ウイルスDNA/RNA の高感度な検出
- シングルアッセイだけでなくマルチプレックスアッセイでも高感度を実現
- 同一反応液中でウイルスRNA/DNAの検出が可能
- 低い陽性シグナルも明確に検出
- 迅速でユニバーサルな2ステッププロトコール
- 5x マスターミックスでサンプル添加量を増量でき感度を増大
QuantiTect Virus Kit は配列特異的なプローブを用いた1ステップマルチプレックスRT-PCRにより、最高4種類のウイルス核酸を高感度に検出するため特別にデザインされました。マルチプレックスアッセイでも、感度を損なうことなく複数のウイルスRNA/DNA とインターナルコントロールを検出できます。添付の5x マスターミックスにはHotStarTaq Plus DNA Polymeraseが含まれています。濃縮されているので、添加するサンプルの量を増やせます。QuantiTect Virus RT Mix は、ウイルスRNAの高感度な検出のために至適化されたSensiscript Reverse Transcriptaseをユニークな配合で含んでいます。2種類のキットフォーマットが入手可能です(蛍光補正のためにROX色素が必要なサイクラー用のQuantiTect Virus Kitとその他のサイクラー用のQuantiTect Virus +ROX Vial Kit)。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
en-US
|
Product
|
Cat. no.
|
List price:
|
|
|
QuantiTect Virus Kit (50)
Trial kit for 50 x 50 µl reactions: QuantiTect Virus Master Mix (contains ROX dye), QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
|
211011
|
|
|
|
QuantiTect Virus Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: QuantiTect Virus Master Mix (contains ROX dye), QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
|
211013
|
|
|
|
QuantiTect Virus Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: QuantiTect Virus Master Mix (contains ROX dye), QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
|
211015
|
|
|
|
QuantiTect Virus +ROX Vial Kit (50)
Trial kit for 50 x 50 µl reactions: QuantiTect Virus NR Master Mix (without ROX dye), ROX Dye Solution, QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
|
211031
|
|
|
|
QuantiTect Virus +ROX Vial Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: QuantiTect Virus NR Master Mix (without ROX dye), ROX Dye Solution, QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
|
211033
|
|
|
|
QuantiTect Virus +ROX Vial Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: QuantiTect Virus NR Master Mix (without ROX dye), ROX Dye Solution, QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
|
211035
|
|
|
QuantiTect Virus Kits are intended for molecular biology applications. These products are not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
Unambiguous determination of CT values over a wide dynamic range.|Reliable detection of viral RNA over a wide linear range.|QIAGEN multiplex kits.|Unique PCR buffer.|Improved detection of low amounts of viral RNA.|Reliable dilution and storage of RNA standards.|
Serial dilutions of bovine viral diarrhea virus (BVDV) RNA, as indicated, were amplified and analyzed using the QuantiTect Virus Kit. The steep sigmoidal curves enable accurate CT value determination, even at low template amounts (10 copies/μl). [A] Detection of BVDV1 RNA. [B] Detection of BVDV2 RNA. NTC: No template control.|Viral RNA was diluted in serial fivefold dilutions and amplified in duplex with an internal control using the QuantiTect Virus Kit. [A] Amplification plot of the viral targets. [B] Amplification plot of the internal control.|The QuantiTect Virus Kit provides a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).|[A] NH4+ ions prevent nonspecific primers from annealing to the template. [B] Synthetic factor MP, an innovative PCR additive, increases the local concentration of primers and probes at the template. Together with K+ and other cations, synthetic factor MP stabilizes specifically bound primers and probes, allowing efficient primer extension by HotStarTaq Plus DNA Polymerase.|Viral RNA was diluted in serial fivefold dilutions and amplified in duplex with an internal control using the QuantiTect Virus Kit (see previous figure "Reliable detection of viral RNA over a wide linear range") or kits from Suppliers AII and I. The QuantiTect Virus Kit provided much higher sensitivity than the other reagents tested, enabling reliable analysis of unknown samples. ND: Not detected after 50 PCR cycles.|Serial tenfold dilutions of RNA standards (in vitro transcribed RNA) were prepared using either QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer or RNase-free water, as indicated. These dilutions were used as template in one-step RT-PCR either directly (0 test) or after storage for 2 or 4 weeks at -20°C. Using QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer resulted in lower CT values and improved stability of the standards.|
Performance
QuantiTect Virus Kitsを用いて増幅すると、希釈範囲にわたってシャープなS字曲線を示し、テンプレートが少量でも高いCT 値をとります(図 "幅広いダイナミックレンジで明確なCT 値を測定可能")。その結果、リアルタイムPCR におけるウイルス核酸定量で正確な CT 値の決定が可能です。
マルチプレックスアッセイにより、感度を損なうことなく複数のウイルスRNAやDNA ターゲットおよびインターナルコントロールの幅広い範囲で直線性のある検出が可能です(図 "幅広い範囲で直線性のあるウイルスRNA 検出"および"従来のマルチプレックスよりも低濃度でウイルスRNAを検出")。
キットに同梱のQuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer は、希釈中および反応セットアップ中にRNAやDNAスタンダードを安定化し、チューブやピペットチップの様なプラスチック表面への核酸の吸着を防ぎます。このバッファーは、ウイルス核酸定量のためのスタンダード用検体の信頼できる希釈を可能にし、CT 値が低値から高値まで幅広い範囲で直線性のある測定を実現するとともに、スタンダード用検体の劣化のない長期保存を保証します(図 "RNAスタンダードの正確な希釈および保存")。
Principle
QuantiTect Virus Kit は、シングル/マルチプレックスアッセイあるいは1ステップRT-PCRで初回実験からウイルス核酸を高感度に検出します(フローチャート"QIAGEN multiplex kits)。至適化されたマスターミックスにより、マルチプレックスPCR反応産物は、対応するシングルPCR反応産物と同じ効率と感度で増幅されます。
別々の反応ではなく同一反応内でコントロール遺伝子と標的遺伝子を増幅することで、手作業によるエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が高くなります。QuantiTect Virus Bufferに入っている画期的な合成添加剤Factor MPと、K+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率を実現します(図 "ユニークなPCRバッファー")。さらに、Sensiscript Reverse Transcriptaseの独自の配合により、ウイルスRNAの高感度逆転写を実現し、また、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseにより厳密なホットスタートが可能になり、非特異的産物の形成を防ぎます。
| 5x QuantiTect Virus Master Mix |
濃縮マスターミックス |
高感度な病原体検出用に高濃縮かつ至適化済み |
高濃度マスターミックスのためテンプレート量を増やし感度を高めることが可能 |
| HotStarTaq Plus DNA Polymerase |
95℃、5分の活性化 |
室温での定量PCRのセットアップ |
| QuantiTect Virus Buffer |
NH4+イオンおよび K+イオンの配合バランス |
特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果 |
| 合成添加剤Factor MP |
同一チューブで4遺伝子まで信頼できるマルチプレックス解析が可能 |
| 付属のキット構成 |
QuantiTect Virus RT Mix |
ユニークな組成のSensiscript Reverse Transcriptase |
ウイルスRNAの高感度検出用に至適化済み |
| QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer |
核酸スタンダードの希釈および保存に最適な独自のバッファー組成 |
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Bufferは、反応セットアップ中における標準曲線用の連続希釈RNA/DNAサンプルを安定化し、チューブやピペットチップのようなプラスチック表面への核酸の吸着を防ぐ |
Procedure
QuantiTect Virus Kitsは、配列特異的プローブを用いたウイルス核酸(RNA/DNA)および内部コントロールの高感度なリアルタイムPCR解析を実現します。逆転写反応「あり」「なし」のどちらも可能であり、標的のRNA、DNA、あるいはRNAおよびDNAの両方を検出するマルチプレックスアッセイを柔軟に設計できます。ハンドブックに記載されているプロトコールに従えば、迅速で正確な結果が得られます。
マスターミックス中にROX passive reference dyeが入ったキットまたは入っていないキットをお求めいただけます(表を参照)。
| マスターミックスに添加済み |
QuantiTect Virus Kit |
Applied Biosystems 7500以外のApplied Biosystemsの全てのサイクラー |
| 別チューブで添付 |
QuantiTect Virus +ROX Vial Kit |
Applied Biosystems 7500 およびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent、その他の会社のサイクラー |
ウイルス検出などの用途での迅速で高感度な1ステップのエンドポイントRT-PCRアプリケーション用には、QIAGEN OneStep RT-PCR Kit を推奨します。
Applications
QuantiTect Virus Kit は、ウイルスDNA/RNAおよびインターナルコントロール検出のために配列特異的なプローブを用いて高感度なシングル/マルチプレックスのリアルタイムPCRあるいは1ステップリアルタイムRT-PCRを実現します。本キットはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche(キャピラリー式サイクラーを除く)、Agilent社製を含む様々なリアルタイムサイクラー上で使用できます。
|
|
|
|
For highly sensitive real-time singleplex or multiplex PCR or one-step RT-PCR using sequence-specific probes for detection of viral DNA and RNA and internal controls
|
Show details
|
|
|
|
|
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
|
View
|
Images
Unambiguous determination of CT values over a wide dynamic range.
Serial dilutions of bovine viral diarrhea virus (BVDV) RNA, as indicated, were amplified and analyzed using the QuantiTect Virus Kit. The steep sigmoidal curves enable accurate CT value determination, even at low template amounts (10 copies/μl). [A] Detection of BVDV1 RNA. [B] Detection of BVDV2 RNA. NTC: No template control.
Reliable detection of viral RNA over a wide linear range.
Viral RNA was diluted in serial fivefold dilutions and amplified in duplex with an internal control using the QuantiTect Virus Kit. [A] Amplification plot of the viral targets. [B] Amplification plot of the internal control.
QIAGEN multiplex kits.
The QuantiTect Virus Kit provides a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).
Unique PCR buffer.
[A] NH4+ ions prevent nonspecific primers from annealing to the template. [B] Synthetic factor MP, an innovative PCR additive, increases the local concentration of primers and probes at the template. Together with K+ and other cations, synthetic factor MP stabilizes specifically bound primers and probes, allowing efficient primer extension by HotStarTaq Plus DNA Polymerase.
Improved detection of low amounts of viral RNA.
Viral RNA was diluted in serial fivefold dilutions and amplified in duplex with an internal control using the QuantiTect Virus Kit (see previous figure "Reliable detection of viral RNA over a wide linear range") or kits from Suppliers AII and I. The QuantiTect Virus Kit provided much higher sensitivity than the other reagents tested, enabling reliable analysis of unknown samples. ND: Not detected after 50 PCR cycles.
Reliable dilution and storage of RNA standards.
Serial tenfold dilutions of RNA standards (in vitro transcribed RNA) were prepared using either QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer or RNase-free water, as indicated. These dilutions were used as template in one-step RT-PCR either directly (0 test) or after storage for 2 or 4 weeks at -20°C. Using QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer resulted in lower CT values and improved stability of the standards.
|