迅速で効率的なNGS用ライブラリー調製
  • PCR産物からワンチューブで30分以内にライブラリー調製
  • 室温での反応セットアップが可能で、一反応で自動化可能
  • イルミナNGSプラットフォームでの使用に適した、高品質でアーティファクトのないライブラリー
  • 1 ngのインプットDNAで、任意の遺伝子パネルまたはPCR産物に適合
  • シングルユースのアダプタープレートにより、コンタミや取り扱いエラーを最小限に

最速ライブラリー調製ソリューションであるQIAseq 1-Step Amplicon Library Kit を利用して、ターゲットリシークエンシングおよびアンプリコンシークエンシングアプリケーションで時間を節約できます。 エンド修復とライゲーションを組み合わせることで、この新しいキットは、QIAGEN GeneRead Targeted DNA Panel、Ampli-Seq、Tru-SeqまたはPCRアンプリコンから、高品質でアーティファクトのないライブラリーを迅速に30分で作製できます。得られたNGSライブラリーは、イルミナNGS機器で使用できます。
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QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit (12)

For 12 reactions: 1-Step Amplicon Enzyme Mix, 4x 1-Step Amplicon Buffer, Primer Mix Illumina Library Amp, HiFi PCR Master Mix, RNase-Free Water. Adapters sold separately.

180412
¥43,000
QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit (96)

For 96 reactions: 1-Step Amplicon Enzyme Mix, 4x 1-Step Amplicon Buffer, Adapter Plate 96-plex Illumina, Primer Mix Illumina Library Amp, HiFi PCR Master Mix, RNase-Free Water

180415
¥384,000

QIAseq 1-Step Amplicon DNA Library Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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Optimized One-Step Library Construction.|Overview of a Complete Targeted Resequencing NGS Workflow Including the QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit.|Typical Results.|
The QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit offers substantial time savings over standard targeted resequencing library preparations. Purified amplicons from multiplexed PCR or gene panels are converted to sequencing libraries by employing a 30-minute, one-tube library construction step. The libraries are purified with an easy and automatable size selection protocol, and the entire procedure can be performed at room temperature. For low-input applications, libraries can be amplified using the included HiFi PCR Master Mix.|After DNA extraction and purification with an appropriate kit, target enrichment is performed with the QIAGEN Multiplex PCR Kit, GeneRead DNAseq Targeted Panels V2 or other gene panels and PCR products. NGS library construction is performed with the QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit and data is analyzed with the CLC Genomics or Biomedical Workbench.|

In this experiment, the QIAGEN GeneRead DNAseq V2 Human Comprehensive Cancer Panel (cat. no. 181901) was used to generate PCR products [A] from a reference DNA sample. [B] A library was prepared from 25 ng of purified PCR product using the QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit. Only 4 amplification cycles after library preparation were applied. Note that libraries display an appropriate size-shift and are free from adapter-adapter products (~125 bp).|

パフォーマンス
アンプリコンから高品質NGSライブラリーまで ― わずか30分で大幅な時間短縮
従来のNGSライブラリー調製は、骨の折れる作業でした。QIAseq 1-step Amplicon Library kitは、遺伝子のパネルやマルチプレックスPCRからのPCRフラグメントのプールから信頼性の高いNGSライブラリを調製できる、より速くより効率的な手段です。新規のエンド修復/ライゲーション反応の組み合わせを利用して、NGSライブラリー調製をわずか30分で完了します(最適化されたワンステップライブラリー構築 と QIAseq 1-step Amplicon Library kit を含むターゲットリシーケンスNGSワークフロー参照)。 ワンチューブ反応により時間を節約して、シークエンシングとデータ分析に専念できるようになります。全工程を室温で行うことができ、サーモブロックのない機器でも自動化が可能になります。ワンチューブ・プロトコルは、試薬を移す作業をなくし、インサートアンプリコンを捕捉する効率を高め、また、手動処理で発生するコンタミまたはサンプル混入のリスクを低減します。シーケンスデュープリケイトやPCRバイアスを避けるために必要に応じてPCRフリーのプロシージャーも選択でき、任意のイルミナシークエンシング装置用の高品質ライブラリーを生成します。

優れたシークエンシングマトリックス
典型的なライブラリーは、優れたシーケンシング・マトリクス、最小のアダプターアダプターライゲーション産物、特異性を有し、インプットプロダクトの均一性および感受性を正確に反映しています(典型的な結果を参照)。
原理
遺伝子パネルまたはマルチプレックスPCRから精製されたアンプリコンは、単一の酵素ライブラリー構築ステップをとおして、イルミナ適合性NGSライブラリーに変換されます。 この反応の間に、アンプリコンをライゲーション用に調製し、バーコードアダプターをDNAインサートの両端にライゲーションします。 アダプターは、後続のライブラリーのPCR濃縮、ブリッジ増幅中のフローセル結合、およびペアードエンドおよびマルチプレックスシークエンスのためのシークエンシングプライマー結合部位に必要な配列を含みます。

ライブラリー構築後、過剰のアダプター、アダプターダイマーおよび他の反応成分を、Agencourt AMPure XPビーズをとおして除去します。 この手順は室温で実施できるので、ハイスループット用途のための様々な液体処理プラットフォーム上で容易に自動化することができます。 ライブラリー精製の後、高フィデリティのライブラリー濃縮工程を実施して、少量の出発物質から十分なライブラリーを生成します。 この反応は、高フィデリティDNAポリメラーゼと最適化されたバッファー条件に依存しているため、最小のGCバイアスと非常に低いエラー率が保証されます。

このキットは以下のものに適用可能です:
  • GeneRead v2 DNAseq Targeted Panelsで生成されたPCR産物
  • 他のカスタムまたは市販遺伝子パネルで作製されたPCR産物
  • vQIAGEN Multiplex PCR Kitまたは他のQIAGEN PCR試薬で生成されたPCR産物
  • TaqまたはTaq誘導体で生成されたマルチプレックス PCRアンプリコン

新規ワンステップ反応は、効率的なライゲーションのためにPCRアンプリコンに3'Aオーバーハングが必要です。 最も一般的に使用される熱安定性DNAポリメラーゼであるTaqポリメラーゼおよびその誘導体は、デフォルトでPCR反応中にこの非鋳型A付加を行います。 TaqおよびTaq誘導体には、マルチプレックスPCRに適した特性があり、多くの市販遺伝子パネルにはTaqベースの酵素が用いられています。 Taqとは対照的に、強力な3'-5 'エキソヌクレアーゼ活性を有する他のポリメラーゼはこの反応を行いません。 一般的にこれらの酵素はマルチプレックスPCRには使用されませんが、このような酵素で作製されたアンプリコンでもライゲーション前にA-tailing を行えば、QIAseq 1-Step Amplicon Library Kitと互換性があります。 詳細はハンドブックを参照してください。

対応シークエンシング機器:
  • Illumina HiSeq
  • Illumina MiSeq
  • Illumina NextSeq
  • Illumina MiniSeq
操作手順
QIAseq 1-Step Amplicon Library Kitは、標準的なターゲットリシークエンシングライブラリー調製よりも大幅に時間を節約します。キットは、新規の組み合わされたエンド修復/ライゲーション反応を利用して、NGSライブラリー調製プロセスを合理化して全体をわずか30分で完了します。ワンチューブ反応により時間を節約できるので、シークエンシングとデータ分析に専念できるようになります。全体の手順は室温で行うことができ、サーモブロックのない機器でも自動化することができます。ワンチューブプロトコールは、試薬を移す必要性をなくし、効率を高め、インサートアンプリコンをより効果的に捕捉し、手作業で起こりうるコンタミやサンプル混入のリスクを低減します。シーケンスデュープリケイトやPCRバイアスを避けるために必要に応じてPCRフリーのプロシージャーも選択でき、任意のイルミナシークエンシング装置用の高品質ライブラリーを生成します。
アプリケーション
QIAseq 1-Step Amplicon Library Kitは、Illuminaの任意のプラットフォーム上で、アンプリコンおよび遺伝子パネル配列決定のための、効率的で合理的な単一反応のソリューションを提供します。

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クイックスタートプロトコール
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