配列特異的プローブを用いた超高速リアルタイム定量PCRおよび2ステップRT-PCR用

  • 低コピー数の標的遺伝子でも高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量で正確に検出
  • Rotor-Gene サイクラーでの信頼できる結果を超高速で実現するために最適化済み
  • 高速サイクリング用に特別に調製された即使用可能なマスターミックス
Rotor-Gene Probe PCR Kitは、Rotor-Gene Qおよびその他のRotor-Gene サイクラーでの使用を目的としてデザインされ、配列特異的プローブを用いたリアルタイムPCRや2ステップリアルタイムRT-PCRでgDNAおよびcDNAの超高速で高感度な定量を実現します。特別に至適化されたマスターミックスとRotor-Geneサイクラー の遠心エアコントロール方式の組み合わせにより、最高の性能を実現します。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

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Rotor-Gene Probe PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene Probe PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204374
¥60,000

Rotor-Gene Probe PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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高感度で再現性のある検出|精度の高いリアルタイムPCR|1個の細胞まで確実に検出|幅広いダイナミックレンジ|プライマーの特異的なアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
ヒトゲノムDNAの2倍段階希釈液(30 ng ~ 3.75 ng)と、IL1R2 (interleukin 1 receptor, type II)用にデザインしたTaqManアッセイを用いてリアルタイムPCRを行なった。[A] Rotor-Gene Q とRotor-Gene Multiplex PCR Kit、あるいは [B] AII社の装置とキットを用いて反応を行なった(1希釈液あたり5 replicates)。Rotor-Geneシステムでは低いCT値が得られ、replicates内においてばらつきがなく 、異なるテンプレート希釈液の差異をより明確に判別できた。|Rotor-Gene Q とRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてヒトゲノムDNAのリアルタイムPCR解析を行なった。[A] DNAの2倍段階希釈液 (30 ng [5000 copies] ~ 0.06 ng [20 copies]) を、IL1R2 (interleukin 1 receptor, type II)用にデザインしたTaqMan アッセイを用いてテンプレート希釈液あたり5 replicatesで解析した。各希釈系列間におけるCT値の平均サイクル差は1.07 サイクルであった。[B] IL1R2用にデザインしたTaqManアッセイを用いた5 ng DNAの解析。100 replicatesの標準偏差は0.21であった。[C]ACTB (actin, beta)用にデザインしたTaqManアッセイを用いた20 ng DNAの解析100 replicatesの標準偏差は0.29であった。|ACTB (actin, beta)用にデザインしたTaqMan アッセイを用いて、ヒトゲノムDNAの4倍段階希釈液(1~16,666個の細胞に相当)のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene QとRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高い結果が得られた。|PPIA (cyclophilin A)用にデザインしたTaqManアッセイを用いて、プラスミドDNAの10倍段階希釈液(109 ~ 10コピー)のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene QとRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高いCT値が得られた。|Rotor-Gene Q PCRバッファー中の陽イオンによりプライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] Rotor-Gene Probe PCR Master Mix 中のQ-Bondは、短い一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

Rotor-Gene Probe PCR Kitは定量PCR解析に最適で(図“高感度で再現性のある検出”、“精度の高いPCR”)、幅広いテンプレート量で信頼できる検出を実現します(表および図 “精度の高いPCR”、“1個の細胞まで確実に検出”、“幅広いダイナミックレンジ”)。

 

幅広いダイナミックレンジにわたり信頼できる検出
コピー平均CTCT
1,000,000,0005.113.07
100,000,0008.183.39
10,000,00011.573.04
1,000,00014.613.68
100,00018.293.28
10,00021.573.68
1,00025.253.06
10028.313.43
1031.74
効率0.99
直線性1
PPIA (cyclophilin A)用にデザインしたTaqManアッセイを用いて、プラスミドDNAの10倍段階希釈液(109 ~10コピー)のリアルタイムPCRを行なった。

原理

Rotor-Gene Probe PCR KitはRotor-Gene Qにおいて信頼できる2ステップリアルタイム定量RT-PCRを実現します。 反応条件やサイクリング条件の至適化は不要です。本キットは加水分解プローブ(例、TaqManプローブ)を使用するようにデザインされています。特異的なプライマーアニーリングを促進するK+/NH4+イオンのバランスの取れた組み合わせが特異性の高い増幅を確保し、PCRの高い特異性と感度を実現します (図 “プライマーの特異的なアニーリング”)。画期的なPCR 添加物であるQ-Bond により性能を損なうことなく高速サイクリングが行なえ、ラン時間はわずか45 分です(図“プライマーの高速なアニーリング”)。

2x Rotor-Gene Probe PCR Kitの成分*
成分特長利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase95℃、5分の活性化室温での定量PCRのセットアップ
Rotor-Gene Probe PCR BufferNH4+とK+イオンの配合バランス特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いqPCR結果
ユニークな添加剤Q-Bond より迅速なPCRランタイムでより早く結果が得られ、一日あたりの反応数も増大
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)も含む。
操作手順
即使用可能なRotor-Gene Probe PCR Master Mixにより、反応条件やサイクリング条件の至適化が不要です。DNAテンプレート、プライマー、プローブをマスターミックスに添加し、サイクラーをプログラミングします。キットに添付のハンドブックに詳細な説明が記載されています。

加水分解プローブ(例、TaqManプローブ)は、Rotor-Gene Probe PCR Kitと一緒にRotor-Gene Qで使用でき、マスターミックスにプライマー/プローブミックスとテンプレートを添加するだけで迅速で高感度な定量を実現します。

2ステップリアルタイムRT-PCRで良好な結果を得るためには、QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを合成することをお薦めします。ゲノムDNAの除去を組み合わせて、わずか20分で迅速なcDNA合成を実現します。

アプリケーション

Rotor-Gene Probe PCR Kitは、Rotor-Gene Q上で配列特異的なプローブを用いたgDNA/cDNAターゲットの迅速なリアルタイムPCRや2ステップリアルタイムRT-PCR用キットです。本キットはRotor-Gene 3000およびRotor-Gene 6000サイクラーにも対応しています。

Rotor-Geneサイクラー上で配列特異的なプローブを用いてRNAターゲットを超高速な1ステップqRT-PCRで遺伝子発現解析する場合には、Rotor-Gene Probe RT-PCR Kitをご使用ください。

Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets
Description For ultrafast quantitative real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
Reaction type Real-time PCR and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type DNA, cDNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes Sequence-specific probes
Thermal cycler Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
With or without ROX Without ROX dye

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パンフレット
2
Now with even more applications!
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優れた温度均一性を実現するリアルタイムPCR 装置
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キットハンドブック
2
For fast real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using sequence-specific probes on Rotor-gene cyclers.
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Rotor-Gene Probe PCR Kit
Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit

配列特異的なプローブとRotor-Gene サイクラーを用いた迅速なリアルタイムPCR、2ステップRT-PCR、1ステップRT-PCR
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安全データシート
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