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QIAGEN PCR Cloningplus Kit

PCR 産物の直接クローニング用
  • PCR産物から細胞のプレーティングまでわずか40分
  • 即使用可能なLigation Master Mix
  • 効率的なクローニングのために特異性の高いUAハイブリダイゼーション
  • コンピテントセルが添付されているキット
  • トランスフォームしたコンピテントセルは即プレーティング可能
QIAGEN PCR Cloningplus Kit には、3' 末端にU オーバーハングを持つ直線状クローニングベクターと即使用可能なライゲーション溶液が添付されているため、3' 末端にAオーバーハングを持つPCR 産物の直接ライゲーションとクローニングを高効率で実現します。QIAGEN PCR Cloningplus Kit にはE. coli コンピテントセルとSOC 培養液が添付され、効率的なトランスフォーメーションを実現します。
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Product Cat. no. List price:
QIAGEN PCR Cloningplus Kit (10)
For 10 reactions: 2x Ligation Master Mix (50 µl), pDrive Cloning Vector (0.5 µg), Distilled water (1.7 ml), QIAGEN EZ Competent Cells (10 tubes, 50 µl each), SOC medium (2 x 1.9 ml)
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344,00 €
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QIAGEN PCR Cloningplus Kit (40)
For 40 reactions: 2x Ligation Master Mix (200 µl), pDrive Cloning Vector (2.0 µg), Distilled water (1.7 ml), QIAGEN EZ Competent Cells (40 tubes, 50 µl each), SOC medium (6 x 1.9 ml)
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The QIAGEN PCR Cloningplus Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Highly specific cloning with a shorter ligation time of 30 min.|Transformation without recovery incubation.|Highly specific cloning with a ligation time of 4 h.|The QIAGEN PCR Cloning plus Kit procedure.|pDrive Cloning Vector.|
The effect of ligation time on cloning efficiency was compared for the QIAGEN PCR Cloningplus Kit and a TA-based cloning kit (Supplier I) using PCR products of different length (0.5 kb, 1 kb, and 3 kb). The recommended protocol for each kit was followed. Colony numbers were converted to relative percentages, with the QIAGEN PCR Cloningplus Kit procedure set at 100% for each comparison. The ligation was performed for 30 min (QIAGEN PCR Cloningplus Kit recommendation).|QIAGEN EZ Competent Cells do not require recovery incubation. QIAGEN EZ Competent Cells (>108 cfu/µg DNA), TOP 10F (Supplier I; >109 cfu/µg DNA), and JM109 (Supplier P; >108 cfu/µg DNA) competent cells were transformed with pUC18 plasmid DNA. The recommended protocol from each supplier was followed, except that all cells were plated immediately onto agar/ampicillin plates without a recovery incubation in SOC medium. Colony numbers were converted to relative percentages, with QIAGEN EZ Competent Cells set at 100%. Colony numbers were not normalized for transformation efficiency. Normalization would result in an even higher transformation efficiency for QIAGEN EZ Competent Cells.|The effect of ligation time on cloning efficiency was compared for the QIAGEN PCR Cloningplus Kit and a TA-based cloning kit (Supplier I) using PCR products of different length (0.5 kb, 1 kb, and 3 kb). The recommended protocol for each kit was followed. Colony numbers were converted to relative percentages, with the QIAGEN PCR Cloningplus Kit procedure set at 100% for each comparison. The ligation was performed for 4 hours (TA-based cloning recommendation).|Simply mix the PCR product directly with pDrive Cloning Vector and Ligation Master Mix, incubate, and then add the ligation reaction to competent cells for transformation. QIAGEN EZ Competent Cells do not require a recovery incubation in SOC medium after transformation, and therefore can be plated immediately onto agar/ampicillin plates.|The pDrive Cloning Vector has a number of useful features designed to facilitate analysis of cloned PCR products. These include a large number of unique restriction enzyme recognition sites, universal sequencing primer sites, and promoters for in vitro transcription. In addition, the vector allows both ampicillin and kanamycin selection as well as blue/white screening of recombinant colonies.|
Performance

QIAGEN PCR Cloningplus Kit は、 Taq などのプルーフリーディング活性のないDNA ポリメラーゼで得たPCR産物を迅速、簡便、かつ高効率にクローニングするためのユニークな時間節約ができるという特徴と、最新のライゲーションテクノロジーを併せ持っています。QIAGEN PCR Cloningplus Kit は、他メーカーの試験されたキットに比べて優れているため、確実な成功をもたらします。pDrive Cloning Vectorへのクローニングは、TA塩基結合によるクローニングベクターに比べてかなり迅速です（図"30分というより短いライゲーション時間で特異性の高いクローニング" 、 4時間のライゲーション時間で特異性の高いクローニング"、および表）。QIAGEN PCR Cloningplus Kitは、高効率のトランスフォーメーションを実現するのにこうした時間のかかる回復インキュベーションを必要としないQIAGEN EZ Competent Cellsを備えています（>108 コロニー形成ユニット (CFU) ／μg DNA、図"インキュベーション不要の QIAGEN EZ Competent Cell"）。

様々なクローニング法によるPCR産物から細胞のプレーティングまでの所要時間
QIAGEN PCR Cloningplus Kit トポイソメラーゼ利用クローニングキット† TA塩基結合クローニングキット† 従来のリガーゼクローニング
40分 70分以上 5.5時間以上 7.5時間以上

Principle

pDrive Cloning Vector（図 "pDrive Cloning Vector"）はUAハイブリダイゼーションによりPCR産物を高効率でクローニングします。このベクターは各 3' 末端にUが付加された直線型で、この付加されたUが、Taq およびプルーフリーディング活性を持たないDNAポリメラーゼを用いて増殖したPCRに付加されたAと特異的に結合します。pDrive Cloning Vector は、クローニングしたPCR産物の解析を促進するためにデザインされた多くの利点を備えています。例えば、多数の単一制限酵素認識部位、ユニバーサルシークエンシングプライマー、in vitro転写のためのプロモーターを有しています。さらにこのベクターではアンピシリンおよびカナマイシンによる選択や、組み換えコロニーの青色／白色スクリーニングも可能です。

PCR産物は、TA塩基結合によるクローニングベクターの場合ほど時間を必要とせず、pDrive Cloning Vector に効率的にクローニングされます（図"30分というより短いライゲーション時間で特異性の高いクローニング" と 4時間のライゲーション時間で特異性の高いクローニング"）。さらにTは非相補的な塩基（すなわち、G、C、およびT）と最もハイブリダイズしやすく、Tが付加されたベクターは、ベクター同士のアニーリング、プライマー、アニーリングしたプライマーをクローニングし、間違った結果を招く傾向があります。しかし非特異的な塩基ペアを形成しにくいUが付加されたpDrive Cloning Vectorは、より高いクローニング効率を実現します。

添付されている調製済みの便利なLigation Master Mixは、効率的なクローニングに最適なハイブリダイゼーション条件になるようにデザインされています。

QIAGEN EZ Competent Cellにより、クローニングはさらに速く、簡便になります。形質転換したバクテリア細胞は、SOC培養液中でインキュベートし、ストレスから回復させ、そして抗生物質への耐性を発現させます。これと対照的に、QIAGEN EZ Competent Cellを用いた場合、高効率のトランスフォーメーションを得るために、この時間のかかる回復インキュベーションは必要ありません（>108コロニー形成ユニット（CFU）/μg DNA、図 "インキュベーション不要の QIAGEN EZ Competent Cell"）。

QIAGEN PCR Cloningplus Kitに同梱される構成成分
構成成分 添付 濃度
pDrive Cloning Vector
50 ng/µl
Ligation Master Mix
2x 溶液
蒸留水 -
QIAGEN EZ Component Cells
-
SOC 培養液
1x 溶液

Procedure

PCR産物をpDrive Cloning VectorとLigation Master Mixに直接混和し、インキュベートした後、トランスフォーメーションのためにこのライゲーション反応液をコンピテントセルに添加します。QIAGEN EZ Competent Cellはトランスフォーメーション後にSOC培養液中で回復のためのインキュベーションの必要がないので、寒天／アンピシリンプレートにすぐにプレーティング可能です。

QIAGEN PCR Cloningplus Kit による操作（図"PCR Cloning Kit 操作手順"）は、トポイソメラーゼ利用クローニング法、TA塩基結合クローニング法、および伝統的な付着末端・平滑末端クローニング法に比べてかなり迅速です。ライゲーションは30分、QIAGEN EZ Competent Cell を用いたトランスフォーメーションとプレーティングはわずか10分しか要さないので、PCR産物から細胞のプレーティングまでわずか40分で操作は完了です。

Applications
QIAGEN PCR Cloningplus Kit は、各 3' 末端にAが付加されたどのようなPCR産物のクローニングにも最適です。Taqやプルーフリーディング活性のないDNA Polymeraseを用いて産生したPCR産物を、前処理なしに直接クローニングできます。HotStar HiFidelity Polymerase Kit および QIAGEN LongRange PCR Kit のようなプルーフリーディング活性を持つキットもまたAオーバーハングを持つPCR産物を産生し、QIAGEN PCR Cloning plus Kitを用いた直接クローニングにも最適です。
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Feature
Specifications
Applications Cloning of A overhang PCR products
Competent cells QIAGEN EZ Competent Cells
Overhang U overhang
Reaction type UA hybridization
Vector included pDrive Cloning Vector

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Brochures & Guides
1
(EN) - Maximizing PCR and RT-PCR success — Third Edition
Addressing critical factors and new solutions
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Kit Handbooks
1
(EN) - QIAGEN PCR Cloning Handbook
For QIAGEN PCR Cloning Kit QIAGEN PCR Cloningplus Kit
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Safety Data Sheets
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Highly specific cloning with a short 30-minute ligation time
Highly specific cloning with a shorter ligation time of 30 min.
The effect of ligation time on cloning efficiency was compared for the QIAGEN PCR Cloningplus Kit and a TA-based cloning kit (Supplier I) using PCR products of different length (0.5 kb, 1 kb, and 3 kb). The recommended protocol for each kit was followed. Colony numbers were converted to relative percentages, with the QIAGEN PCR Cloningplus Kit procedure set at 100% for each comparison. The ligation was performed for 30 min (QIAGEN PCR Cloningplus Kit recommendation).
Robust QIAGEN EZ Competent Cells do not require recovery incubation
Transformation without recovery incubation.
QIAGEN EZ Competent Cells do not require recovery incubation. QIAGEN EZ Competent Cells (>108 cfu/µg DNA), TOP 10F (Supplier I; >109 cfu/µg DNA), and JM109 (Supplier P; >108 cfu/µg DNA) competent cells were transformed with pUC18 plasmid DNA. The recommended protocol from each supplier was followed, except that all cells were plated immediately onto agar/ampicillin plates without a recovery incubation in SOC medium. Colony numbers were converted to relative percentages, with QIAGEN EZ Competent Cells set at 100%. Colony numbers were not normalized for transformation efficiency. Normalization would result in an even higher transformation efficiency for QIAGEN EZ Competent Cells.
Highly Specific Cloning with a Shorter Ligation Time
Highly specific cloning with a ligation time of 4 h.
The effect of ligation time on cloning efficiency was compared for the QIAGEN PCR Cloningplus Kit and a TA-based cloning kit (Supplier I) using PCR products of different length (0.5 kb, 1 kb, and 3 kb). The recommended protocol for each kit was followed. Colony numbers were converted to relative percentages, with the QIAGEN PCR Cloningplus Kit procedure set at 100% for each comparison. The ligation was performed for 4 hours (TA-based cloning recommendation).
PCR Cloning Kit Procedure
The QIAGEN PCR Cloning plus Kit procedure.

Simply mix the PCR product directly with pDrive Cloning Vector and Ligation Master Mix, incubate, and then add the ligation reaction to competent cells for transformation. QIAGEN EZ Competent Cells do not require a recovery incubation in SOC medium after transformation, and therefore can be plated immediately onto agar/ampicillin plates.

ILLU_0092_PCRCloning
pDrive Cloning Vector.
The pDrive Cloning Vector has a number of useful features designed to facilitate analysis of cloned PCR products. These include a large number of unique restriction enzyme recognition sites, universal sequencing primer sites, and promoters for in vitro transcription. In addition, the vector allows both ampicillin and kanamycin selection as well as blue/white screening of recombinant colonies.