QuantiFast Probe PCR Kits

配列特異的プローブを用いた高速なリアルタイムPCRおよび2ステップqRT-PCR

  • 低コピーターゲットでも高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量を正確に検出
  • 時間を最大60%まで短縮し迅速な結果
  • 至適化済みで即使用可能なマスターミックスにより、至適化せずに正確な結果を実現
  • 標準的および高速サイクラーに対応する1種類のサイクリングプロトコール
QuantiFast Probe PCR Kitsは配列特異的なプローブを用いてリアルタイムPCRおよび2ステップRT-PCRにより迅速かつ高感度にgDNAおよびcDNAターゲットを定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みのマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなく標準的なサイクラーでも、より短時間でリアルタイムPCRを実現します。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、至適化の必要はなく、全てのリアルタイムサイクラーで高感度定量PCRを実現します。キットフォーマットは2種類あり、蛍光補正のためにROXが必要なサイクラー用QuantiFast Probe PCR Kitおよびその他のサイクラー用のQuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kitです。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
製品名 Cat. no. List price:
QuantiFast Probe PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water
204254
¥55,000
QuantiFast Probe PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204256
¥254,000
QuantiFast Probe PCR Kit (4000)
For 4000 x 25 µl reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204257
¥355,000
QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (without ROX dye), 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204354
¥55,000
QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water
204356
¥244,000

QuantiFast Probe PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


  • Main Image Navi
PCR時間を顕著に短縮|幅広いダイナミックレンジと高感度を実現|感度を損なわずにより迅速な結果を実現|高感度な2ステップRT-PCR|107倍希釈したテンプレートの検出|特異的なプライマーアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
QuantiFast Probe Kitsは、標準的なサイクラーで2ステップリアルタイムRT-PCRのトータルPCR時間を最大60%短縮(40サイクル実施、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。
|QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kitにより、Mastercycler ep realplexを用い、2ステップPCRで93%のPCR効率で幅広いテンプレート量からの正確な遺伝子発現解析が実現された。ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液とユビキチン(調節タンパク質)用のPrimer ExpressでデザインしたTaqManアッセイを用いてduplicateで反応(25 µl)を行なった。NTC:No Template Control。|ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液(0.01 ng~100 ng)とIL1RN(サイトカイン)用TaqMan Gene Expression Assaysを用いてABI PRISM 7900上でduplicateで反応を行なった。QuantiFast Kitは、Supplier AIIの標準的なサイクリングキット(標準的サイクリングプロトコールを使用)と比較してより高い感度を示し、非常に低いCT値とわずか10 pgのcDNAからの転写物の定量を実現した。|ヒト白血球cDNAの10倍段階希釈液(100 ng~0.01 ng)とPrimer ExpressでデザインしたIL8(ケモカイン)用TaqManアッセイを用いてABI PRISM 7900上で反応を行なった(triplicate)。[A] QuantiFast Kitは、[B] Supplier Iのキット(標準的なサイクリングプロトコールを使用)を使用した場合より高い感度を示し、より低いCT値とわずか0.01 ngのcDNAからの転写物の定量を実現した。|Supplier Rのb-2ミクログロブリン用プライマーとFRETプローブのセットを用いて、LightCycler 2.0によりduplicateで2ステップRT-PCR反応を行なった。QuantiFast Kitの増幅プロットは、キットが広範囲なダイナミックレンジを持つことを示している。|バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

QuantiFast Probe PCR Kitsでは、他のリアルタイムPCRキットよりも卓越した感度の高い結果が得られます(表"iCycler iQを用いた高感度な2ステップRT-PCR"および図"高感度な2ステップRT-PCR")。PCR時間が最大60%短縮され(図"PCR時間を顕著に短縮")、PCRの性能を妥協しなくてもPCR結果を速く得られます(図"感度を損なわずにより迅速な結果を実現")。従って、サンプル処理数を大幅に増やしたり、他の実験者と1台のサイクラーを効率的に共有できます。

iCycler iQを用いた高感度な2ステップRT-PCR
平均CT
ヒト白血球cDNA(ng) QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit Supplier BVのキット
100 29.13 31.13
10 32.50 34.43
1 36.15 40.00
テンプレートを含まないコントロール 40.00 40.00
Primer ExpressでデザインしたIL8(ケモカイン)用TaqManアッセイを用いてtriplicateで反応を行なった。Supplier BVのキット(高速サイクリングプロトコールを使用)と比較してQuantiFast Kitでは低いCT値が得られ、わずか1 ngのcDNAからの転写物の定量が可能である。

QuantiFast Probe PCR Kitは幅広いダイナミックレンジにわたり正確な定量を実現します(図"幅広いダイナミックレンジと高感度を実現")。テンプレートを最高107倍に希釈した溶液からでも正確な検出ができます(表"LightCycler 2.0を用いて107倍希釈したテンプレートを2ステップRT-PCRで検出"および図"107倍希釈したテンプレートの検出")。

LightCycler 2.0を用いて107倍希釈したテンプレートを2ステップRT-PCRで検出
平均CT
Human leukocyte cDNA QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit R 社Kit
100 ng 11.99 14.56
10 ng 15.54 17.99
1 ng 19.22 22.16
100 pg 22.63 25.14
10 pg 26.43 30.15
1 pg 30.02 34.43
100 fg 33.42 37.10
テンプレートを含まないコントロール 40 40.00
PCR効率 90% 80.1%
Supplier Rのβ-2ミクログロブリン用プライマーとFRETプローブのセットを用いてduplicateで反応を行なった。QuantiFast Kitは、Supplier Rのキット(高速サイクリングプロトコールを使用)と比較してCT値が低く、PCR効率が高かった。
原理

QuantiFast Probe PCR Kitでは、標準的なサイクラー、高速サイクラーともに、広範なダイナミックレンジで非常に高感度な結果が迅速に得られます。本キットは、加水分解プローブの検出(TaqManあるいはその他のダブル標識プローブなどを含む)、FRETプローブなどの全てのタイプの配列特異的プローブを使用するためにデザインされています。新規添加剤のQ-Bondを含有する特別に開発された高速PCR用バッファーにより、変性、アニーリングおよびエクステンション時間も顕著に短縮されます(図"プライマーの高速なアニーリング")。このバッファーに入っているK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率と感度を実現します(図"特異的なプライマーアニーリング")。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。

2x QuantiFast Probe PCR Kitの成分*
成分 特長 利点

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

95℃、3分間の活性化

室温での定量PCRのセットアップ

QuantiFast Probe PCR Buffer

NH4+/K+イオンの配合バランス

特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果

ユニークなQ-Bondを含む

PCR反応時間が短縮されるため迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる

ROX色素

Applied Biosystems社およびオプションのAgilent社の装置で蛍光シグナルを補正

ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTPおよびdTTP)も含む。 ROX色素はマスターミックス中に含有あるいは別包装の溶液。

操作手順

QuantiFast Probe PCR Kitは反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。テンプレートDNA、プライマー、プローブをマスターミックスに添加し、ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、全てのリアルタイムサイクラーで迅速で正確な結果が得られます。マスターミックス中にROXパッシブリファレンス色素が入ったキットまたは入っていないキットをお求めいただけ、事実上全てのリアルタイムサイクラーでの使用が可能です(表参照)。ROX濃度が至適化されているため、コピー数が少ない場合の検出でも自動データ解析を行なうことができます。

正しいQuantiFast Probe PCR Kitの選択ガイド
ROX色素Kit対応するサイクラー
マスターミックスに添加済みQuantiFast Probe PCR KitApplied Biosystems 7500以外のApplied Biosystemsの全てのサイクラー
別チューブで添付QuantiFast Probe PCR +ROX Vial KitApplied Biosystems 7500およびAgilent、Bio-Rad、Cepheid、QIAGEN、Eppendorf、Roche、その他のサイクラー

2ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るためには、QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを合成することをお薦めします。本キットは、ゲノムDNAコンタミの除去を組み合わせたcDNA合成をわずか20分で行ないます。 

QuantiFast Probe Assayは加水分解、プローブを用いた検出を利用したデザイン済みのゲノムワイドなアッセイです。QuantiFast Probe PCR Kitを使用して行なわれ、singleplex 2ステップqRT-PCRの結果が得られます。

アプリケーション

QuantiFast Probe PCR Kitは、全てのリアルタイムサイクラーで、プローブを用いたcDNAターゲットの遺伝子発現解析および定量的gDNA解析に使用できます。これには、Applied BiosystemsおよびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent社のサイクラーを含みます。Rotor-Gene Qおよび他のRotor-Geneサイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に特別に開発されたRotor-Gene Probe PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications Probe-based, real-time PCR, two-step RT-PCR
Reaction type Real-time and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type cDNA, DNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes Sequence-specific probes
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. Roche LightCycler®, Corbett Rotor-Gene, Applied Biosystems)
With or without ROX Available with ROX in master mix and with ROX as separate vial

You are not authorized to download the resource

FAQ
37
FAQ ID -1085
表示
FAQ ID -1425
表示
FAQ ID -1427
表示
FAQ ID -1428
表示
FAQ ID -1429
表示
FAQ ID -1430
表示
FAQ ID -1431
表示
FAQ ID -1432
表示
FAQ ID -1433
表示
FAQ ID -1435
表示
FAQ ID -1436
表示
FAQ ID -1437
表示
FAQ ID -1438
表示
FAQ ID -1440
表示
FAQ ID -1441
表示
FAQ ID -1442
表示
FAQ ID -1446
表示
FAQ ID -1447
表示
FAQ ID -1449
表示
FAQ ID -1452
表示
FAQ ID -1554
表示
FAQ ID -1555
表示
FAQ ID -1592
表示
FAQ ID -1697
表示
FAQ ID -1702
表示
FAQ ID -2119
表示
FAQ ID -2125
表示
FAQ ID -2362
表示
FAQ ID -2371
表示
FAQ ID -2373
表示
FAQ ID -2651
表示
FAQ ID -2682
表示
FAQ ID -539
表示
FAQ ID -589
表示
FAQ ID -729
表示
FAQ ID-751
表示
FAQ ID -784
表示
キットハンドブック
2
For fast, quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
詳細を表示
配列特異的なプローブを用いた迅速なリアルタイムPCRおよび2ステップRT-PCR 用
詳細を表示
サイエンティフィック・ポスター
1
MSDS
2
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
表示
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
表示