標準的および特殊なPCR 用
  • PCR条件の至適化が最小限で済むQIAGEN PCR Buffer
  • 直接ゲルにロード可能なPCR バッファーでより迅速な操作
  • GC リッチなテンプレートの増幅を促進するQ-Solution
  • 簡便で取り扱いやすいフォーマット
Taq DNA Polymeraseには、PCR条件の至適化が最小限で済む画期的なQIAGEN PCR Bufferと、増幅困難なテンプレート(GC リッチなど)の効率的な増幅を実現する画期的なQ-Solution が含まれています。さらに2 種類のマーカー色素を含むCoralLoad PCR Buffer も同梱されているので、PCR 産物を即座にゲルにアプライできます。
製品名 Cat. no. List price:
Taq DNA Polymerase (250 U)
250 units Taq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
201203
¥20,500
Taq DNA Polymerase (1000 U)
4 x 250 units Taq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
201205
¥71,000
Taq DNA Polymerase (5000 U)
20 x 250 units Taq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
201207
¥284,000
Taq DNA Polymerase Kit (25000 U)
100 x 250 units Taq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
201209
¥1,279,000

TaqDNA Polymerase  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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CoralLoad PCR Buffer.|異なったマグネシウム濃度への適応|増幅困難なテンプレートを増幅|Tm値の異なるプライマーへの適応性|ロット間での再現性|長いPCR産物の特異的増幅|プライマーのアニーリングにおける特異性が増加|
CoralLoad PCR Buffer ( [A] ) は、は2種類のゲルマーカー色素を含んでおり ( [B ]) 、PCR産物を即ゲルにアプライでき、DNAの泳動を簡単に可視化できる。|記載のMg2+濃度で、QIAGEN PCR BufferとTaq DNA Polymerase(QIAGEN)を用いてPCR反応を行なった。同じ条件のPCR反応を他社(Supplier AII)のPCRバッファーとTaq DNA ポリメラーゼを用いて起こした。シングルコピーのヒトプリオンタンパク遺伝子が増幅された。M:マーカー。|2種類のプライマー/テンプレートシステムにおいて1x Q-Solutionの非存在下(-)、あるいは存在下(+)でQIAGEN PCR BufferとTaq DNA Polymeraseを用いて増幅した。Q-Solutionを使用すれば、難しいテンプレートを特異的に増幅することができまる。[A] ヒトアンジオテンシンレセプターII遺伝子、[B] マウスプロテインキナーゼC遺伝子、M:マーカー。|ヒト嚢胞性線維症のシングルコピー遺伝子を図に示したアニーリング温度でQIAGEN TaqDNA PolymeraseとPCR Bufferを用いて増幅した。使用したプライマーは、Tm が57.5℃ (GC 含有率:54.5%)のとき22 mer、Tm が85.2℃ (GC 含有率:78%)のとき32 merだった。反応液100 μl の10%をアガロースゲルにロードした。M:マーカー。|ターゲットテンプレート、それぞれ104、103、102 コピーに相当するヒトゲノムDNA、30 ng、3 ng、300 pgから嚢胞性線維症のシングルコピー遺伝子のフラグメントを増幅した。Taq DNA Polymeraseの3つの異なるロットを使用し、それぞれのPCR産物は1 %アガロースゲルで電気泳動を行なった。M:マーカー|Taq DNA PolymeraseとQIAGEN PCR Buffer(QIAGEN)、または他社(Supplier AII)の TaqDNA ポリメラーゼとバッファーを用いて、ヒトゲノムDNAから異なる長さの3種類のフラグメントを増幅した。分析のため、各反応液の10%をゲルにロードした。同じPCR増幅の結果を示す。M:マーカー。|QIAGEN PCR Buffer中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P-)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマーテンプレート結合に対する特異的な結合の比率が高く保たれる。|
パフォーマンス

Taq DNA Polymeraseは、他メーカーの試験されたキットに比べて優れており、時間のかかる至適化を必要とせずに、様々なPCR条件で確固たるPCR性能を示します(図"Tm 値の異なるプライマーへの適応性" と"長いPCR産物の特異的増幅")。TaqDNA Polymeraseは、全てのロットで、低コピー数のヒトゲノムDNAをターゲットとした増幅実験により、PCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲な品質管理テストを受けています(図 "ロット間での再現性")。同様にキットに含まれているQIAGEN PCR BufferとCoralLoad PCR Bufferのユニークな組成によって、最小限の至適化に必要な事項と様々なPCR条件で、特異性の高いPCRが可能となります(図"幅広い至適アニーリング温度"と "異なったマグネシウム濃度への適応")。さらに、CoralLoad PCR Bufferは、PCR産物をアガロースゲルに即座にロードすることを可能にするため、比較的簡単な操作で比較的早く結果が得られます。また、キット付属のPCR 添加物、Q-Solutionを使用すれば、不適切なPCR条件を改善することができます(図 "増幅困難なテンプレートの増幅")。

Taq DNA Polymeraseの詳細データ

濃縮:5 units/µl
組み換え酵素:はい
基質類似体: dNTP、ddNTP、dUTP、ビオチン-11-dUTP、DIG-11-dUTP、蛍光-dNTP/ddNTP
エクステンション率72℃ で2~4 kb/分
半減期:97℃で10分、94℃で60分
増幅効率:≥105
5'->3' エキソヌクレアーゼ活性:あり
余分なA付加:あり
3'->5' エキソヌクレアーゼ活性:なし
混入しているヌクレアーゼ:なし
混入しているRNase:なし
混入しているプロテアーゼ:なし
自己プライミング活性:なし

原理

Taq DNA Polymerase は、スタンダードなPCRから特殊なPCRまで適応できる 高品質の組み換え酵素です(図 "Tm 値の異なるプライマーへの適応性" と"長いPCR産物の特異的増幅")。

QIAGEN PCR Buffer

革新的なQIAGEN PCR Bufferは、PCR至適化の操作を軽減することにより、時間と労力を節約するために開発されました。QIAGEN PCR Bufferは、KCl も (NH4)2SO4 も含んでいます(図"プライマーのアニーリングにおける特異性が増加")。このユニークなバッファーによって、特異的PCRの産物を増幅しやすくなります。PCR サイクルごとのアニーリングの間、非特異的なプライマー結合に対する特異的な結合の比率が、バッファーによって高く保たれます。このPCRバッファーは、KClと (NH4)2SO4 のユニークな配合比により、従来のPCR バッファーに比べ幅広いアニーリング温度やMg2+濃度の範囲で厳密なプライマーアニーリング条件を実現します。異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は、劇的に緩和され、多くの場合、不要となります(図 "幅広い至適アニーリング温度"および"異なったマグネシウム濃度への適応 ")。

CoralLoad PCR Buffer

CoralLoad PCR Bufferは、QIAGEN PCR Bufferの全ての特長を持っています。さらに、PCR反応液をアガロースゲルに直接ロードするために使用することができ、従って、ゲルローディングバッファーを別途加える必要はありません。CoralLoad PCR Bufferは従来のQIAGEN PCR Bufferと同程度の高いPCR特異性を持ち、反応の至適化は最小限に抑えられます。さらに、これに入っている2種類のマーカー色素(オレンジ色の色素と赤色の色素)により、DNAの移動距離の予測とアガロースゲルの泳動時間の至適化を容易に行なえます(図"CoralLoad PCR Buffer")。本バッファーはピペッティングの目視化を改良し、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。

Q-Solution

Q-Solution は、DNAの溶解挙動を変えることで、GCリッチなテンプレート、または二次構造が複雑なテンプレートを増幅しやすくします。この試薬の添加により、しばしば最適条件ではないPCRが改善されたり、今まで得られなかったPCR産物の増幅が可能になったりします (図 "増幅困難なテンプレートをQ-Solutionにより増幅")。DMSO や他のPCR添加物と異なり、本溶液はどのようなプライマー/テンプレートシステムでも一定の濃度で作用し、毒性もありません。

操作手順
Taq DNA Polymeraseは、様々なアプリケーションで、PCRパラメータの至適化を最小限に抑えながら、特異性の高いPCRを確実にします。キット付属のプロトコールが簡潔で理解しやすいため、PCRセットアップが簡単です。利便性を加え、取り扱いをさらに容易にするために、CoralLoad PCR Bufferが含まれています。これによりローディング色素を加えずに、PCR産物をゲルに直接ロードすることができます。GCリッチなテンプレートで確実に成功するために、PCRを増進するQ-Solution が同梱されています。
アプリケーション

TaqDNA Polymeraseは以下のようなスタンダードな用途にも特殊な用途にも使用できます。

  • スタンダードな PCR
  • RT-PCR
  • スクリーニング
  • PCRによるDNAフィンガープリンティング(VNTR、STR、RAPD)

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FAQ
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キットハンドブック
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For standard and specialized PCR applications with minimal optimization
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クイックスタートプロトコール
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