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TopTaq Master Mix Kit

確実なエンドポイントPCR 用に使い易い冷蔵保存酵素マスターミックス

  • ピペッティング操作が極めて少なく、即使用可能なマスターミックス
  • 冷蔵保存なので凍結、融解の繰り返し不要
  • 高収量のPCR反応
  • 室温で取り扱える簡便性
  • 至適化済みの同一プロトコールで全てのPCRアッセイに対応

TopTaq DNA Polymeraseの特長と即使用可能なマスターミックスの長所を組み合わせることによりTopTaq Master Mix Kitは最高の使い易さを実現します。TopTaq Master Mix Kitには、TopTaq DNA Polymerase、至適化が最小限で済む画期的なTopTaq PCR Buffer、およびdNTP が含まれています。酵素保存バッファーに含まれるユニークなTopTaq Stabilizer により、TopTaq Master Mix は4℃で保存可能で、反応セットアップは室温で行なえ解凍の手間が不要です。マスターミックスには全ての成分が含まれているので、ピペッティングステップが減少し、コンタミのリスクが抑えられます。TopTaq Master Mixを25℃あるいは4℃で長期保存後も、高収量のPCR 産物が得られました。

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Product Cat. no. List price:
TopTaq Master Mix Kit (250)
For 200 x 50 µl reactions: 2x TopTaq Master Mix containing 250 units of TopTaq DNA Polymerase in total, 10x CoralLoad Concentrate, and RNase-Free Water
 200403
$148.00
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The TopTaq Master Mix Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Reliable high-yield PCR, independent of storage conditions.|Convenient CoralLoad Concentrate.|TopTaq procedure.|High yields of PCR product without optimization|Increased specificity of primer annealing.|Stabilization at 4°C.|
PCR was performed using TopTaq Master Mix stored at –20°C, 4°C, and 25°C for 4 months. Two different genes from human genomic DNA (prp, 750 bp and HugL, 1200 bp) were amplified according to the standard optimized protocol (duplicates shown). The results show high yields of specific PCR product. [A] Gel image produced by the QIAxcel System. Markers: GelPilot 1 kb Plus Marker and QX Alignment Marker 15 bp/10 kb. [B] The QIAxcel System fully automates sensitive, high-resolution capillary electrophoresis of up to 96 samples per run.|[A] CoralLoad Concentrate contains two gel-tracking dyes, enabling immediate gel loading of PCR products for [B] easy visualization of DNA migration.|Due to the unique proprietary TopTaq Stabilizer contained in the enzyme storage buffer, TopTaq DNA Polymerase is the first PCR kit that can be stored at 4°C. TopTaq Stabilizer binds to TopTaq DNA Polymerase, preventing polymerase inactivation. Template DNA and primers are also prevented from binding to the polymerase at low temperatures. During the initial denaturation step, the TopTaq Stabilizer freely dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity. This added convenience allows immediate reaction setup without the use of ice — saving the time usually required for reagent thawing.|[A] TopTaq DNA Polymerase was used to amplify 14 different PCR products from mammalian genomic DNA ranging in size from 100 bp to 2 kb according to the standard preoptimized protocol and using identical cycling conditions. [B] The same four targets (shown in lanes 11–14) were amplified under identical cycling conditions using DNA polymerases from the indicated suppliers. TopTaq DNA Polymerase (QIAGEN) resulted in high yields of specific PCR products, regardless of fragment size.|Ammonium and potassium cations in QIAGEN PCR Buffers increase specificity of primer annealing. K+ binds to the phosphate groups (P–) on the DNA backbone, stabilizing the annealing of the primers to the template. NH4+, which exists both as the ammonium ion and as ammonia under thermal-cycling conditions, can interact with the hydrogen bonds between the bases (B), destabilizing the weak hydrogen bonds at mismatched bases. The combined effect of the two cations maintains a high ratio of specific-to-nonspecific primer-template binding over a wide temperature range.|[A] TopTaq DNA Polymerase is stable at 4°C or room temperature due to the presence of low-molecular-weight molecules (TopTaq Stabilizer) on the surface of the polymerase. [B] At higher temperatures, the TopTaq Stabilizer completely dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity.|
Performance
TopTaq Master Mix Kitは至適化不要で、スタンダードから特殊用途までのエンドポイントPCRに使用できます。TopTaq Master Mixは25℃、4℃で4ヶ月間保存した後でも、高収量のPCR産物が得られ、TopTaq Master Mixが非常に安定で適応力があり、信頼できる増幅システムであることを証明しています（図“高収量のPCR反応”）。TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、長期冷蔵保存中のポリメラーゼの不活性化を防ぎます。バランスのとれたカリウムとアンモニウムイオンを含有するユニークなPCRバッファーがマスターミックスに含まれ、プライマー/テンプレートの特異的なアニーリングを促進すると同時に非特異的なアニーリングを抑制します。TopTaq DNAポリメラーゼは他社のDNAポリメラーゼに比べて高性能で、少量のテンプレート量を使用した場合でも、フラグメントサイズに関わらず、特異的産物が高収量で得られます（図“至適化なしに高収量のPCR産物）。
Principle

TopTaq Master Mix Kitは、比類のない使いやすさで信頼性の高いエンドポイントPCRを実現するためにQIAGENにより開発されました。TopTaq PCR systemが開発されるまで全てのPCR 酵素は－20℃で保存しなければなりませんでした。しかし、酵素溶液中に含まれているTopTaq Stabilizer のユニークな特性により、TopTaq DNA Polymerase は4℃で保存できる市場初のPCR増幅酵素です。このようにすぐに使用可能なマスターミックスは簡便性を増大します。異なるサイズのフラグメントを増幅する場合でも、TopTaq DNA Polymeraseにより高収量の特異性の高い産物が得られます（図“至適化なしに高収量のPCR産物”）。

TopTaq PCR Buffer

画期的なTopTaq PCR Bufferにより特異的PCR産物の増幅が促進されます。本バッファーは、各PCRサイクルのアニーリングステップ中に、プライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めます。このPCR バッファーはユニークな配合比のKClと (NH4)2SO4を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広い温度やMg2+濃度の範囲で厳密で特異的なプライマー・アニーリングを実現します（図“プライマーのアニーリングにおける特異性が増加”）。異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。

TopTaq Stabilizer

TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、長期冷蔵保存中のポリメラーゼの不活性化を防ぎます（“4℃で安定化”）。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防御します。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下させることなくポリメラーゼから遊離します。  

CoralLoad Concentrate

TopTaq Master Mix Kit にはCoralLoad Concentrate が添付されて更に使い易くなっています。CoralLoad Concentrate は2種類のマーカー色素とゲルローディング試薬が入っています。この画期的な試薬はピペッティングの目視化を改良し、DNAの移動距離の予測およびアガロースゲルの泳動時間の至適化が容易に行なえます。CoralLoad Concentrateを用いた際は、PCR反応液を直接アガロースゲルにロードできます。 ローディングバッファーの添加の必要がありません（図“簡便なCoralLoad Concentrate”）。

Procedure
TopTaq Master Mix KitはTopTaq DNA Polymeraseのすべての特長と即使用可能なマスターミックスの長所を提供します。TopTaq Master Mix Kitを使用すると、各反応成分を個々にピペッティングする必要がなく、コンタミのリスクやピペッティングによる反応条件の変動は最小限に抑えられ、PCRセットアップは迅速かつ容易に行なえます。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。また、氷なしに反応セットアップを即可能な便利性が加わり、通常必要な試薬を解凍する時間を節約できます (フローチャート“TopTaq 操作手順”）。 
至適化不要で高収量のPCR産物

ほとんどのPCRアッセイ用に使用可能な至適化済みのプロトコールにより、プライマーとテンプレートシステム毎での実験条件の検討は不要なため、時間および経費を節約できます。TopTaq Master Mix を25℃、4℃で4ヶ月間保存し、使用しても高収量の特異的なPCR産物が得られます（図“信頼性の高い高収量のPCR産物”）。

Applications

TopTaq Master Mix Kit は全てのエンドポイント PCR アプリケーションに最適です。

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Feature
Specifications
Applications PCR, RT-PCR, DNA Fingerprinting
dNTP's included Yes (in Master Mix)
Enzyme activity 5' -> 3' exonuclease activity
Mastermix Yes
Reaction type PCR amplification
Real-time or endpoint Endpoint
Sample/target type Genomic DNA and cDNA
Single or multiplex Single
Storage conditions Fridge storage and room temperature setup
With/without hotstart Without Hotstart

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Kit Handbooks
1
TopTaq PCR Handbook - (EN)
For standard and specialized end-point PCR applications without the need for optimization
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Safety Data Sheets
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Reliable high-yield PCR independent of storage conditions
Reliable high-yield PCR, independent of storage conditions.
PCR was performed using TopTaq Master Mix stored at –20°C, 4°C, and 25°C for 4 months. Two different genes from human genomic DNA (prp, 750 bp and HugL, 1200 bp) were amplified according to the standard optimized protocol (duplicates shown). The results show high yields of specific PCR product. [A] Gel image produced by the QIAxcel System. Markers: GelPilot 1 kb Plus Marker and QX Alignment Marker 15 bp/10 kb. [B] The QIAxcel System fully automates sensitive, high-resolution capillary electrophoresis of up to 96 samples per run.
Ready-to-load PCR buffer
Convenient CoralLoad Concentrate.
[A] CoralLoad Concentrate contains two gel-tracking dyes, enabling immediate gel loading of PCR products for [B] easy visualization of DNA migration.
TopTaq Procedure
TopTaq procedure.

Due to the unique proprietary TopTaq Stabilizer contained in the enzyme storage buffer, TopTaq DNA Polymerase is the first PCR kit that can be stored at 4°C. TopTaq Stabilizer binds to TopTaq DNA Polymerase, preventing polymerase inactivation. Template DNA and primers are also prevented from binding to the polymerase at low temperatures. During the initial denaturation step, the TopTaq Stabilizer freely dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity. This added convenience allows immediate reaction setup without the use of ice — saving the time usually required for reagent thawing.

High PCR product yields without optimization
High yields of PCR product without optimization
[A] TopTaq DNA Polymerase was used to amplify 14 different PCR products from mammalian genomic DNA ranging in size from 100 bp to 2 kb according to the standard preoptimized protocol and using identical cycling conditions. [B] The same four targets (shown in lanes 11–14) were amplified under identical cycling conditions using DNA polymerases from the indicated suppliers. TopTaq DNA Polymerase (QIAGEN) resulted in high yields of specific PCR products, regardless of fragment size.
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
Increased specificity of primer annealing.
Ammonium and potassium cations in QIAGEN PCR Buffers increase specificity of primer annealing. K+ binds to the phosphate groups (P–) on the DNA backbone, stabilizing the annealing of the primers to the template. NH4+, which exists both as the ammonium ion and as ammonia under thermal-cycling conditions, can interact with the hydrogen bonds between the bases (B), destabilizing the weak hydrogen bonds at mismatched bases. The combined effect of the two cations maintains a high ratio of specific-to-nonspecific primer-template binding over a wide temperature range.
Stabilization of TopTaq DNA Polymerase at 4°C
Stabilization at 4°C.
[A] TopTaq DNA Polymerase is stable at 4°C or room temperature due to the presence of low-molecular-weight molecules (TopTaq Stabilizer) on the surface of the polymerase. [B] At higher temperatures, the TopTaq Stabilizer completely dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity.