REPLI-g UltraFast Mini Kit

微量あるいは貴重なサンプルから全ゲノムを均一かつ迅速に増幅

わずか1～1.5時間で全ゲノム増幅を実現
ダウンストリームアプリケーションに十分な量のDNAを増幅
様々なスタートサンプルから再現性のある全ゲノム増幅
長期保存にも非常に安定な増幅DNA

ゲノム解析のためにゲノムDNA量が不十分であるという問題は、サンプル中の全DNA増幅（whole genome amplification）により解決できます。REPLI-g UltraFast Kitには少量サンプルからわずか60～90分で均一で正確な全ゲノム増幅を実現するREPLI-g UltraFast DNA Polymeraseが含まれ、20 µlの反応液あたり通常7 µgのDNAを増幅できます。ゲノムDNA、鮮血や乾血、口腔スワブ、新鮮／凍結組織、細胞など様々なスタートサンプルが使用可能です。増幅されたDNAは様々な遺伝子解析に直接利用できます。

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関連資料

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製品名		Cat. no.	List price:
REPLI-g UltraFast Mini Kit (25) DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 25 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions		150033	¥30,000
REPLI-g UltraFast Mini Kit (100) DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 100 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions		150035	¥96,000

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REPLI-g UltraFast Mini Kit は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。

パフォーマンス

反応開始90分後の平均DNA収量は、標準的品質のサンプルで20 µlの反応液あたり7 µgです。限られた時間しかない場合には、わずか反応開始45分後でもダウンストリームの遺伝子解析に十分な量の増幅DNAが得られます（図"増幅DNAの一定で高い収量"）。テンプレートDNAを含まないネガティブコントロール反応液では増幅産物が見られず、反応結果はサンプルあるいは混入したDNAの有無を正確に反映します（図"増幅DNAの一定で高い収量"）。

原理

ゲノム解析において、解析のためのゲノムDNAを十分量確保できない場面によく遭遇します。全DNA増幅により、サンプル中の全DNAを広範囲に増幅することでこの問題を解決でき、同じDNAサンプルでも全ての解析を行なうために十分な量が得られます。REPLI-g UltraFastテクノロジーは全ゲノム領域の迅速で均一なDNA増幅を実現し、遺伝子配列による増幅の偏りもほとんどありません。この方法はMultiple Displacement Amplification（MDA）テクノロジーに基づくDNA伸長性が高いユニークなDNAポリメラーゼを用いた等温ゲノム増幅反応により、最高100 kbまでのDNAをはるかに短時間で増幅でき、PCR法を用いた増幅の際に生じる配列の大きな偏りも回避できます。さらにユニークなアルカリ変性バッファーはゲノムDNAのマイルドな変性を確実に行ない、熱変性で起きるテンプレートDNAのフラグメント化を回避できます。そのため、ダウンストリームアッセイにおいてより高感度で信頼できる結果が得られます。

操作手順

REPLI-g UltraFast Mini Kitを用いたゲノムDNAの増幅は3つの基本的な操作ステップが必要です（図"精製したゲノムDNAの操作手順"）。テンプレートDNAの断片化および損傷を避けるため、まずサンプル（精製したゲノムDNA 10 ng、全血0.5 µl、組織培養細胞300個）のマイルドなアルカリ変性を行ないます。次にサンプルを中和し、最後にREPLI-g UltraFast DNA Polymeraseを添加して30 ℃でインキュベートします。増幅DNAは60分後に使用可能となり、それ以上の精製は行ないません。

アプリケーション

REPLI-gで増幅したゲノムDNAは次のような様々なダウンストリームアプリケーションに使用することができます。

ジェノタイピング（SNP、STR、マイクロアレイなど）
エンドポイントPCRおよび定量リアルタイムPCR
シークエンシング
Comparative Genome Hybridization（CGH法）

Feature	Specifications
Amplification	Whole genomic DNA
Applications	Genotyping, microarray, PCR, real-time PCR
Denaturation step	Alkaline
Maximum input volume	10 ng DNA, 0.5 µl whole blood, ~300 cells/µl
Minimal pipetting volume needed	1 µl
Quality assessment	No
Reaction time	60–90 minutes
Reaction volume	20 µl
Samples per run (throughput)	Mid
Starting amount of DNA	>10 ng purified genomic DNA
Starting material	Genomic DNA, blood, cells
Technology	Multiple Displacement Amplification (MDA)
Yield	~10 µg

Application Notes

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	Genome-pULSe: Whole genome amplification & labeling for arrayCGH analysis - (EN)	詳細を表示
	Oragene and REPLI-g Whole Genome Amplifi cation - (EN)	詳細を表示

パンフレット

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	Analyzing Genetic Differences - (EN) Second edition — innovative tools	詳細を表示

FAQ

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	Can I reduce the amount of starting material below 10 ng when using the REPLI-g UltraFast Mini Kit? FAQ ID -1325	表示
	Can I reduce the reaction time to e.g., 30 minutes, when using the REPLI-g UltraFast Mini Kit? FAQ ID -1326	表示
	Why is there DNA in the no-template control reaction when using the standard REPLI-g procedure, but not when using the UltraFast procedure? FAQ ID -1327	表示
	Will the REPLI-g UltraFast Mini Kit reaction always yield 10 µg DNA? FAQ ID -1328	表示
	Do you have a protocol for cleanup of REPLI-g amplified DNA? FAQ ID -1545	表示
	Can cDNA prepared with the QuantiTect Whole Transcriptome Kit be reampliied using REPLI-g Kits? FAQ ID -1611	表示
	Where can I find background information and literature on Whole Genome Amplification with REPLI-g Kits? FAQ ID -1690	表示
	What are possible reasons for reduced DNA yields with REPLI-g Kits? FAQ ID -2148	表示
	What is REPLI-g whole genome amplification? FAQ ID -654	表示
	Will REPLI-g work at high temperatures? FAQ ID -656	表示
	What are the differences between MDA and DOP/PEP methods of Whole Genome Amplification? FAQ ID -665	表示
	Does REPLI-g technology for whole genome amplification work with paraffin embedded samples? FAQ ID -673	表示
	Why do I get amplification in a negative control DNA tube using the REPLI-g Kit for WGA? FAQ ID -675	表示
	Is 2 kb the minimal gDNA fragment size for REPLI-g Whole Genome Amplification? FAQ ID -682	表示
	What is the length of the MDA whole genome amplification product? FAQ ID -690	表示
	What is the stability of the REPLI-g MDA product? FAQ ID -693	表示
	How can I quantify the amount of REPLI-g DNA I have amplified? FAQ ID -694	表示
	How can I determine the quality of my REPLI-g amplified products? FAQ ID -695	表示
	Can I use REPLI-g for SNP Genotyping? FAQ ID -700	表示
	Has anyone verified whole genome amplification accuracy with Sequencing? FAQ ID -701	表示
	Are Centromeres and Telomeres amplified using REPLI-g WGA? FAQ ID -702	表示
	What is the enzyme used in the REPLI-g reaction? FAQ ID -704	表示
	Any data on the fidelity of the REPLI-g MDA technique? FAQ ID -707	表示
	Can I purchase Phi29 DNA polymerase only? FAQ ID -708	表示
	What are exo-resistant random hexamers used in the REPLI-g reaction? FAQ ID -710	表示
	Can I use my own primers for REPLI-g WGA to amplify a specific chromosomal region? FAQ ID -712	表示
	Will the random hexamers in the REPLI-g reaction interfere with downstream analysis? FAQ ID -713	表示
	Do you have data on the DNA yield at different incubation time for the Repli-G Kits? FAQ ID -3113	表示

キットハンドブック

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	(EN) - REPLI-g UltraFast Mini Handbook For fast whole genome amplification from purified genomic DNA, blood, and cells	詳細を表示
	(JA) - Important Note for REPLI-g Kits	詳細を表示
	(JA) - REPLI-g UltraFast Miniプロトコールとトラブルシューティング精製したゲノムDNA、血液、細胞からの迅速な全ゲノム増幅	詳細を表示

サイエンティフィック・ポスター

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	A novel approach to whole genome amplification and labeling of DNA samples for copy number variation detection on BAC microarrays	詳細を表示
	Comparison of genotyping consistency between genomic and whole-genome amplified DNA using the Illumina GoldenGate and Infinium-II assays	詳細を表示
	SNP genotyping of saliva DNA using Affymetrix GeneChip targeted genotyping system	詳細を表示
	(EN) - The impact of whole genome amplification on forensic testing	詳細を表示

Supplementary Protocols

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	Purification of REPLI-g amplified DNA using the QIAamp® DNA Mini Kit - (EN)	詳細を表示
	Purification of DNA amplified using REPLI-g® Kits - (EN)	詳細を表示

MSDS

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	Safety Data Sheets Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.	表示

安全データシート

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	MSDS REPLI-g UltraFast Mini Kit (25)
	MSDS REPLI-g UltraFast Mini Kit (100)

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