10 mgまでのトランスフェクショングレードのプラスミドおよびコスミドDNA精製用

  • CsCl密度勾配遠心法を2回行なって得られる純度に匹敵
  • 高収量のプラスミドDNA
  • 経済的な調製法
  • LyseBlue試薬により最適な溶解操作と最大のDNA収量

QIAGEN Plasmid Kits はオープンカラム方式の陰イオン交換チップを用いてトランスフェクショングレードのプラスミドDNA 精製を実現します。ライセート清澄化およびイソプロパノール沈殿は遠心操作により行ないます。

製品名 Product no. Cat. no. List price:
 
 
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製品名 Cat. no. List price:
QIAGEN Plasmid Giga Kit (5)
5 QIAGEN-tip 10000, Reagents, Buffers
12191
¥57,000
QIAGEN Plasmid Mega Kit (25)
25 QIAGEN-tip 2500, Reagents, Buffers
12183
¥115,000
QIAGEN Plasmid Mega Kit (5)
5 QIAGEN-tip 2500, Reagents, Buffers
12181
¥27,000
QIAGEN Plasmid Maxi Kit (100)
100 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers
12165
¥247,000
QIAGEN Plasmid Maxi Kit (25)
25 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers
12163
¥66,500
QIAGEN Plasmid Maxi Kit (10)
10 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers
12162
¥28,000
QIAGEN Plasmid Midi Kit (100)
100 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers
12145
¥107,000
QIAGEN Plasmid Midi Kit (25)
25 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers
12143
¥30,000
QIAGEN Plasmid Mini Kit (100)
100 QIAGEN-tip 20, Reagents, Buffers
12125
¥65,500
QIAGEN Plasmid Mini Kit (25)
25 QIAGEN-tip 20, Reagents, Buffers
12123
¥18,500
QIAGEN-tip 10000 (5)
5 columns
10091
¥56,500
QIAGEN-tip 2500 (25)
25 columns
10083
¥108,000
QIAGEN-tip 500 (25)
25 columns
10063
¥68,000
QIAGEN-tip 100 (25)
25 columns
10043
¥31,000
QIAGEN-tip 20 (25)
25 columns
10023
¥18,000
Plasmid Buffer Set
Buffers P1, P2, P3, QBT, QC, QF, RNase A; for 100 plasmid mini-, 25 midi-, or 10 maxipreps
19046
¥12,500
QIAGEN Plasmid Midi Kit (400)
400 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers
12145X4
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QIAGEN Plasmid Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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プラスミド精製法とトランスフェクション効率の関係|QIAGEN Plasmid Kits 操作の比較|
表記の方法により精製したpRSVcat DNAを、リポソーム試薬を用いて、図に示した細胞系にトランスフェクトした。40時間後に発現したCATを測定し効率を算出した。4回の個別のトランスフェクション実験から得た結果を表示した(2回の独立したプラスミドプレップから得られたそれぞれのプラスミドで2回トランスフェクションを行なった)。最も高いトランスフェクション効率は、QIAGEN Plasmid Kitsで得られた。|中和したバクテリアライセートを直接QIAfilter Cartridge中でインキュベートし、ろ過により清澄化する。清澄化されたライセートを陰イオン交換チップ上にアプライすると、適切な低塩あるいはpH条件でプラスミドDNAが選択的に結合する。RNA、タンパク質、二次代謝物、その他の低分子量不純物が、中濃度の塩による洗浄で取り除かれ、超高純度プラスミドDNAが高塩濃度のバッファーで溶出する。イソプロパノール沈殿によりDNAが濃縮・脱塩され、遠心操作により回収される。|
パフォーマンス
QIAGEN Plasmid Kitsでは、プラスミドDNAを効率的に精製するためのオープンカラム方式のQIAGEN陰イオン交換チップを使用しています。それぞれ、10 mg(Giga)、2.5 mg(Mega)、500 µg(Maxi)、100 µg(Midi)、20 µg (Mini) までのトランスフェクショングレードの高コピー数プラスミドDNAを培養液から精製します(培養液の容量はプラスミドコピー数、挿入DNAのサイズ、宿主株、培養液に依存)。QIAGEN Plasmid Kitsで精製したプラスミドDNAは、トランスフェクション(図"プラスミド精製法とトランスフェクション効率の関係")、クローニング、in vitro 転写などのアプリケーションで使用するのに最適です。
原理

QIAGEN-tip 中の非常にユニークな陰イオン交換樹脂は核酸精製を目的として開発されました。本製品の優れた核酸分離能力により、CsCl 密度勾配遠心分離法を2回行なって得たDNAの純度に匹敵、あるいはそれ以上の純度のDNAが調製されます。充填済みQIAGEN-tipsはオープンカラムで操作し、乾燥することはなく、プラスミド調製に必要なマニュアルでの作業時間を短縮できます。全てのQIAGENプラスミド精製システムでは、ユーザーおよび環境への影響が最小限となるように、フェノール、クロロホルム、臭化エチジウム、CsCl等の有害な試薬を一切使用していません。

製品仕様

特徴
Plasmid
Giga Kit
Plasmid
Mega Kit
Plasmid
Maxi Kit
Plasmid
Midi Kit
Plasmid
Mini Kit
Applications Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing, etc. Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing, etc. Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing, etc. Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing, etc. Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing, etc.
Culture volume/starting material 2.5–5 liters culture volume 500 ml – 2.5 liters culture volume 100–500 ml culture volume 25–100 ml culture volume 3–10 ml culture volume
Elution volume Variable Variable Variable Variable Variable
Plasmid type High-copy, low-copy, cosmid DNA High-copy, low-copy, cosmid DNA High-copy, low-copy, cosmid DNA High-copy, low-copy, cosmid DNA High-copy, low-copy, cosmid DNA
Processing Manual (centrifugation) Manual (centrifugation) Manual (centrifugation) Manual (centrifugation) Manual (centrifugation)
Sample per run 1 sample per run 1 sample per run 1 sample per run 1 sample per run 1 sample per run
Technology Anion-exchange technology Anion-exchange technology Anion-exchange technology Anion-exchange technology Anion-exchange technology
Time per run 320 min 220 min  160 min 150 min 80 min
Yield <10 mg <2.5 mg <500 µg up to 100 µg <20 µg

操作手順

QIAGEN Plasmid Kitsを使用して、遠心操作でバクテリアライセートを清澄化します。清澄化したライセートを陰イオン交換チップ上にアプライすると、適切な低塩あるいはpH条件でプラスミドDNAが選択的に結合します。RNA、タンパク質、二次代謝物、その他の低分子量不純物が、中濃度の塩による洗浄で取り除かれ、高純度プラスミドDNAが高塩濃度のバッファーで溶出されます(フローチャート"QIAGEN Plasmid Kits 操作の比較"参照)。イソプロパノール沈殿によりDNAが濃縮・脱塩され、遠心操作により回収されます。

アプリケーション

QIAGEN Plasmid Kits を用いて精製したプラスミドDNAは、以下のようなアプリケーションに最適です。

トランスフェクション
クローニング
PCR
In vitro転写
Feature
Specifications
Applications Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing etc.
Culture volume/starting material 2.5–5 liters culture volume
Plasmid type High-copy, low-copy, cosmid DNA
Processing Manual (centrifugation)
Samples per run; throughput 1 sample per run
Technology Anion-exchange technology
Time per run or prep per run 320 min
Yield <10 mg

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FAQ
50
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FAQ ID -883
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FAQ ID -886
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FAQ ID -949
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キットハンドブック
3
Supplementary Protocols
8

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This protocol is designed to provide up to 150 μg BAC/PAC/P1 DNA or up to 400 μg cosmid DNA.
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This protocol is designed for the rapid, easy, and non-toxic preparation of up to 2 mg genomic DNA from not more than 2 g of tissue using QIAGEN-tip 2500. QIAGEN® Genomic-tips 20/G, 100/G, and 500/G can also be used with this protocol by reducing the amount of starting material according to the table on page 2. The purified genomic DNA ranges in size from 50-150 kb.
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Endotoxin-free DNA is essential for gene therapy research and will improve transfection into sensitive eukaryotic cells.
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This protocol is designed for isolation of up to 200 μg RNA from 150 mg plant tissue or up to 1 mg RNA from 600 mg plant tissue and is for use with QIAGEN-tip 100 or QIAGEN-tip 500, respectively.
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This protocol is for purification of up to 100 µg endotoxin-free plasmid DNA using QIAGEN-tip 100.
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User-Developed Protocols
12
The procedure has been used successfully for isolation of plasmids SCP2 and SCP2* as well as the plasmids listed in Table 1 (see next page) from S. coelciolor and S. lividans strains.
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This procedure has been used successfully for isolation of 150-250 kb BAC DNA from a mouse-BAC library cloned in pBeloBAC11 from Escherichia coli strain HB101/r. The yield of BAC DNA from 100 ml culture was typically 20-40 μg.

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The procedure has been used successfully for isolation of high- and low-copy-number plasmids from various Bacillus subtilis strains. Yield of plasmid DNA was typically 10-20 µg plasmid DNA from 100 ml culture.
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The procedure has been used successfully for isolation of 110 kb P1 DNA (pAdsacBII with an 80 kb insert) from Escherichia coli strain NS3529. Yield of P1 DNA was typically 10-50 µg from 500 ml culture.
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The procedure has been used successfully for isolation of linear plasmids from Borrelia burgdorferi sensu lato species, which include Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelli, and Borrelia garinii.
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The procedure has been used successfully for isolation of high-copy-number plasmids from Citrobacter freundii. Yield of plasmid DNA was typically 3-8 µg DNA per ml culture.
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The procedure has been used successfully for isolation of cryptic plasmids (pLC2-based) from mesophilic Lactobacillus strains such as L. sake and L. curvatus. Yield of plasmid DNA was typically 10-20 µg plasmid DNA from 100 ml culture.
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The procedure has been used successfully for isolation of the large (128 kb), very-low-copynumber (1-2 copies per cell) plasmid pHCG3 and its derivatives from Oligotropha carboxidovorans. Yield of plasmid DNA was typically 3-6 µg plasmid DNA from 200 ml culture.
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The procedure has been used successfully for isolation of high-copy-number plasmids from Proteus vulgaris and Proteus mirabilis. Yield of plasmid DNA was typically 3-8 µg DNA per ml culture.
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The procedure has been used successfully for isolation of a variety of medium-copy-number shuttle vectors from S. xylosus, S. carnosus, S. epidermidis, and S. aureus. Yield of plasmid DNA was typically 2-10 µg from 50 ml culture.
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The procedure has been used successfully for isolation of different medium-copy-number plasmids carrying pHM1519 or pBL1 origins of replication from Corynebacterium glutamicum ATCC 13032. Yield of plasmid DNA was typically 0.4-1.5 µg per ml LB culture, although yield was dependent on the vector, the insert, and the size of the plasmid.
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References
0