QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit

ヒト血漿あるいは血清から遊離DNA/RNAを分離

  • サンプルインプット量を増やし(最高5 ml)、溶出量を減らす(最少20 µl)ことで核酸の高濃縮を実現
  • フラグメント化したDNAおよびRNAを効率的に回収
  • 有機溶媒抽出およびアルコール沈殿不要
  • 夾雑物および阻害物質を除去

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は血漿あるいは血清中の遊離DNAおよびRNAを簡単に濃縮・分離できます。

本キットのご使用には、QIAvac 24 Plus (Cat. no. 19413) が必要です。また、QIAvac Connecting System (Cat. no. 19419) と併用していただくと大変便利です。
製品名 Cat. no. List price:
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (50)
For 50 preps: QIAamp Mini Columns, Tube Extenders (20 ml), QIAGEN Proteinase K, Carrier RNA, Buffers, VacConnectors, and Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml)
55114
¥116,000
Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
1017647
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QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


関連情報: Yuk-Ming Dennis Lo 博士, “新規バイオリソース: 血漿中遊離核酸の現状と将来の可能性”
QIAGENeyes 7  2013年9月号 掲載)
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遊離DNAの再現性の高い回収|改良されたDNAフラグメントの回収|遊離miRNA の効率的な精製|メチル化DNAの効率的な回収|
同量のDNAフラグメント(200 bpと1000 bp)を血漿24サンプルに添加した。DNAを5 ml の血漿からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で精製し、80 μl で溶出した。QuantiTect Multiplex PCR Kit を用いて、各DNAフラグメントに特異的な66 bpターゲットのduplexリアルタイムPCRを行なった。|遊離DNA を5 ml の血漿からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で、1 ml の血漿からQIAamp MinElute Virus Vacuum Kit で精製し、100 μl で溶出した。QuantiTect Multiplex PCR Kit を用いて、18S rRNA遺伝子のアンプリコン66 bpと500 bpのduplexリアルタイムPCRを行なった。500 bp と66 bp のアンプリコンの増幅差はDNAのフラグメント化を示し、短い66 bp ターゲットと比較してインタクトな500 bp ターゲット配列が少なかった(この差は使用したサンプル量の5倍差より大きいことに注意)。|標準プロトコールで5 ml、miRNA 専用プロトコールで 3 ml のプール血漿から、QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で遊離RNA を精製し、50 μl で溶出した。標準プロトコール
をmiRNA 専用プロトコールと比較した。 miRNA 30bの収量はTaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)で、miRNA 16の収量はHuman miScript Assay(QIAGEN)でそれぞれ定量した。miRNA プロトコールでの低いCT 値は両miRNA の収量が高いことを示唆している。|メチル化DNAと非標的poly-A RNA(キャリア)を添加した血漿4 ml からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit を用いて精製し、45 μlで溶出した。EpiTect Bisulfite Kit (QIAGEN)を用いてBisulfite変換し、リアルタイムMSP アッセイとQuantiTect Multiplex PCR Kit の試薬を用いたMSP(methylation-specific PCR)をABI PRISM 7900HT Sequence Detection Systemで行なった。2つの完全にメチル化された遺伝子座データを解析した。|
パフォーマンス

癌に特異的な血中のDNAフラグメントやmiRNAを解析することにより、血液サンプルから癌タイプの特定が可能です。血中を循環するこれらの核酸は、血清や血漿中に短いフラグメントとして存在します(DNA は1,000 bp以下、RNA は1,000 nt以下)。さらに、精製されたRNA に含まれる21 nt程度のmiRNAは、癌や病態に対するバイオマーカーとして利用できる可能性があります。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、ヒト血漿や血清、その他の無細胞体液から遊離核酸を効率的に精製します。再現性のある収量と効率的調製法により、遊離核酸分布を正確に反映します(図 "遊離DNAを高い再現性で回収")。Tube Extender とQIAvac 24 Plus を用いた吸引操作は、最高5 mlからのサンプル調製を実現し、20 µl から150 µl までの幅広い溶出容量により、低濃度で存在する遊離核酸を濃縮できます。本キットはシリカゲルメンブレンへの選択的結合という先端技術により、核酸フラグメントの回収を改善します(図 "改良されたDNAフラグメントの回収")。

RNase-Free DNase Set を用いてDNA分解を行なうと、DNAフリーの遊離RNAを精製できます。専用プロトコールはmiRNAのようなsmall RNAの効率的な精製を実現します(図 "遊離miRNA の効率的な精製")。メチル化DNAはQIAamp Circulating Nucleic Acid Kitを用いて効率的に精製できます。精製DNAはメチル化を保持しているために、メチル化状態を解析するBisulfite変換が可能です(図 "メチル化DNAの効率的な回収")。

精製・濃縮した遊離DNAおよびRNAは、タンパク質、ヌクレアーゼ、その他の不純物が取り除かれ、次のような様々なダウンストリームアプリケーションに即使用可能です。

PCR およびリアルタイム定量PCR / RT-PCR
血液を利用した癌検出のためのバイオマーカー研究および評価
ウイルス核酸検出 
原理

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、血漿あるいは血清中の遊離DNAおよび遊離RNA を簡単に分離できます。フェノール/クロロホルム抽出は不要です。核酸は選択的にQIAamp Mini columnに結合し、夾雑物は洗い流されます。2価の陽イオンおよびタンパク質などのPCR阻害物質は、3回の効率的な洗浄ステップにより完全に除去され、高純度の核酸は水あるいはキットに同梱のバッファーで溶出します。QIAamp Circulating Nucleic Acid テクノロジーは、ヒトの血漿、血清、尿からの遊離DNAおよび遊離RNAを精製します。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、シリカゲルメンブレンの選択的な結合能力および20~150 μlの幅広い溶出容量を組み合わせています。RNase-Free DNase Setを用いてDNAを分解すれば、遊離RNAのみ精製できます。

操作手順

QIAamp Circulating Nucleic Acid の手順は4段階(溶解、結合、洗浄、溶出)で、吸引マニホールド上でQIAamp Mini columnを用いて操作できます。手順が簡単で多数のサンプルの同時処理に適しており、24サンプルあたり2時間未満で核酸を精製できます。QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit をウイルスRNA/DNAの単離に使用する場合は、全てのウイルス種について性能が保証されている訳ではありませんので、ユーザによる検証が必要となります。

アプリケーション

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、低濃度のフラグメント化したDNAやRNAを含むスタートサンプルから、循環している遊離核酸(DNA、RNA、miRNA、ウイルス核酸)を効率的に精製、濃縮します(ヒト血漿中の遊離DNA濃度は通常1~100 ng/ml)。5 mlまでのスタートサンプル量を処理できます。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kitは以下のようなサンプルから核酸を精製、濃縮します。

ヒト血漿
血清
尿
Feature
Specifications
Applications PCR, real-time PCR
CE/FDA/IVD compatible -
Elution volume 20–150 µl
Format QIAamp Mini Columns
Main sample type Serum, plasma
Processing Manual (vacuum)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Free-circulating DNA, RNA and miRNA, viral DNA, viral RNA
Sample amount 1-5 ml
Technology Silica technology
Time per run or per prep <2 hour for 24 preps
Yield Varies, due to donor-to-donor variations and disease status

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キットハンドブック
2
MSDS
2
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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