QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit

遺伝子発現解析のためのSYBR Green I を用いた1 ステップリアルタイム定量RT-PCR

  • 1ステップRT-PCRでの高い特異性
  • 発現量の低い転写物を確実に検出
  • テンプレートの数段階の対数希釈範囲で正確な定量
  • 反応およびサイクリング条件の至適化不要
QuantiTect SYBR Green RT-PCR KitはSYBR Green I検出を用いた1ステップリアルタイムRT-PCRで特異的にRNAターゲットを定量します。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、RNAターゲットのリアルタイム定量を高い特異性と感度で定量します。dNTP MixはdUTPを含み、オプションのUNG処理ができます。QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitも、様々なRNAテンプレート量での効率的かつ高感度な逆転写に最適なRTミックスを備えています。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
製品名 Cat. no. List price:
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix, 100 µl QuantiTect RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204243
¥101,000
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix, 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204245
¥403,000

QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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1ステップRT-PCR|特異性の高い増幅|1ステップおよび2ステップRT-PCRが類似した結果|特異的なプライマーアニーリング|
QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit は面倒で時間のかかる反応条件の至適化が不要。プライマーとテンプレートを即使用可能なRT-PCRマスターミックスに添加するだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーで反応を開始できる。|他社のDNAポリメラーゼと比較した結果、ユニークなバッファーと組み合わせたHotStarTaq DNA Polymeraseのみが497 bp フラグメントを特異的に増幅させた(1 µgのヒトゲノムDNAに添加した50 コピーのHIV-pol-遺伝子コンストラクトからのフラグメント)。M:マーカー。|HeLa細胞からのトータルRNA(10 ng~100 pg)あるいは匹敵する量のcDNAを、ヒトMAPK14用QuantiTect Primer Assay および表記のキットを用いて解析した。1ステップおよび2ステップRT-PCRで同等のCT 値が得られた。|バランスの取れたKCl および(NH4)2SO4 の組み合わせは、PCRテンプレートへのプライマーの特異的なアニーリングを促進する。K+ は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+ は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|
パフォーマンス
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitは、様々なRNAテンプレート量での効率的かつ高感度なcDNA 合成を実現するユニークな逆転写酵素ブレンドを含んでおり、広範囲にわたって直線性のある特異的定量を可能にします(図"1ステップおよび2ステップRT-PCRが類似した結果")。HotStarTaq DNA Polymeraseは、他のポリメラーゼに比較して厳密なホットスタートを実現することで、PCR反応の特異性をさらに高めます(図"特異性の高い増幅")。
原理

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitsは、SYBR Green I を使用するRNAターゲットの高特異的かつ高感度なリアルタイム定量に最適かつ即使用可能なマスターミックスを含んでいます。このマスターミックスのSYBR Green I 蛍光色素によって、標的特異的な標識プローブを合成する必要もなく、多くの異なるターゲットを分析することが可能になります。PCR 用バッファー中のK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率を実現します(図 “特異的なプライマーアニーリング”)。さらに、HotStarTaq DNA Polymeraseが、厳密なホットスタートを実現して非特異的産物の形成を防ぐ一方で、逆転写酵素の最適な混合が、様々な量のRNA テンプレートからcDNAを合成することを可能にします。

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master MixもdUTPを含んでいるので、uracil-N-glycosylase(UNG)による前処理をPCR開始前に行なうことができます。従って、混入しているPCR産物がその後のPCR反応に影響を与えることはありません。

2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitの成分
成分 特長 利点
HotStarTaq DNA Polymerase 95℃、15分の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Buffer NH4+イオンとK+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
dNTP Mix 一部dTTPの代わりにdUTPを含むので、PCR産物にコンタミが予想される場合、オプションのUNG処理が可能 PCR産物のキャリーオーバーによるコンタミをオプションのUNG処理により除去
SYBR Green I 色素 ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 高感度な定量
ROX 色素 Applied Biosystems およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正 ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
Omniscript Reverse TranscriptaseおよびSensiscript Reverse Transcriptase RNAに対する高い親和性を有する酵素の特別な混合 複雑な二次構造のRNAでも転写可能
操作手順

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit は面倒で時間のかかる反応条件の至適化が不要です。プライマーおよびテンプレートを即使用可能なRT-PCRマスターミックスに添加するだけで、反応を開始することができます(フローチャート “1ステップRT-PCR”)。リアルタイムサイクラーに関する迅速かつ正確な結果を得るために、ハンドブックに記載されているプロトコールに従ってください。PCR 開始前にuracil-N-glycosylase(UNG)で前処理することにより、PCR 増幅産物のコンタミは分解され、続いて行なうPCR に影響を与えません。

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kits と QuantiTect Primer Assays を組み合わせることにより、非常に特異性の高い遺伝子発現解析結果が得られます。ヒト、マウス、ラット、その他の生物種からの転写物解析のためのバイオインフォマティックス検証済みのプライマーセットで、GeneGlobeポータルサイトで簡単にオーダーできます。

アプリケーション

QuantiTect SYBR Green RT-PCR KitはRNAターゲットの遺伝子発現解析に使用できます。QuantiTect SYBR Green RT-PCR KitはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、RocheおよびAgilent社製などの市販されているほとんどの装置に対応します。Rotor-Gene Q および他のRotor-Gene サイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に開発されたRotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of RNA targets
Reaction type Real-time and one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQ
33
FAQ ID -1056
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キットハンドブック
3
For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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For quantitative, real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I
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SYBR Green I を用いたリアルタイム定量1ステップRT-PCR 用
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MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
PCR and two-step RT-PCR.
1ステップRT-PCR
QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit は面倒で時間のかかる反応条件の至適化が不要。プライマーとテンプレートを即使用可能なRT-PCRマスターミックスに添加するだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーで反応を開始できる。
Highly specific amplification.
特異性の高い増幅
他社のDNAポリメラーゼと比較した結果、ユニークなバッファーと組み合わせたHotStarTaq DNA Polymeraseのみが497 bp フラグメントを特異的に増幅させた(1 µgのヒトゲノムDNAに添加した50 コピーのHIV-pol-遺伝子コンストラクトからのフラグメント)。M:マーカー。
Comparable results in one-sep and two-step RT-PCR on the LightCycler 2.0.
1ステップおよび2ステップRT-PCRが類似した結果
HeLa細胞からのトータルRNA(10 ng~100 pg)あるいは匹敵する量のcDNAを、ヒトMAPK14用QuantiTect Primer Assay および表記のキットを用いて解析した。1ステップおよび2ステップRT-PCRで同等のCT 値が得られた。
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
特異的なプライマーアニーリング
バランスの取れたKCl および(NH4)2SO4 の組み合わせは、PCRテンプレートへのプライマーの特異的なアニーリングを促進する。K+ は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+ は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。