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TopTaq DNA Polymerase

使いやすい冷蔵保存酵素で確実なエンドポイントPCR用

  • 即座に反応セットアップができる4 ℃保存
  • 室温で取り扱える簡便性
  • 単一の至適化済みプロトコールで全てのPCRアッセイに対応
  • 高収量で信頼性の高いDNA増幅を実現

多くの簡便性とユニークな特長を持つTopTaq DNA Polymeraseは、今までにない使い易さと様々なPCR アプリケーションで高いDNA 収量を実現します。ユニークなTopTaq Stabilizerを含む酵素保存バッファーにより、TopTaq DNA Polymeraseは4℃でも保存可能で、室温で反応セットアップができます。2 種類のマーカー色素を含むCoralLoad Concentrate も添付されており、PCR 産物を即座にゲルにアプライできます。また同一のMg2+ 濃度とアニーリング温度を用いて様々なサイズの産物を増幅する時でも高収量のPCR産物が得られます。

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製品名 Cat. no. List price:
TopTaq DNA Polymerase (50)
50 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium), 10x PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
 200201
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TopTaq DNA Polymerase (250)
250 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium), 10x PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
 200203
¥22,500
TopTaq DNA Polymerase (1000)
4 x 250 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium), 10x PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
 200205
¥69,000
TopTaq DNA Polymerase (5000)
5000 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium; supplied in a single vial), 10x TopTaq PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
 200207
¥305,000
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TopTaq DNA Polymerase  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


  • Main Image Navi
簡便なCoralLoad Concentrate|TopTaq 操作手順|至適化不要で高収量なPCR 産物|プライマーのアニーリングにおける特異性が増加|4℃で安定化|
CoralLoad PCR Buffer [A] は、は2種類のゲルマーカー色素を含んでおり、PCR産物を即ゲルにアプライでき、DNAの泳動を簡単に可視化できる[B] 。|酵素保存バッファー中に含まれているTopTaq Stabilizerのユニークな特性により、TopTaq DNA Polymeraseは4℃で保存できる市場初のPCR増幅酵素です。TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、ポリメラーゼの不活性化を防ぎます。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防ぎます。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。この特性により、反応セットアップに氷は不要です。 また、試薬の解凍に必要な時間を節約できます。|[A] 100 bpから2 kbまでの大きさの14 種類のPCR 産物を哺乳動物ゲノムDNAから増幅するためにTopTaq DNA Polymeraseを用いた。 PCRは、スタンダードなプロトコールに従い同一のサイクリング条件を用いた。[B] 図A のレーン11 ～ 14と同じ4 種類のPCR産物を表記のメーカーのDNA ポリメラーゼを用いて同一サイクリング条件で増幅した。TopTaq DNA Polymerase（QIAGEN）はフラグメントのサイズにかかわらず高い収量で特異的なPCR 産物を増幅した。|QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基（P–）に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基（B）間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|[A]  TopTaq DNA Polymeraseは、表面に付着した低分子量の分子（TopTaq Stabilizer）によって、4℃あるいは室温でも安定化している。[B]  高温ではポリメラーゼ活性を低下することなくTopTaq Stabilizer はポリメラーゼから完全に遊離する。|
パフォーマンス
TopTaq DNA Polymeraseは、スタンダードな用途にも特殊なエンドポイントPCR用にも使用できます。TopTaq DNA Polymeraseは、4℃保存できる初のPCRキットです。酵素保存バッファー中のTopTaq Stabilizerが TopTaq DNA Polymerase に結合することにより、長期冷蔵保存中のポリメラーゼの不活性化を防ぎます最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizerはポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。TopTaq DNA Polymeraseは、テストした他社のDNA polymeraseよりも優れており、テンプレートが少量であっても、フラグメントのサイズにかかわらず高収量で特異性の高い産物が得られます（図 "至適化不要で高収量なPCR 産物）。
原理

TopTaq DNA Polymeraseは、組換え型94 kDaの耐熱性DNAポリメラーゼです。QIAGENが開発したTopTaq DNA Polymeraseは、卓越した使いやすさで信頼性の高いエンドポイントPCRを実現します。TopTaq PCR systemが開発されるまでは、全てのPCR 酵素は–20 ℃で保存しなければなりませんでした。 しかし、TopTaq DNA Polymeraseは、本酵素の保存用バッファーに含まれているTopTaq Stabilizer のユニークな特性による初の4℃保存可能なPCR増幅酵素です。 

高収量の増幅

TopTaq DNA Polymerase を画期的なTopTaq PCR Buffer と組み合わせることにより、非特異的なプライマー結合に対する特異的なプライマー結合の比率が高くなり、特異性の高いPCR 産物の増幅が促進されます。本製品のPCRバッファーは、独自のバランスでKClと(NH4)2SO4を含んでおり、従来のPCRバッファーと比べて幅広い範囲のアニーリング温度 とMg2+ 濃度条件で厳密なプライマーアニーリングが可能になります（図 "プライマーのアニーリングにおける特異性が増加"）。PCR条件を最適化するためにアニーリング温度やMg2+ 濃度を変化させる手間が大幅に減り、多くの場合は不要です。このようにTopTaq DNA Polymerase は Taq DNA Polymeraseと同様の確実性および特異性を持ち、いくつかのPCR システムでは性能がさらに改善され、その結果高収量のPCR産物が得られます (図 "至適化不要で高収量なPCR 産物")。

TopTaq Stabilizer

TopTaq Stabilizerが4℃または室温でTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、長期冷蔵保存中のポリメラーゼの変性を防ぎます。また、低温度でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防ぎます。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizerはポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します（図 "4℃で安定化"）。

CoralLoad Concentrate

TopTaq DNA PolymeraseにはCoralLoad Concentrateが付属しており、さらに簡便に操作できます。CoralLoad Concentrate は2種類のマーカー色素とゲルローディング試薬が入っていますこの独自の試薬はピペッティングの目視化を改良し、DNAの移動距離の予測およびアガロースゲルの泳動時間の至適化が容易に行なえます。CoralLoad Concentrateを用いた際は、PCR反応液を直接アガロースゲルにロードできます。 ローディングバッファーの添加の必要がありません（図 "簡便なCoralLoad Concentrate"）。

最適化されたプロトコールおよびバッファー

独自のPCRバッファーは、バランスの取れたカリウムイオンおよびアンモニウムイオンにより、TopTaq DNA Polymeraseとともに用いるとプライマーテンプレート間の特異的アニーリングを促進すると同時に非特異的なアニーリングを減らします。少量のテンプレートでも最大収量の特異的産物が得られます。ユニークなバッファー組成および最適化された単一のプロトコールにより個々のプライマーとテンプレートシステムの実験条件の至適化は不要なため、実験の時間および経費を節約できます。同一の Mg2+ 濃度およびアニーリング温度を用いて様々なサイズのPCR 産物を増幅した場合でも、特異的な増幅産物を高い収量で得ることができます (図 "至適化不要で高収量なPCR 産物").

Q-Solution

この革新的なPCR 添加剤はDNAの変性環境を改善することにより、増幅困難なテンプレートの増幅を可能にします。このユニークな試薬を使用すると、PCR条件が最適でない場合でもPCR が可能になり、改良されることがあります。DMSOや他の他のPCR 添加物とは異なり、Q-Solution はどのプライマーテンプレートシステムでも一定のワーキング濃度で使用し、毒性はありません。

 

操作手順

酵素保存バッファー中に含まれているTopTaq Stabilizerのユニークな特性により、TopTaq DNA Polymeraseは4℃で保存できる市場初のPCR増幅酵素です。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。また、この特性により、反応セットアップに氷は不要であり、試薬の解凍に必要な時間を節約できます（フローチャート "TopTaq 操作手順"）。全構成試薬は室温で操作可能であり、氷上での操作は不要です。ユニークなバッファー組成および最適化された同一プロトコールにより個々のプライマーとテンプレートシステムの実験条件の至適化は不要です。

アプリケーション

TopTaq DNA Polymerase は全てのエンドポイントPCR アプリケーションに最適です。

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Feature
Specifications
Applications PCR, RT-PCR, DNA fingerprinting
dNTP's included No
Enzyme activity 5' -> 3' exonuclease activity
Mastermix No
Reaction type PCR amplification
Real-time or endpoint Endpoint
Sample/target type Genomic DNA and cDNA
Single or multiplex Single
Storage conditions Fridge storage and room temperature setup
With/without hotstart Without Hotstart

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キットハンドブック
2
TopTaq PCR Handbook - (EN)
For standard and specialized end-point PCR applications without the need for optimization
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(JA) - TopTaq PCR プロトコールとトラブルシューティング
スタンダードから特殊用途までの至適化不要のエンドポイントPCR
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MSDS
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
Ready-to-load PCR buffer
簡便なCoralLoad Concentrate
CoralLoad PCR Buffer [A] は、は2種類のゲルマーカー色素を含んでおり、PCR産物を即ゲルにアプライでき、DNAの泳動を簡単に可視化できる[B] 。
TopTaq Procedure
TopTaq 操作手順

酵素保存バッファー中に含まれているTopTaq Stabilizerのユニークな特性により、TopTaq DNA Polymeraseは4℃で保存できる市場初のPCR増幅酵素です。TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、ポリメラーゼの不活性化を防ぎます。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防ぎます。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。この特性により、反応セットアップに氷は不要です。 また、試薬の解凍に必要な時間を節約できます。

High PCR product yields without optimization
至適化不要で高収量なPCR 産物
[A] 100 bpから2 kbまでの大きさの14 種類のPCR 産物を哺乳動物ゲノムDNAから増幅するためにTopTaq DNA Polymeraseを用いた。 PCRは、スタンダードなプロトコールに従い同一のサイクリング条件を用いた。[B] 図A のレーン11 ～ 14と同じ4 種類のPCR産物を表記のメーカーのDNA ポリメラーゼを用いて同一サイクリング条件で増幅した。TopTaq DNA Polymerase（QIAGEN）はフラグメントのサイズにかかわらず高い収量で特異的なPCR 産物を増幅した。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
プライマーのアニーリングにおける特異性が増加
QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基（P–）に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基（B）間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。
Stabilization of TopTaq DNA Polymerase at 4°C
4℃で安定化
[A]  TopTaq DNA Polymeraseは、表面に付着した低分子量の分子（TopTaq Stabilizer）によって、4℃あるいは室温でも安定化している。[B]  高温ではポリメラーゼ活性を低下することなくTopTaq Stabilizer はポリメラーゼから完全に遊離する。