QuantiTect Primer Assays

SYBR® Green 検出による遺伝子発現解析のための2ステップおよび1ステップリアルタイム定量RT-PCR用

  • ゲノムワイドなデザイン済みプライマーで良好な実験結果
  • ほぼ100%のPCR 効率で信頼できる相対定量
  • 高い感度と特異性
  • 幅広い濃度範囲で正確な定量
  • SYBR Green 検出で時間と経費を節約

QuantiTect Primer Assay は、バイオインフォマティクスで検証済みのゲノムワイドなプライマー・セットで、サイクラーを選ばないSYBR Green ベースのリアルタイムRT-PCR に使用できます。ヒト、ラット、マウス、その他の種からの全遺伝子に対応するアッセイが入手可能です。各アッセイは、遺伝子特異的なforward とreverse プライマーの凍結乾燥ミックスとしてお届けし、簡単に溶解して10倍濃度のアッセイ溶液が得られます(リアルタイムRT-PCR 用反応試薬は別途にご注文ください)。SYBR Green 検出用のQuantiFast、QuantiTect、Rotor-Gene、FastLane Kit と組み合わせて使用する場合、QuantiTect Primer Assay はプローブを用いた検出に匹敵する特異性と感度の高いリアルタイムRT-PCRを実現します。

製品名 Cat. no. List price:
QuantiTect Primer Assay (200)
For 200 x 50 µl reactions or 400 x 25 µl reactions: 10x QuantiTect Primer Assay (lyophilized) supplied in single tube
Varies
¥20,500
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QuantiTect Primer Assays は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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卓越した感度のリアルタイムRT-PCR|再現性のあるリアルタイムRT-PCR|リアルタイムRT-PCR アッセイの開発に必要な時間を節約|
[A] QuantiTect Primer Assay とQuantiTect SYBR® Green PCR Kit を用いて、あるいは [B] AII社のプローブを用いたアッセイとリアルタイムPCR キットを用いて、ヒト白血球cDNA(1 ng)のMAPK1(プロテインキナーゼ)およびIL6(サイトカイン)をduplicate で定量した。QuantiTect Primer Assay はプローブを用いたアッセイよりもCT 値が低いことから感度の高いことが、また融解曲線解析でシングルピークが得られることから特異性の高いことが示された。|[A] IL8(ケモカイン)用のQuantiTect Primer Assay とQuantiFast SYBR® Green PCR Kit を用いて、様々な量の白血球cDNA をduplicate で解析した。テンプレートなしのコントロール(NTC)も行なった(上昇していない曲線)。[B] 融解曲線解析は高いPCR 特異性を証明している。|QuantiTect Primer Assaysはホームメードの方法に比べて大幅に時間を節約する。|
パフォーマンス

QuantiTect Primer Assay は、RNA 転写物の定量を幅広い濃度範囲において高い再現性で実現します(図 “再現性のあるリアルタイムRT-PCR”の [A])。QuantiFast SYBR Green Kits または弊社のその他のSYBR Green キットを用いてアッセイを行なった場合のみ、正確な定量が保証されています。これらのキットはPCR アーティファクトの形成を回避します(図 “再現性のあるリアルタイムRT-PCR”の[B])。

QuantiFast、QuantiTect、Rotor-Gene、FastLane SYBR Green Kits(2 ステップあるいは1 ステップRT-PCR 用マスターミックス)と組み合わせて使用すると、プローブを用いたアッセイに比べて小さいCT 値が得られます(図 “StepOnePlus において卓越した感度のリアルタイムRT-PCR”)。これはキットが高いPCR 特異性を持ち、各PCR 産物に大量のSYBR Green 色素が結合することに起因します。発現量の低い転写物でも高感度定量が可能です。

原理
QuantiTect Primer Assays ではリアルタイムRT-PCR アッセイの開発や検証が不要です(図 “リアルタイムRT-PCR アッセイの開発に必要な時間を節約”)。これらは1ステップおよび2ステップ定量RT-PCRのどちらでも使用いただけます。GeneGlobeポータルサイトで、ヒト、ラット、マウス、ショウジョウバエ、シロイヌナズナ、その他の種からの遺伝子に対応するアッセイが検索・注文できます。QuantiTect Primer AssayをQuantiFast、QuantiTect、Rotor-GeneあるいはFastLane SYBR Green Kitと組み合わせて使用することで、確実な結果が得られます(2 ステップあるいは1 ステップRT-PCR 用マスターミックス)。
操作手順

各 QuantiTect Primer Assay は、遺伝子特異的なforwardおよびreverseプライマーの凍結乾燥ミックスとしてお届けします。プライマーをTE, pH 8.0で溶解し10xのプライマー溶液を調製します。これをSYBR Green検出用のQuantiFast、QuantiTect、Rotor-Gene、FastLane Kit に添付されているマスターミックスに加えます。プライマーを添加したマスターミックスをPCRチューブあるいはウェルに分注し、その後、個々のテンプレートを加えます。

QuantiTect Primer Assaysは、表に記載されている以下のようなキットと組み合わせて使用すると、遺伝子発現解析において良好な結果が得られます。

QuantiTect Primer Assaysと併せて使用する2 ステップおよび1 ステップ定量RT-PCRキット
2 ステップ定量RT-PCR 1ステップ定量RT-PCR
QuantiFast SYBR Green PCR Kit QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit
Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit
QuantiTect SYBR Green PCR Kit QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit

QuantiTect Primer Assayは可能な限りRNA のみを検出するようにデザインされています。ゲノムDNA の検出が避けられないアッセイでは、QuantiTect Reverse Transcription Kit あるいは FastLane Cell cDNA Kit を用いてcDNA を調製します。両キットともに、cDNA 合成にゲノムDNA コンタミの除去が組み込まれています。

ネーミング

選択した遺伝子に対応する入手可能なQuantiTect Primer Assayを区別するために、製品名内の遺伝子記号の後に数字がつけられています。詳細はGeneGlobe FAQをご覧ください。

アプリケーション

QuantiTect Primer AssaysはSYBR Green検出による1ステップおよび2ステップqRT-PCRを用いた遺伝子発現解析用アッセイです。この組み合わせは、次のようなアプリケーションに最適です:

  • siRNAによる遺伝子ノックダウンの検証
  • マイクロアレイ結果の検証
  • ハイスループットスクリーニング

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FAQ
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キットハンドブック
2
For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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ゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ(SYBR Green検出)用
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技術情報
1
QuantiTect Primer Assays for housekeeping genes can be used as endogenous controls in qRT-PCR.
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MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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安全データシート
1

画像
Superior sensitivity in real-time RT-PCR on the StepOnePlus.
卓越した感度のリアルタイムRT-PCR
[A] QuantiTect Primer Assay とQuantiTect SYBR® Green PCR Kit を用いて、あるいは [B] AII社のプローブを用いたアッセイとリアルタイムPCR キットを用いて、ヒト白血球cDNA(1 ng)のMAPK1(プロテインキナーゼ)およびIL6(サイトカイン)をduplicate で定量した。QuantiTect Primer Assay はプローブを用いたアッセイよりもCT 値が低いことから感度の高いことが、また融解曲線解析でシングルピークが得られることから特異性の高いことが示された。
Reproducible real-time RT-PCR on the iCycler iQ.
再現性のあるリアルタイムRT-PCR
[A] IL8(ケモカイン)用のQuantiTect Primer Assay とQuantiFast SYBR® Green PCR Kit を用いて、様々な量の白血球cDNA をduplicate で解析した。テンプレートなしのコントロール(NTC)も行なった(上昇していない曲線)。[B] 融解曲線解析は高いPCR 特異性を証明している。
Time savings in development of real-time RT-PCR assays.
リアルタイムRT-PCR アッセイの開発に必要な時間を節約

QuantiTect Primer Assaysはホームメードの方法に比べて大幅に時間を節約する。