QuantiTect SYBR® Green PCR Kits

SYBR Greenを用いたリアルタイムPCRおよび2ステップRT-PCR用

  • ホットスタートの導入により高いPCR 特異性を実現
  • 発現量の低い転写物を確実に検出
  • テンプレートの数段階の対数希釈範囲で正確な定量
  • UNG (uracil-N-glycosylase) 添付あるいは未添付のキットを選択可能
  • 反応およびサイクリング条件の至適化不要

QuantiTect SYBR Green PCR Kit はSYBR Green I検出を用いたリアルタイムPCRおよび2ステップリアルタイムRT-PCRで高感度にgDNAおよびcDNAターゲットを定量します。ホットスタートと独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、gDNAおよびcDNAターゲットのリアルタイム定量を高い特異性と感度で定量します。dNTP MixはdUTP を含み、オプションのUNG処理ができます。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

製品名 Cat. no. List price:
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (40)
Trial kit for 40 x 50 µl reactions: 1 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2 ml RNase-Free Water
204141
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QuantiTect SYBR Green PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204143
¥54,500
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 20 ml RNase-Free Water
204145
¥201,000
QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 100 µl UNG Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204163
¥58,500

QuantiTect SYBR® Green PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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2ステップRT-PCR|特異性の高い増幅|ABI PRISM 7700で非常に感度の高い定量|幅広い範囲で直線性のある高感度定量|特異性と感度の高い定量|高感度のリアルタイムPCR|特異的なプライマーアニーリング|
QuantiTect SYBR® Green PCR Kitを用いると、手間と時間のかかる反応条件の至適化を行なう必要がない。即使用可能なPCRマスターミックスにテンプレートとプライマーを添加するだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーを用いて反応を開始できる。|他社のDNAポリメラーゼと比較した結果、ユニークなバッファーと組み合わせたHotStarTaq DNA Polymeraseのみが497 bp フラグメントを特異的に増幅した(1 µgのヒトゲノムDNAに添加した50 コピーのHIV-pol-遺伝子コンストラクトからのフラグメント)。M:マーカー。|トウモロコシから精製したゲノムDNA 50 ng(トウモロコシはCFTR遺伝子を含んでいない)を含む反応液にヒトCFTR遺伝子フラグメントを組み込んだプラスミドをテンプレートとして5~1 x106コピー数添加して、ABI PRISM 7700を用いて増幅した。CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)はcAMP依存性塩素イオンチャンネルである。NTC:No Template Control。|ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトBAX用のQuantiTect Primer Assayと表記のキットを用いてRotor-Gene 3000で解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応では蛍光強度の上昇が見られないことは、QuantiTect Primer Assayによる特異的な検出を実証している。NTC:No Template Control。Norm.Fluoro.:正規化された蛍光。|ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトIL8用のQuantiTect Primer Assay と表記のキットをApplied Biosystems 7500を用いて解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応で蛍光強度の上昇が見られないことにより、QuantiTect SYBR® Green PCR KitとQuantiTect Primer Assayの組み合わせが特異的な検出であることを実証している。NTC:No Template Control。|UNG 前処理とSYBR® GreenベースのリアルタイムPCR は、[A]QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit あるいは[B] R 社のキットとUNG を用いて行なった。ヒト白血球cDNA の10倍段階希釈液(100 pg ~100 ng)とMyc(がん原遺伝子)用QuantiTect Primer Assay を用いてLightCycler 480 上でduplicateで反応を行なった。融解曲線解析(挿入図)は、R 社よりもQuantiTect Kit を用いた方がPCR 特異性の高いことを示した。|バランスの取れたKCl および(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーのPCRテンプレートへの特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|
パフォーマンス

QuantiTect SYBR Green PCRは幅広い範囲で直線性のある特異性の高い定量を行ないます(図“幅広い範囲で直線性のある高感度定量”)。HotStarTaq DNA Polymeraseは他のポリメラーゼと比べて非常に厳密なホットスタートを実現することによりPCR反応の特異性がさらに増加します(図“特異性の高い増幅”)。ユニークな組成のPCRバッファーおよびHotStarTaq DNA Polymeraseにより、わずか5コピーの低発現量の転写物でさえも正確に検出され定量が可能です(“高感度定量”)。QuantiTect Reverse Transcription KitとQuantiTect Primer Assayを組み合わせて、QuantiTect SYBR Green PCR Kitは感度と信頼性の高い結果を実現します(図“特異性と感度の高い定量”)。

QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit に添付の特別に至適化されたUNG 溶液と実証済みのPCR マスターミックスの組み合わせは、PCR 産物のキャリーオーバーを効果的に回避し、ターゲット配列の定量が確実に行なえます(図 “高感度のリアルタイムPCR”)。

原理

QuantiTect SYBR Green PCR Kit には、SYBR Green I を用いたcDNAターゲットの特異的で感度の高いリアルタイム定量用に、至適化済みで即使用可能なマスターミックスが添付されています。マスターミックス中の蛍光色素SYBR Green Iは、ターゲットに特異的な標識プローブを合成しなくても多数の異なるターゲットを解析できます。PCRバッファー中のK+ および NH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率を実現します(図“特異性の高いプライマーアニーリング”)。さらに、バッファーには他のポリメラーゼと比べて非常に厳密なホットスタートを実現するHotStarTaq DNA Polymeraseが入っています。

QuantiTect SYBR Green PCR Master MixはまたdUTPを含み、PCR 開始前にUNG(uracil-N-glycosylase) で前処理することにより、PCR 増幅産物のコンタミは分解され、続いて行なうPCR に影響を与えません。

2x QuantiTect SYBR Green PCR Kitの成分
成分 特長 利点
HotStarTaq DNA Polymerase 95℃、15分の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiTect SYBR Green PCR Buffer NH4+とK+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
dNTPミックス 一部dTTPの代わりにdUTPを含むので、PCR産物にコンタミが予想される場合、オプションのUNG処理が可能 PCR産物のキャリーオーバーによるコンタミをオプションのUNG処理により除去
SYBR Green I 色素 ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 高感度な定量
ROX 色素 Applied Biosystems およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正 ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
操作手順

QuantiTect SYBR Green PCR Kit を用いると、手間と時間のかかる反応条件の至適化を行なう必要がありません。プライマーとDNAテンプレートを即使用可能なPCRマスターミックスに添加するだけで、反応を開始することができます(フローチャート “2ステップRT-PCR”)。ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーで迅速かつ正確な結果が得られます。必要に応じて、前の反応液からのPCR 産物の混入を防ぐために、反応液をuracil-N-glycosylase(UNG)で前処理することができます。 

2ステップリアルタイムRT-PCRで良好な結果を得るためには、QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを合成することをお薦めします。ゲノムDNAの除去を組み合わせて、わずか20分で迅速なcDNA合成を実現します。

QuantiTect SYBR Green PCR Kits と QuantiTect Primer Assays を組み合わせることにより、非常に特異性の高い遺伝子発現解析結果が得られます。ヒト、マウス、ラット、その他の生物種からの転写物検出のためのバイオインフォマティックス検証済みのプライマーセットが入手可能です。QuantiTect Primer Assays は GeneGlobeポータルサイトで簡単にオーダーできます。 

アプリケーション

QuantiTect SYBR Green PCR Kit はcDNAの遺伝子発現解析およびgDNA定量解析に使用できます。QuantiTect SYBR Green PCR KitはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent社製を含むほとんどのリアルタイムサイクラーで使用可能です。 Rotor-Gene Q および他のRotor-Gene サイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に開発されたRotor-Gene SYBR Green PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets
Reaction type Real-time PCR and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type DNA, cDNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQ
39
FAQ ID -1056
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FAQ ID -1083
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-20
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FAQ ID -729
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FAQ ID-751
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FAQ ID -849
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FAQ ID -850
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キットハンドブック
4
For use with QuantiTect PCR Kits to eliminate carryover of PCR products
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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For quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I
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SYBR Green I を用いたリアルタイム定量PCRおよび2ステップRT-PCR用
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クイックスタートプロトコール
1
MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
PCR and two-step RT-PCR.
2ステップRT-PCR
QuantiTect SYBR® Green PCR Kitを用いると、手間と時間のかかる反応条件の至適化を行なう必要がない。即使用可能なPCRマスターミックスにテンプレートとプライマーを添加するだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーを用いて反応を開始できる。
Highly specific amplification.
特異性の高い増幅
他社のDNAポリメラーゼと比較した結果、ユニークなバッファーと組み合わせたHotStarTaq DNA Polymeraseのみが497 bp フラグメントを特異的に増幅した(1 µgのヒトゲノムDNAに添加した50 コピーのHIV-pol-遺伝子コンストラクトからのフラグメント)。M:マーカー。
Highly sensitive quantification on the ABI PRISM 7700.
ABI PRISM 7700で非常に感度の高い定量
トウモロコシから精製したゲノムDNA 50 ng(トウモロコシはCFTR遺伝子を含んでいない)を含む反応液にヒトCFTR遺伝子フラグメントを組み込んだプラスミドをテンプレートとして5~1 x106コピー数添加して、ABI PRISM 7700を用いて増幅した。CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)はcAMP依存性塩素イオンチャンネルである。NTC:No Template Control。
Specific quantification over a wide linear range on the Rotor-Gene 3000.
幅広い範囲で直線性のある高感度定量
ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトBAX用のQuantiTect Primer Assayと表記のキットを用いてRotor-Gene 3000で解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応では蛍光強度の上昇が見られないことは、QuantiTect Primer Assayによる特異的な検出を実証している。NTC:No Template Control。Norm.Fluoro.:正規化された蛍光。
Specific and sensitivie quantification on the Applied Biosystems 7500.
特異性と感度の高い定量
ヒト白血球cDNAの希釈液からヒトIL8用のQuantiTect Primer Assay と表記のキットをApplied Biosystems 7500を用いて解析した。融解曲線分析において単一ピークが検出され、NTC反応で蛍光強度の上昇が見られないことにより、QuantiTect SYBR® Green PCR KitとQuantiTect Primer Assayの組み合わせが特異的な検出であることを実証している。NTC:No Template Control。
High specificity in real-time PCR.
高感度のリアルタイムPCR
UNG 前処理とSYBR® GreenベースのリアルタイムPCR は、[A]QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit あるいは[B] R 社のキットとUNG を用いて行なった。ヒト白血球cDNA の10倍段階希釈液(100 pg ~100 ng)とMyc(がん原遺伝子)用QuantiTect Primer Assay を用いてLightCycler 480 上でduplicateで反応を行なった。融解曲線解析(挿入図)は、R 社よりもQuantiTect Kit を用いた方がPCR 特異性の高いことを示した。
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
特異的なプライマーアニーリング
バランスの取れたKCl および(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーのPCRテンプレートへの特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。