SYBR Green を用いたRotor-Geneサイクラーでの超高速リアルタイムPCRおよび2ステップRT-PCR

  • 低コピーターゲットでも特異的で高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量で正確に検出
  • 至適化なしに信頼できる結果を実現する特別調製のマスターミックス
  • QuantiTect Primer Assayと組み合わせて最適な結果

Rotor-Gene SYBR Green PCR KitはRotor-Gene QおよびRotor-Geneサイクラーでの使用を目的としてデザインされ、SYBR Green I検出を用いたリアルタイム定量PCRあるいは2ステップリアルタイムRT-PCR で特異性の高いgDNAやcDNAターゲットの高速で高感度な定量を実現します。特別に至適化されたマスターミックスとRotor-Geneサイクラーの遠心エアコントロール方式の組み合わせにより、最高の性能を実現します。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

製品名 Product no. Cat. no. List price:
 
 
詳細表示
    varies
Can't order online?
To place an order via phone, email or for requesting a quote, please provide the product’s name, number and catalog number.
製品名 Cat. no. List price:
Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene SYBR Green PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204074
¥54,000

Rotor-Gene SYBR® Green PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


  • Main Image Navi
特異性と感度の高い検出|10コピーのターゲットを確実かつ高い特異性で検出|プライマーの特異的なアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
ヒト白血球cDNA の10倍段階希釈液(10 ng~0.1 ng)とBCL2 (B-cell CLL/lymphoma 2)用QuantiTect Primer Assay を用いて2ステップリアルタイム RT-PCRを行なった。[A] Rotor-Gene Q とRotor-Gene SYBR® Green PCR Kit、あるいは[B] AII社の装置とキットを用いて反応をtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは低いCT 値が得られ、triplicates内でより再現性が高い結果が得られた。融解曲線解析はシングルピークであり(挿入図)、ターゲットが特異的に増幅されたことを示す。|PPIA (cyclophilin A)用の QuantiTect Primer Assayを用いて、プラスミドDNAの10倍段階希釈液 (109~ 10コピー)のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene Qと Rotor-Gene SYBR® Green PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。[A] Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高いCT値が得られた。[B] 融解曲線解析はターゲットの特異的な増幅を示唆している。|Rotor-Gene Q PCRバッファー中の陽イオンによりプライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] Rotor-Gene SYBR® Green PCR Master Mix中のQ-Bondは、短い一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

Rotor-Gene SYBR Green PCR KitはcDNAターゲットの遺伝子解析で使用するのに最適です(図“特異性と感度の高い検出” および“10コピーのターゲットを確実かつ高い特異性で検出”)。

QuantiTect Primer AssaysはRotor-Gene SYBR Green PCR Kit と組み合わせると、至適化なしに特異的なPCR 産物の高感度な定量が行なえます(表参照)。

SYBR Green を用いたRT-PCR で卓越した性能
QIAGEN AII
CT 平均偏差 CT 平均偏差
BAX (BCL2結合Xタンパク質) 24.84 0.05 29.57 0.46
BCL2 (アポトーシス遺伝子) 26.96 0.05 32.83 0.29
MYC (がん原遺伝子) 28.42 0.21 35.26 0.72
β-アクチン(ハウスキーピング遺伝子) 20.24 0.03 24.39 0.12
ヒト白血球cDNA(1 ng)をテンプレートとして、SYBR Green を用いた2 ステップリアルタイムRT-PCR で使用した。4 種類のターゲットに対するQuantiTect Primer Assay を用いてtriplicate で反応を行なった:BAX、BCL2、MYC、β-Actin。
原理

Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit は Rotor-Gene Q において反応条件やサイクリング条件の至適化なしに信頼できる迅速なリアルタイムPCR定量を実現します。マスターミックス中の蛍光色素SYBR Green Iは、ターゲットに特異的な標識プローブを合成しなくても多数の異なるターゲットを解析できます。特異的なプライマーアニーリングを促進するK+とNH4+イオンのバランスの取れた配合により、特異性の高い増幅が確保され、PCRの高い特異性と感度を実現します (図 “プライマーの特異的なアニーリング”)。画期的なPCR 添加物であるQ-Bond により性能を損なうことなく高速サイクリングが行なえ、ラン時間はわずか45 分です(図“プライマーの高速なアニーリング”)。

2x Rotor-Gene SYBR Green PCR Kitの成分*
成分特長 利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase95℃、5分の活性化室温でのqPCRのセットアップ
Rotor-Gene SYBR Green PCR BufferNH4+とK+イオンの配合バランス特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いqPCR結果
ユニークな添加物Q-Bond より迅速なPCRランタイムでより早く結果が得られ、一日あたりの反応数も増大
SYBR Green I 色素ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生感度の高い定量
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)も含む。
操作手順

Rotor-Gene SYBR Green PCR Master Mixにより、反応条件やサイクリング条件の至適化が不要です。DNAテンプレートとプライマーをマスターミックスに添加し、サイクラーをプログラミングします。キットに添付のハンドブックに詳細な説明が記載されています。

2ステップリアルタイムRT-PCRを用いた遺伝子発現解析において、 Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit、 QuantiTect Reverse Transcription Kit、QuantiTect Primer Assays、Rotor-Gene Q の組み合わせは、最適化なしに開始できるトータルソリューションです。QuantiTect Reverse Transcription Kitは、ゲノムDNAコンタミの除去を組み合わせたcDNA合成をわずか20分で行ないます。QuantiTect Primer Assay は、ヒト、マウス、ラット、その他の生物種のほとんどの遺伝子に対応するバイオインフォマティックスで検証済みのプライマーセットです。アッセイはGeneGlobeウェブポータルサイトで容易に注文できます。

アプリケーション

Rotor-Gene SYBR Green PCR KitはRotor-Gene Q上でcDNAやgDNAターゲットの迅速なリアルタイム定量に最適です。本キットはまたRotor-Gene 3000およびRotor-Gene 6000でも使用可能です。

Rotor-Geneサイクラ―上でSYBR Green Iを用いてRNAターゲットを超迅速な1ステップでqRT-PCRで遺伝子解析する場合には、Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kitをご使用ください。

Feature
Specifications
Applications Real-Time quantification of genomic DNA or cDNA targets
Description For ultrafast quantitative real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I on Rotor-Gene cyclers
Reaction type Real-time PCR and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type DNA, cDNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
With or without ROX Without ROX dye

You are not authorized to download the resource

パンフレット
2
Now with even more applications!
詳細を表示
優れた温度均一性を実現するリアルタイムPCR 装置
詳細を表示
FAQ
18
FAQ ID -1141
表示
FAQ ID -1430
表示
FAQ ID -2104
表示
FAQ ID -2116
表示
FAQ ID -2117
表示
FAQ ID -2118
表示
FAQ ID -2119
表示
FAQ ID -2121
表示
FAQ ID -2122
表示
FAQ ID -2123
表示
FAQ ID -2124
表示
FAQ ID -2371
表示
FAQ ID -2654
表示
FAQ ID -2670
表示
FAQ ID -2678
表示
FAQ ID -2682
表示
FAQ ID -2688
表示
FAQ ID -2690
表示
キットハンドブック
4
For fast real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using SYBR Green I on Rotor-Gene cyclers
詳細を表示
For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
詳細を表示
Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit
Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit

SYBR Green I とRotor-Gene サイクラーを用いた高速リアルタイムPCR、2ステップRT-PCR、高速1ステップRT-PCR
詳細を表示
ゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ(SYBR Green検出)用
詳細を表示
安全データシート
1