血液および培養細胞から最大500 µgまでの高分子DNAを単離
  • 150 kbまでのDNAを確実に単離
  • フェノール/クロロホルム抽出が不要
  • 多数サンプルの簡便な同時処理

Blood & Cell Culture DNA Kitには、様々な生物サンプルから高純度のゲノムDNAを精製するためのオープンカラム方式の陰イオン交換チップとバッファーが含まれています。精製されるDNAのサイズは、平均50~100 kb、最大150 kbです。

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Blood & Cell Culture DNA Maxi Kit (10)
10 QIAGEN Genomic-tip 500/G, QIAGEN Protease, Buffers
13362
¥40,500

Blood & Cell Culture DNA Maxi Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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QIAGEN Genomic-tip製法|150 kbまでのゲノムDNA|
最適な溶解バッファー中でサンプル(組織サンプルは予め機械的に破砕)を溶解すると同時に、タンパク質を変性させる。QIAGEN ProteaseあるいはProteinase Kを添加し、適切なインキュベーション後、ライセートをQIAGEN Genomic-tipにロードする。DNAはカラムに結合し、他の細胞構成物は流出する。残った夾雑物を除去するための洗浄ステップ後、純粋な高分子DNAを溶出し、イソプロパノールで沈殿させる。|QIAGEN Genomic-tipで精製したDNA(2 µg)のパルスフィールドゲル電気泳動。 M:マーカー。|
パフォーマンス

QIAGEN Genomic-tipでの調製法は、非常に緩和な条件下で行なわれるので、DNAの断片化はほとんど認められません。QIAGEN Genomic-tipで精製したDNAのサイズは、平均50~100 kb、最大150 kbです(図"150 kbまでのゲノムDNA")。このDNAはRNA、タンパク質、代謝物などの夾雑物をまったく含まず、A260/A280比は1.7~1.9です。

得られるDNAのサイズが極めて大きいため、様々なプラットフォームにおける次世代シークエンシング(NGS)用の高品質ライブラリー調製に特に適しており、幾つかの中核となる施設によって推奨されています。

Blood & Cell Culture DNA Maxi Kitを用いた代表的な収量
サンプル: 収量(µg)
全血(ヒト)
20 ml 350~400
培養細胞(HeLa)
1 x 108 350~450

原理

Blood & Cell Culture DNA KitsのQIAGEN Genomic-tipは、様々な生物サンプルからフェノールやクロロホルムを使用せずに高純度の高分子DNAを精製するための、ユニークなQIAGEN陰イオン交換テクノロジーを使用しています。種々のサンプルに対応した溶解バッファーは、ヌクレアーゼ、ヒストンおよびDNA結合タンパク質のみならず、感染性のウイルス粒子さえもすぐに変性可能です。バッファーによって決定されるpH、および塩濃度の条件下では、DNAはカラム中のQIAGEN レジンに結合し、タンパク質、炭水化物および代謝物等の細胞構成物は結合せずに流出します。精製したDNAは高塩濃度バッファーで溶出されます。Genomic-tipはオープンカラム方式で、カラム樹脂が乾燥することはないので、操作中に付き添う必要はありません。従って、実際の取り扱い時間は最小限で済み、多数サンプルの同時並行処理に最適な方法です。

操作手順

サンプルは、最適な溶解バッファー内で溶解され(組織サンプルは予め機械的に破砕します)、同時にタンパク質も変性されます(フローチャート"QIAGEN Genomic-tip製法")。QIAGEN ProteaseあるいはProteinase Kを添加し、適切なインキュベーション後、ライセートをQIAGEN Genomic-tipにロードします。DNAはカラムに結合し、他の細胞構成物は流出します。残った夾雑物を除去するための洗浄ステップ後、純粋な高分子DNAを溶出し、イソプロパノールで沈殿させます。全操作中のマニュアル作業時間は血液、培養細胞では30分です。

Blood & Cell Culture DNA Kit は、血液および培養細胞からの高分子DNA分離に必要なものが全て入っている、即使用可能なキットです。

アプリケーション

Blood & Cell Culture DNA Maxi Kit で精製したDNAは 、次のようなアプリケーションに最適です。

サンガーおよび次世代シークエンシング
RFLP解析
遺伝子ターゲティング解析
トランスジェニック動物のスクリーニング
DNAフィンガープリント研究
PCR増幅
Feature
Specifications
Applications PCR, RFLP, blotting, screening
Elution volume 0.1–2 ml
Format Genomic tip
Main sample type Blood, cells
Processing Manual
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein DNA
Sample amount 20 ml/1 x 10e8
Technology Anion-exchange technology
Yield 350–400 µg

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クイックスタートプロトコール
1
キットハンドブック
1
安全データシート
2
References
0