RNA精製なしにリアルタイムRT-PCRに使用できるcDNAを迅速に調製
  • わずか4ステップ、45分以下で細胞からcDNAを精製
  • 発現量の低い転写物でも高感度で検出
  • 複数のサンプルを簡単に同時処理可能
  • gDNA除去が組み込まれているため、RNAだけを検出可能
  • RNA特異的なプライマーやプローブのデザイン不要

FastLane Cell cDNA Kitは、RNA精製を行なわずに直接培養細胞から迅速で簡単な一本鎖cDNAの調製を実現します。本キットにはライセート調製とRNA安定化のための洗浄および溶解バッファー、混入したゲノムDNA除去用gDNA Wipeout Buffer、迅速で効率的なcDNA合成用反応液が全て含まれています。FastLane Cell cDNA Kitは迅速でハイスループットな遺伝子発現解析が必要な実験に最適です。

製品名 Cat. no. List price:
FastLane Cell cDNA Kit (50)
Buffer FCW, Buffer FCP, and components for 50 x 20 µl reverse-transcription reactions (gDNA Wipeout Buffer, Quantiscript Reverse Transcriptase, Quantiscript RT Buffer, RT Primer Mix, and RNase-Free Water)
215011
¥75,000

FastLane Cell cDNA Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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がん研究において最高の感度を実現|CDC2ノックダウンの優れた解析結果|ゲノムDNAコンタミを効率的に除去|再現性の高いcDNA調製|
HeLa細胞を用いたがん研究に重要な様々な遺伝子の2ステップリアルタイムRT-PCR解析において、Supplier AIVの類似キットの代わりにFastLane Kitを用いてcDNAを調製した時に、より低いCT値が得られた。| 様々なCDC2 siRNAs(S1S2S3)あるいはnonsilencing siRNA(NS)をMCF-7細胞にトランスフェクトした。48時間後にFastLane Kitを用いてcDNAを調製した。GAPDH(内因性コントロール)に対するCDC2(細胞周期関連タンパク質)の相対的な発現を2ステップリアルタイムRT-PCRにより解析した。未処理細胞中(UT)の相対的なCDC2発現を100%とした。 |FastLane Cell cDNA Kitを用いて逆転写酵素を添加(+RT)あるいは未添加(-RT)でcDNAを調製した。β-actinの遺伝子発現アッセイを用いてcDNAを定量した。–RTの線は、ゲノムDNAが検出されなかったことを示唆している。|HeLa細胞を含む48ウェルプレートからFastLane Kitを用いてcDNAを調製した。Tubulin B(構造タンパク質)の発現を2ステップリアルタイムRT-PCRにより解析した。|
パフォーマンス
FastLane Cell cDNA Kitで合成したcDNAは2ステップリアルタイムRT-PCRで感度および再現性の高い結果を実現します(図"がん研究において最高の感度を実現"、"再現性の高いcDNA調製")。この高品質cDNAを用いて幅広い細胞数(1から105以上)の範囲でも検出を行なうことができます。
原理

FastLane Cell cDNA KitはFastLane技術を利用し、培養細胞からわずか45分で直接cDNAを調製します。リアルタイムRT-PCRにおいてRNAのみを確実に検出するため、ゲノムDNAの除去に革新的なgDNA Wipeout Bufferを使用しています(図"ゲノムDNAコンタミを効率的に除去")。RNA特異的なプライマーあるいはプローブをデザインする必要がなく、時間および労力を節約できます。

リアルタイムRT-PCRに至適化済みのQuantiTect、QuantiFast、またはRotor-Gene KitsをFastLane Cell cDNA Kitと共に使用することにより、複数の細胞サンプルを数時間以内に容易に処理し、解析することができます。従って、siRNAによる遺伝子発現ノックダウンの検証のような実験において、複数の転写物のスナップショットが可能です(図"CDC2ノックダウンの優れた解析結果")。

FastLane Cell cDNA Kitは、遺伝子発現解析ワークフローのスピードアップと能率化を実現するFastLane製品の1つです。

操作手順

FastLane Cell cDNA Kitを用いて、細胞洗浄、RNAの安定化を組み込んだ細胞溶解、ゲノムDNAの除去、cDNA合成の4ステップの操作で、培養細胞からわずか45分でcDNAが得られます。合成されたcDNAは2ステップリアルタイムRT-PCRに即使用できます。

本キットには24ウェル細胞培養プレート2枚、あるいは48ウェル細胞培養プレート1枚でcDNAを調製するために十分な量の試薬が入っています。96ウェル細胞培養プレートで調製を行なう場合には、QuantiTect Reverse Transcription Kit(50)を追加購入する必要があります。

FastLane Cell cDNA Kitで調製したcDNAは、以下のQuantiTect Kitシリーズの1つを用いて2ステップリアルタイムRT-PCRで解析できます。

  • SYBR® Green検出:QuantiTect SYBR® Green PCR Kit
  • プローブ検出:QuantiTect Probe PCR Kit
  • マルチプレックスプローブ検出:QuantiTect Multiplex PCR Kits

あるいは、FastLane Cell cDNA KitをQuantiFast Kitと組み合わせて2ステップ高速リアルタイムRT-PCRを行なうことも可能です。

  • SYBR® Green検出:QuantiFast SYBR® Green PCR Kit
  • プローブ検出:QuantiFast Probe PCR Kits
  • マルチプレックスプローブ検出:QuantiFast Multiplex PCR Kits

FastLane Cell cDNA Kitで調製したcDNAを、以下のような専用Rotor-Gene Kitを用いてRotor-Gene Qサイクラーで解析すると、超高速2ステップリアルタイムRT-PCRを行なうことができます。

  • SYBR® Green検出:Rotor-Gene SYBR® Green PCR Kit
  • プローブ検出:Rotor-Gene Probe PCR Kit
  • マルチプレックスプローブ検出:Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 

QuantiTectおよびQuantiFast KitはApplied Biosystems社の装置を含む様々なリアルタイムサイクラーで使用可能です。

アプリケーション

FastLane Cell cDNA Kit は以下のような実験に適しています。

  • siRNAによる遺伝子ノックダウンの検証
  • 薬剤効果の評価
  • 遺伝子制御の検出

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キットハンドブック
3
For high-speed preparation of first-strand cDNA directly from cultured cells without RNA purification. For use in real-time, two-step RT-PCR
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RNA精製を行なわずに直接培養細胞から一本鎖cDNAを迅速に調製
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MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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安全データシート
2