For highly specific and sensitive multiplex PCR without optimization requirements
- No optimization required
- High specificity and sensitivity with a built-in hot start
- Highly suited for many types of multiplex PCR applications
- Easy to use and cost-effective
The QIAGEN Multiplex PCR Kit is available in a convenient ready-to-use master mix format. The QIAGEN Multiplex PCR Master Mix includes HotStarTaq DNA Polymerase and a unique PCR buffer containing the novel synthetic Factor MP. Together with optimized salt concentrations, this additive stabilizes specifically bound primers and enables efficient extension of all primers in the reaction without the need for optimization. Q-Solution, a novel additive that enables efficient amplification of "difficult" (e.g., GC-rich) templates, is also supplied.
ja-JP
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製品名
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QIAGEN Multiplex PCR Kit (100)
For 100 x 50 µl multiplex PCR reactions: 2x QIAGEN Multiplex PCR Master Mix (providing a final concentration of 3 mM MgCl2, 3 x 0.85 ml), 5x Q-Solution (1 x 2.0 ml), RNase-Free Water (2 x 1.7 ml)
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206143
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QIAGEN Multiplex PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl multiplex PCR reactions: 2x QIAGEN Multiplex PCR Master Mix (providing a final concentration of 3 mM MgCl2, 1 x 25 ml), 5x Q-Solution (1 x 10 ml), RNase-Free Water (1 x 20 ml)
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206145
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QIAGEN Multiplex PCR Kit は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
16plex PCR 成功例|トランスジェニックマウスのジェノタイピング|マイクロサテライト解析成功例|安定で効率的なプライマー・アニーリング|
16種類のターゲット(99~955 bp)のマルチプレックスPCRは35サイクルで、QIAGEN Multiplex PCR Kitを用いて至適化なしのスタンダード条件で、あるいはAII社のホットスタートDNAポリメラーゼを用いて様々な条件下で行なった。[A] AII社のホットスタートDNAポリメラーゼ(2.5ユニット/50 μl反応液)と表記したMg2+濃度を用いて比較した。[B] AII社のホットスタートDNAポリメラーゼに最適なMg2+濃度(3.5 mM、Aの結果より)と表記した酵素量(50 μl反応液あたり)を用いて比較した。QIAGEN Multiplex PCR Kitを用いて良好な結果が得られた。M:マーカー。|野生型(wt)、ヘテロ接合(ht)、homozygous mutant(hm)を区別するために、QIAGEN Multiplex PCR Kitと3種類のプライマーを用いて、トランスジェニックマウスのスクリーニングを行なった。[A] RAG-2(recombination activating gene 2)遺伝子座用のプライマーを使用。B インターフェロンγ遺伝子座用プライマーセットを使用。M:マーカー(データ提供: S. zur Lage and S. Weiss, National Research Center for Biotechnology, Braunschweig, Germany)。|1 ngのK562ヒトゲノムDNAと蛍光標識プライマーを用いてマイクロサテライト遺伝子座、D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、Penta Eの解析を行なった。反応液はABI PRISM 377 Sequencerで解析した。上の図:QIAGEN Multiplex PCR Kitを用いて行った感度の高い均一なシグナル強度。下の図:AII社のホットスタートDNAポリメラーゼを用いた結果。|Multiplex PCR Bufferは安定で効率的なプライマーアニーリングを実現する。[A] NH4+はアニーリングステップで非特異的なプライマーがテンプレートDNAに会合するのを回避する。[B] 画期的なPCR 添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+や他の陽イオンとともに、合成Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。|
パフォーマンス
The QIAGEN Multiplex PCR Kit outperformed kits tested from other suppliers and ensures highly specific and sensitive multiplex PCR amplification (see figure "Successful 16-plex PCR "). The kit can be successfully used for various multiplex applications such as typing of transgenic organisms (see figure "Genotyping transgenic mice") and microsatellite analysis (see figure figure "Successful microsatellite analysis "). The master mix includes HotStarTaq DNA Polymerase for efficient amplification of multiple targets in parallel. Amplfication effiency is further improved by an innovative PCR buffer, also included in the master mix. The unique buffer ensures PCR specificity over a wide range of PCR conditions, minimizing the need for optimization. Suboptimal PCR can be improved with Q-Solution — an additive for the amplification of GC-rich templates — also provided with the kit . HotStarTaq DNA Polymerase specifications Concentration: 5 units/µl Recombinant enzyme: Yes Substrate analogs: dNTP, ddNTP, dUTP, biotin-11-dUTP, DIG-11-dUTP, fluorescent-dNTP/ddNTP Extension rate: 2–4 kb/min at 72°C Half-life: 10 min at 97°C ; 60 min at 94°C Amplification efficiency: ≥105 fold 5'–>3' exonuclease activity: Yes Extra A addition: Yes 3'–>5' exonuclease activity: No Contaminating nucleases: No Contaminating RNases: No Contaminating proteases: No Self-priming activity: No
原理
The QIAGEN Multiplex PCR Kit is the first kit specifically developed for multiplex PCR and is provided in an easy-to-use master-mix format. QIAGEN Multiplex PCR Master Mix contains preoptimized concentrations of HotStarTaq DNA Polymerase and MgCl2, plus dNTPs and an innovative PCR buffer specially developed for multiplex PCR. The kit enables success in multiplex PCR at the first attempt. There is no need to optimize reaction conditions (e.g., the concentrations of primers, Mg2+, and Taq DNA polymerase) and cycling parameters due to unique preoptimized reagents included in the kit. HotStarTaq DNA Polymerase HotStarTaq DNA Polymerase is a modified form of Taq DNA polymerase and has no polymerase activity at ambient temperatures. This prevents extension of nonspecifically annealed primers and primer dimers formed at low temperatures during PCR setup and the initial PCR cycle. HotStarTaq DNA Polymerase is activated by a 15-minute incubation at 95°C which can be incorporated into any existing thermal-cycler program. Multiplex PCR Buffer This special buffer contains an optimized combination of K+ and NH4+, as well as the unique PCR additive, Factor MP, which increases the local concentration of primers at the template. Together with K+ and other cations, Factor MP stabilizes specifically bound primers, allowing efficient primer extension by HotStarTaq DNA Polymerase (see figure "Stable and efficient primer annealing"). The innovative buffer maintains specific amplification in every cycle of PCR by promoting a high ratio of specific-to-nonspecific primer binding during the annealing step in each PCR cycle. Owing to a uniquely balanced combination of KCl and (NH4)2SO4, the buffer provides stringent primer-annealing conditions over a wider range of annealing temperatures and Mg2+ concentrations than conventional PCR buffers. Optimization of PCR by varying the annealing temperature or the Mg2+ concentration is therefore often minimal or not required. Q-Solution Q-Solution, an innovative PCR additive that facilitates amplification of difficult templates by modifying the melting behavior of DNA, is also provided with HotStarTaq DNA Polymerase. This unique reagent improves suboptimal PCR caused by templates that have a high degree of secondary structure or GC-rich templates. Unlike other commonly used PCR additives such as DMSO, Q-Solution is used at just one working concentration, is nontoxic, and PCR purity is guaranteed.
操作手順
The QIAGEN Multiplex PCR Kit is provided in a ready-to-use, preoptimized master mix for greater convenience. Use of a master mix saves time, simplifies handling for reaction setup, and increases reproducibility by eliminating many possible sources of pipetting errors and contamination — pipetting steps are minimized and tedious calculations are eliminated. Only primers and template need to be added to prepare the final amplification mix. The master mix can be stored at 2–8°C, allowing even faster setup of multiplex PCR assays. The streamlined, step-by-step protocol provided with the kit ensures fast and easy PCR setup. Reactions can be set up at room temperature, ensuring greater convenience and ease of use. HotStarTaq DNA Polymerase is activated by a 15-minute, 95°C incubation step, which can easily be incorporated into existing thermal cycling programs.
アプリケーション
The QIAGEN Multiplex PCR Kit is highly suited for various multiplex applications, including: - Typing and analysis of transgenic organisms
- Amplification and analysis of microsatellites
- Typing and detection of bacteria and viruses
- Amplification of multiple DNA regions for SNP analysis
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Second edition — innovative tools
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Addressing critical factors and new solutions
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PCR 実験における重要項目と新技術
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FAQ ID -74
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FAQ ID -204
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FAQ ID -216
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FAQ ID -287
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FAQ ID -288
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FAQ ID -289
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FAQ ID -380
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FAQ ID - 525
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FAQ ID -565
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FAQ ID -750
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FAQ ID -800
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FAQ ID -818
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FAQ ID -961
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For fast and efficient multiplex PCR without optimization
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迅速で効率的なマルチプレックスPCR用
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
16plex PCR 成功例
16種類のターゲット(99~955 bp)のマルチプレックスPCRは35サイクルで、QIAGEN Multiplex PCR Kitを用いて至適化なしのスタンダード条件で、あるいはAII社のホットスタートDNAポリメラーゼを用いて様々な条件下で行なった。[A] AII社のホットスタートDNAポリメラーゼ(2.5ユニット/50 μl反応液)と表記したMg2+濃度を用いて比較した。[B] AII社のホットスタートDNAポリメラーゼに最適なMg2+濃度(3.5 mM、Aの結果より)と表記した酵素量(50 μl反応液あたり)を用いて比較した。QIAGEN Multiplex PCR Kitを用いて良好な結果が得られた。M:マーカー。
トランスジェニックマウスのジェノタイピング
野生型(wt)、ヘテロ接合(ht)、homozygous mutant(hm)を区別するために、QIAGEN Multiplex PCR Kitと3種類のプライマーを用いて、トランスジェニックマウスのスクリーニングを行なった。[A] RAG-2(recombination activating gene 2)遺伝子座用のプライマーを使用。B インターフェロンγ遺伝子座用プライマーセットを使用。M:マーカー(データ提供: S. zur Lage and S. Weiss, National Research Center for Biotechnology, Braunschweig, Germany)。
マイクロサテライト解析成功例
1 ngのK562ヒトゲノムDNAと蛍光標識プライマーを用いてマイクロサテライト遺伝子座、D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、Penta Eの解析を行なった。反応液はABI PRISM 377 Sequencerで解析した。上の図:QIAGEN Multiplex PCR Kitを用いて行った感度の高い均一なシグナル強度。下の図:AII社のホットスタートDNAポリメラーゼを用いた結果。
安定で効率的なプライマー・アニーリング
Multiplex PCR Bufferは安定で効率的なプライマーアニーリングを実現する。[A] NH4+はアニーリングステップで非特異的なプライマーがテンプレートDNAに会合するのを回避する。[B] 画期的なPCR 添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+や他の陽イオンとともに、合成Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。
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