QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits

配列特異的なプローブを用いた遺伝子発現解析用高速1ステップマルチプレックスリアルタイム定量RT-PCR

  • 同一ウェル内で複数のターゲットRNAを高感度で検出
  • 時間を最大50％まで短縮し迅速な結果
  • 至適化実験なしに良好なマルチプレックスRT-PCRを実現
  • わずかなターゲット量の違いも正確に判別
  • リファレンス遺伝子と3種類までのターゲットを同一チューブ内で検出可能
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit は、1ステップのマルチプレックスリアルタイム定量RT-PCR により、同一チューブ中で最高4種類のRNAターゲットを高速かつ確実に定量します。特殊な割合で配合された逆転写酵素により迅速で効率的なcDNA合成を実現します。Q-bondテクノロジーと至適化済みのマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなくほとんどのサイクラーで性能を損なうことなく高速なマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを行なえます。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、最適化実験の必要なしにほとんどのサイクラーで高感度な定量RT-PCRを実現します。2種類のキットが入手できます：蛍光補正のためにROXが必要なサイクラー用QuantiFast Multiplex RT-PCR Kitおよびその他のサイクラー用のQuantiTect Multiplex RT-PCR +R Kit。マスターミックスは2～8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
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製品名 Cat. no. List price:
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
 204854
¥102,000
QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
 204954
¥102,000
QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 500 µl QuantiFast RT Mix, 1.05 ml ROX Dye Solution, 1 x 20 ml RNase-Free Water
 204956
¥447,000
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QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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RT-PCR時間を顕著に短縮|信頼性のある相対定量|Triplex とsingleplex RT-PCRで同等の結果を実現|卓越した感度の4-plex RT-PCR|プライマーの高速なアニーリング|QIAGEN multiplex kits|ユニークなバッファーにより安定かつ効率的なプライマーアニーリングを実現|
QuantiFast Multiplex Kitsは1ステップリアルタイムRT-PCRで全RT-PCR時間を最高50％まで短縮する（40サイクル；QuantiTect Multiplex Kitsと比較）。I： iCycler iQ、 L1：LightCycler 480、L2：LightCycler 2.0、A1：ABI PRISM 790、A2：Applied Biosystems 7500 Fast System、M：Mx3005P
|細胞株X を2 つの化合物で処理（YまたはZ）あるいは未処理（U）。RNA を精製し、QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit とmyogenin およびGAPDHに特異的なTaqMan Gene Expression Assay を用いて1 ステップのduplex リアルタイムRT-PCR をApplied Biosystems 7500 Fast Systemで行なった。各処理ごとに5回の独立した実験を行なった。[A]  Myogenin 発現の変化が高い精度と再現性で検出された（緑色の曲線）。ハウスキーピング遺伝子GAPDHの発現は全ての実験で類似している（青色の曲線）ので、ΔΔCT法による相対定量を用いたmyogenin 発現レベルの標準化が可能である。[B] 未処理細胞のmyogenin 発現量に対して標準化したmyogenin 発現レベルの相対的な変化は実験間で一定であることが、誤差バーが小さいことから示唆される（データ提供；Angelika Meyer, Novartis Pharma AG, Basel, Switzerland）。|[A] RPS27A（リボソームタンパク質）、[B] GAPDH（ハウスキーピング遺伝子）、[C] UBC（ハウスキーピング遺伝子）用にデザインしたTaqMan アッセイとQuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit を用いて1ステップのtriplex およびsingleplexリアルタイムRT-PCRをLightCycler 480を用いて行なった。テンプレートであるRamos 細胞のRNA（10 ng、1 ng、0.1 ng）を用いてduplicateで行なった。Triplex PCR（色つきの曲線）とsingleplex PCR（グレーの曲線）の類似するCT 値および [D] 高いPCR効率は、異なる発現量のターゲットの解析でQuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit を用いて信頼できるtriplex PCRを実現することを証明している。|QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit とPrimer Express でデザインしたTaqMan アッセイを用いて1ステップの4-plex リアルタイムRT-PCRを行なった。テンプレートとしてRamos細胞株のRNA 10 ng を用いてduplicate 反応を行なった。4つのターゲットの発現量には大きな差があるが、全て再現性よく検出された。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|QuantiFast Multiplex RT-PCR Kitsは、簡単な操作でマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、プローブ、Mg2+、Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子に比べてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイでも同様。|[A] NH4+ イオンは非特異的なプライマーのテンプレートへのアニーリングを防ぐ。[B] 画期的なPCR添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。|
パフォーマンス

QuantiFast Multiplex RT-PCR KitはRT-PCR時間を最大50％まで短縮できるため、結果がより速く得られます（図 "RT-PCR時間を顕著に短縮"）。従って、サンプル数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。別々の反応ではなく同一反応内でコントロール遺伝子と標的遺伝子を増幅することで、マニュアルでの作業によるエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が増大します（図"信頼性のある相対定量"）。QuantiFast Multiplex RT-PCR Kitに添付の特化されたマスターミックスにより、迅速なマルチプレックス反応のセットアップができ、singleplex RT-PCRデータに匹敵するマルチプレックスRT-PCR データを提供し、初めての実験でも良好な結果が得られます（図 "triplex とsingleplex RT-PCR で同等の結果を実現"）。

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit を用いると、ターゲット量のわずかな差異を明確に判別できます。本キットは、2 倍希釈しかしていないテンプレートを用いた場合でも、テンプレート中で量が大きく異なるターゲットを正確に定量できます。最高4 種類のターゲットのマルチプレックスリアルタイムPCR が性能を損なうことなく高速で行なえます（図 "卓越した感度の4-plex RT-PCR"）。

原理

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kitsでは最適化実験の必要はなく、標準サイクラーまたは高速サイクラーのどちらでも幅広いダイナミックレンジの高感度かつ迅速な結果が得られます（フローチャート "QIAGEN multiplex kits"）。特別に開発された高速PCR 用バッファーは斬新なQ-Bondを含有し、変性、アニーリングおよびエクステンション時間を顕著に短縮します（図"プライマーの高速なアニーリング"）。

別々の反応ではなく同一反応内でコントロール遺伝子と標的遺伝子を増幅することで、マニュアルでの作業によるエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が高くなります。QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer のK+ およびNH4+ イオン配合比により、プライマーの特異的なアニーリングを促進され、さらにユニークなFactor MP が特異的に結合したプライマーを安定化します（図 "ユニークなPCRバッファー"）。さらに、至適化済み逆転写酵素ミックスにより、わずか20分で効率的なにcDNAを合成できます。また、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは厳密なホットスタートが可能で、非特異的産物の形成を防ぎます。

2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Kitの成分
成分 特長 利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95℃、5分の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer NH4+ イオンおよび K+ イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
合成添加剤Factor MP 同一チューブで4遺伝子まで信頼できるマルチプレックス解析が可能
ユニークなQ-Bond を含む PCR反応時間が短縮されるため迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる
ROX色素† Applied Biosystems製装置およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正 ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
QuantiFast RT Mix RNAへのアフィニティーが高い逆転写酵素の特殊な配合 複雑な二次構造のRNAでも、わずか20分で転写可能
* dNTP Mix（dATP、dCTP、dGTPおよびdTTP）も含む† ROX色素はマスターミックス中に含有あるいは別包装の溶液
操作手順

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit は反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。テンプレートRNA、プライマープローブセットをマスターミックスに加えハンドブックのプロトコール通りに操作するだけで、どのリアルタイムサイクラーでも迅速に信頼性の高い結果が得られます。マスターミックス中にROX passive reference dye が入ったキットまたは入っていないキットをお求めいただけますので、実質的にあらゆるリアルタイムサイクラーで使用できます（表を参照）。ROX濃度が至適化されているため、コピー数が少ない場合の検出でも自動データ解析を行なえます。

正しいQuantiFast Multiplex RT-PCR Kitの選択ガイド
ROX 色素 キット 対応するサイクラー
マスターミックスに添加済み QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit Applied Biosystems 7500以外のApplied Biosystemsの全てのサイクラー
別チューブで添付 QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit Applied Biosystems 7500 および Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent、その他の会社のサイクラー
アプリケーション
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit はほとんどのリアルタイム用サーマルサイクラーで遺伝子発現解析、その他のアプリケーションに使用可能です。これには、Applied Biosystems およびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent 製サイクラーを含みます。Rotor-Gene Q および他のRotor-Gene サイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に開発されたRotor-Gene Multiplex RT-PCR Kitの使用をお勧めします。
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Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of RNA targets in a multiplex format
Reaction type Real-time one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Multiplex
SYBR Green I or sequence-specific probes Sequence-specific probes
Thermal cycler Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time PCR cyclers, Roche LightCycler 480, and Bio-Rad iCycler iQ)
With or without ROX Available with ROX in master mix or with ROX as separate vial

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キットハンドブック
2
(EN) - QuantiFast Multiplex RT-PCR Handbook
For quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR with fast cycling using sequence-specific probes
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(JA) - QuantiFast Multiplex RT-PCRプロトコールとトラブルシューティング
配列特異的なプローブを用いて高速な1ステップでのマルチプレックス・リアルタイム定量RT-PCR
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テクニカルインフォメーション
1
Overcoming the challenges of real-time, multiplex PCR - (EN)

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MSDS
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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