 His tag에서 디펩티드를 순서대로 효율적으로 제거합니다.

원리

His-tagged 재조합 단백질은 단백질 구조와 기능을 연구하는 데 유용한 도구가 되었습니다. His tag는 크기가 작고 면역원성이 낮기 때문에 일반적으로는 제거할 필요가 없습니다. 그러나 X-선 또는 NMR을 이용한 구조 결정 연구 또는 치료제 생산과 같은 일부 애플리케이션에서는 벡터 유래 아미노산이 없는 단백질 제품이 선호됩니다.

TAGZyme pQE-2 벡터는 내재적 DAPase 중지 시점이 포함된 단백질에 적합합니다.

TAGZyme System은 높은 특이성과 효율성으로 재조합 단백질에서 N-말단 His tag를 제거합니다. DAPase 효소는 정제된 His-tagged 단백질의 N-말단에서 디펩티드를 순차적으로 절단하는 데 사용됩니다(그림 'His-tag 제거' 참조). 효소가 기질로 작용할 수 없는 아미노산 모티프인 '중지 시점'에 도달하면 소화가 중단됩니다('DAPase 중지 시점' 표 참조).

DAPase 중지 시점

아미노산	DAPase 중지 시점(↓) 염기서열*
라이신(Lys, K)	Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Lys-Xaa...
아르기닌(Arg, R)	Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Arg-Xaa...
프롤린(Pro, P)	Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Xaa-Pro-Xaa...
프롤린(Pro, P)	Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Pro-Xaa-Xaa...
글루타민(Gln, Q)†	Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Gln-Xaa...
이소류신(Ile, I)	Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Ile-Xaa-Xaa...

그림 참조

His-tag 제거.

절차

고유한 중지 시점을 포함하는 재조합 단백질의 경우, TAGZyme pQE-2 벡터를 사용하여 발현하면 DNA 삽입물의 클로닝 부위에 관계없이 N-말단 His-tag를 완전하고 효율적으로 제거할 수 있습니다(그림 'His-tag 제거' 참조). DAPase 효소로 배양한 후 반응 혼합물을 Ni-NTA 매트릭스를 사용하여 감산 고정화 금속 친화성 크로마토그래피(Immobilized-Metal Affinity Chromatography, IMAC)를 실시합니다( '태그가 제거된 단백질의 정제' 그림 참조). His-tag 단편과 TAGZyme DAPase Enzyme(C-말단 6xHis tag를 운반)이 매트릭스에 결합하고, 흘러 지나가는 분획에서 tag가 제거된 순수 표적 단백질이 회수됩니다.

그림 참조

His-tag 제거.

검출된 단백질의 정제.

응용 분야

TAGZyme System은 특정 절단, 재조합 시약 사용 및 모든 오염 물질의 완전한 제거가 가능하므로, 다음과 같은 애플리케이션에서 His-tag가 없는 단백질을 생산하기 위해 선택되는 방법입니다.

NMR 또는 X-선 결정학을 통한 단백질 구조 결정
치료용 단백질 생산

지원되는 데이터 및 수치

His-tag 제거.

TAGZyme 효소를 사용한 전체 절단 전략에 대한 개략적인 요약. 성숙한 표적 단백질을 얻기 위해 자연적인 중지 시점을 포함한 단백질에서 DAPase 효소가 N-말단 His tag를 절단.

리소스

For the pQE-2 vector

For the pQE-1 vector

For exoproteolytic cleavage of N-terminal His tags

Publications

Production and comprehensive quality control of recombinant human Interleukin-1beta: a case study for a process development strategy.

Block H; Kubicek J; Labahn J; Roth U; Schäfer F;

Protein Expr Purif; 2007; 57 (2):244-54 2007 Oct 17 PMID:18053740

FAQ

Yes. In order to cleave off an N-terminal 6xHis tag, a protease cleavage site must be inserted between the coding sequences of the tag and the N-terminus of the protein. Factor Xa Protease recognizes the amino acid sequence Ile-Glu-Gly-Arg and cleaves the peptide bond C-terminal of the arginine residue. The expression vector pQE-30 Xa encodes a Factor Xa Protease recognition site between the N-terminal 6xHis-tag sequence and the multiple cloning site.

If the gene of interest is cloned blunt ended at the 5´-end using the StuI restriction site of the vector, Factor Xa Protease cleavage of the purified recombinant protein results in a protein product without any vector-derived amino acids at the N-terminus.

Tags can also be removed exoproteolytically using the TAGZyme System. This system is an efficient and specific solution for the complete removal of small N-terminal His tags and other amino acid tags by the use of exopeptidases. For detailed information on the procedure please review the TAGZyme handbook.

Please note that both tag removal options work on N-terminal 6xHis tags only.

FAQ ID -140

DAPase (dipeptidyl aminopeptidase I = Cathepsin C), even though endogenously expressed in human tissues and cells, will have only a negligible effect on the degradation of proteins expressed in cell culture. The reason for this is the low level of endogenous DAPase compared to the much higher level of typically overexpressed recombinant protein. However, it is always worthwhile to run a time-course expression experiment to check for possible protein degradation, since proteases and peptidases tend to degrade proteins over time.

FAQ ID -527

The removal of DAPase is >99%.

FAQ ID -319

DAPase: heterodimer, 24 kDa and 6 kDa subunit; Qcyclase: 35 kDa; pGAPase: 28 kDa

FAQ ID -329

Yes. The TAGzyme enzymes do not experience any loss in function after several freeze and thaw cycles. However, storage at -80°C is not necessary as storage at -20°C is adequate.

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