RNeasy FFPE Kit

ホルマリン固定、パラフィン包埋(FFPE)した組織切片からのトータルRNA精製
  • ホルマリンによるクロスリンクを切断する新しい手法
  • RNA分解がなく効率的にRNAを遊離
  • わずか85 分でRNA が得られる能率化されたプロトコール

RNeasy FFPE Kitはホルマリン固定、パラフィン包埋組織切片からのトータルRNA精製用に特別にデザインされています。特別な溶解およびインキュベーション条件によりホルムアルデヒドによるクロスリンクを元に戻します。さらに溶解バッファーは、組織切片からRNAを効率的に遊離し、操作におけるRNA分解もありません。また本キットでは、混入したゲノムDNAコンタミを最適に除去するためにDNaseとDNase Booster Bufferを使用しています。また、わずか14 μl の溶出容量でのトータルRNA 精製が可能なRNeasy MinElute スピンカラムを使用しています。精製はQIAcube上で全自動化できます。

製品名 Cat. no. List price:
RNeasy FFPE Kit (50)
50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes, Proteinase K, RNase-Free DNase I, DNase Booster Buffer, RNase-Free Buffers, RNase-Free Water
73504
¥54,500
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RNeasy FFPE Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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リアルタイムRT-PCR解析で信頼性のある結果|高いRNA収量|RNeasy FFPE操作手順|優れたリアルタイムRT-PCR解析|使用可能な全てのRNAを回収|
10 µmラット肺FFPEサンプルから、RNeasy FFPE KitまたはSupplier EIII、Supplier N、Supplier AIV、Supplier Mのキットを用いて、トータルRNAを精製した。PGK1(phosphoglycerate kinase 1)のリアルタイムRT-PCRアッセイを、逆転写ステップあり(+RT)またはなし(-RT)の条件下でRotor-Gene Qサイクラーにより実施した。RNeasy FFPE Kitを用いた-RTサンプルで高いCT値が得られたことは、精製RNAにゲノムDNAが事実上混入していないことを示している。従ってRNeasy FFPE Kitを用いた+RTサンプルで得られるCT値は正確なRNA発現量を反映している。|RNeasy FFPE KitまたはSupplier N、Supplier AIV、Supplier Mのキットを用いて、表記のラット組織の10 µm FFPE切片からRNAを精製した。RNA収量は260 nmで吸光度を測定した。|サンプルからパラフィンを除去した後、至適化された溶解バッファーにより、RNA収量を低減することなく、わずか15 分でProteinase K分解を含むサンプル溶解を行なうことができる。溶解後、サンプルを80℃で15分間インキュベートし、ホルマリンによるクロスリンキングを元に戻す。FFPE サンプル中に存在する小さなDNAフラグメントを含むゲノムDNAは、その後DNaseとDNase Booster Bufferを用いて効率的に除去される。最後に、RNeasy MinElute Spin Columnを用いて高濃度なRNA を精製する。RNAをわずか14~30 µlで溶出するため、より少量の反応液でダウンストリームアプリケーションを行なうことができる。|RNeasy FFPE Kitを用いてラット腎臓FFPEサンプルからトータルRNAを精製した。PGK1(phosphoglycerate kinase 1)のリアルタイムRT-PCRアッセイをRotor-Gene Qサイクラーで逆転写酵素添加(+RT)、あるいは未添加(-RT)で行なった。-RT曲線は、RNeasy FFPE Kitを用いて精製したRNAが事実上ゲノムDNAフリーであることを示す。|6 ヶ月齢FFPEラット肝臓から、RNeasy FFPE KitまたはSupplier AIV、Supplier N、Supplier Mのキットを用いてRNAを精製し、Agilent 2100 BioAnalyzerで解析した。得られたピークから、他社のキットを使用した場合に比べてRNeasy FFPE Kitでは分解していないRNAがより多く精製されたことが示された。|
パフォーマンス
RNeasy FFPE Kitを用いることにより、固定および包埋サンプルから精製されるRNA収量は、他の精製法を用いたものよりも高くなります(図"RNA収量の増加")。70ヌクレオチドより長い全てのRNAが回収され、RNAの分解、ゲノムDNAのコンタミもほとんど認められません(図"全ての使用可能なRNAの回収")。本キットで精製したRNA は、リアルタイムRT-PCRなどの様々なアプリケーションで最適な結果を実現します(図"リアルタイムRT-PCR解析における信頼性の高い結果"および"リアルタイムRT-PCR解析の成功")。
原理

ホルマリン固定された組織はRNA–RNAおよびRNA–タンパク質間のクロスリンクが生じているため、酵素によるアッセイ系でのRNAの使用において良好な結果が得られません。FFPEサンプルでは、固定および包埋条件も核酸の過度なフラグメント化をもたらします。RNeasy FFPE Kitは、特別な溶解およびインキュベーション条件によりホルムアルデヒドによるクロスリンクを元に戻します。溶解バッファーはFFPE組織サンプルからRNAを効率的に遊離させ、RNA分解を回避します。これらの至適条件により、全ての使用可能なRNAの精製が可能になるため、RNeasy FFPE KitでFFPEサンプルから精製されるRNA収量は、ほかの精製法を用いたものよりも収量よりも大きくなります。

操作手順
RNeasy FFPEの全ての操作手順は、わずか85分で完了します(フローチャート"RNeasy FFPE操作手順")。proteinase K分解によるサンプル溶解はわずか15分で完了します。溶解後、サンプルを80℃で15分間インキュベートし、ホルマリンによるクロスリンクを元に戻します。次に、DNaseを用いて、小さなDNAフラグメントを含むゲノムDNAを効率的に除去します。最後に、RNeasy MinElute Spin Columnを用いてRNAを14〜30μlで溶出し、高濃度なRNAを精製します。精製工程はQIAcube上で全自動化できます。
アプリケーション

RNeasy FFPE Kitは、70 ヌクレオチドより長い全てのRNAを分離するので、RT-PCRなどの多数のアプリケーションに有用なRNAフラグメントを回収できます。しかし、FFPEのサンプルから精製されたRNAはフラグメント化が激しく、完全長RNAを必要とするダウンストリームアプリケーションには使用するべきではありません。いくつかのアプリケーションではフラグメント化したRNAを使用できるように変更が必要な場合があります(例:RT-PCRで短い増幅産物にするようにプライマーをデザインする)。cDNA合成にはオリゴ-dTプライマーの代わりにランダムプライマーか遺伝子特異的なプライマーを使用するべきです。

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クイックスタートプロトコール
1
For purification of total RNA from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections
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キットハンドブック
1
MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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安全データシート
1
画像
Reliable results in real-time analysis.
リアルタイムRT-PCR解析で信頼性のある結果
10 µmラット肺FFPEサンプルから、RNeasy FFPE KitまたはSupplier EIII、Supplier N、Supplier AIV、Supplier Mのキットを用いて、トータルRNAを精製した。PGK1(phosphoglycerate kinase 1)のリアルタイムRT-PCRアッセイを、逆転写ステップあり(+RT)またはなし(-RT)の条件下でRotor-Gene Qサイクラーにより実施した。RNeasy FFPE Kitを用いた-RTサンプルで高いCT値が得られたことは、精製RNAにゲノムDNAが事実上混入していないことを示している。従ってRNeasy FFPE Kitを用いた+RTサンプルで得られるCT値は正確なRNA発現量を反映している。
Greater yields of RNA.
高いRNA収量
RNeasy FFPE KitまたはSupplier N、Supplier AIV、Supplier Mのキットを用いて、表記のラット組織の10 µm FFPE切片からRNAを精製した。RNA収量は260 nmで吸光度を測定した。
RNeasy FFPE procedure.
RNeasy FFPE操作手順

サンプルからパラフィンを除去した後、至適化された溶解バッファーにより、RNA収量を低減することなく、わずか15 分でProteinase K分解を含むサンプル溶解を行なうことができる。溶解後、サンプルを80℃で15分間インキュベートし、ホルマリンによるクロスリンキングを元に戻す。FFPE サンプル中に存在する小さなDNAフラグメントを含むゲノムDNAは、その後DNaseとDNase Booster Bufferを用いて効率的に除去される。最後に、RNeasy MinElute Spin Columnを用いて高濃度なRNA を精製する。RNAをわずか14~30 µlで溶出するため、より少量の反応液でダウンストリームアプリケーションを行なうことができる。

Successful real-time analysis.
優れたリアルタイムRT-PCR解析
RNeasy FFPE Kitを用いてラット腎臓FFPEサンプルからトータルRNAを精製した。PGK1(phosphoglycerate kinase 1)のリアルタイムRT-PCRアッセイをRotor-Gene Qサイクラーで逆転写酵素添加(+RT)、あるいは未添加(-RT)で行なった。-RT曲線は、RNeasy FFPE Kitを用いて精製したRNAが事実上ゲノムDNAフリーであることを示す。
Recovery of all usable RNA.
使用可能な全てのRNAを回収
6 ヶ月齢FFPEラット肝臓から、RNeasy FFPE KitまたはSupplier AIV、Supplier N、Supplier Mのキットを用いてRNAを精製し、Agilent 2100 BioAnalyzerで解析した。得られたピークから、他社のキットを使用した場合に比べてRNeasy FFPE Kitでは分解していないRNAがより多く精製されたことが示された。