QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits
配列特異的なプローブを用いた遺伝子発現解析用1 ステップマルチプレックスリアルタイムRT-PCR
- 至適化が不要なマルチプレックス解析
- 1 反応で複数のターゲットを解析可能
- わずか10 コピーのターゲットも高感度で検出
- ターゲット遺伝子とリファレンス遺伝子を確実に定量
- リファレンス遺伝子と3種類までのターゲットを同一チューブ内で検出可能
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitは、1ステップのマルチプレックスリアルタイムRT-PCRにより1反応で最高5種類のRNAターゲットを正確に定量します。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、至適化なしにほとんどのリアルタイムサイクラーで高感度で確実なマルチプレックスqRT-PCRを実現します。dNTP MixはdUTPを含み、オプションのUNG処理ができます。2種類のキットが入手できます：蛍光補正のためにROXが必要なサイクラー用QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitおよびその他のサイクラー用のQuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Kit。マスターミックスは2～8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
fr-BE
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Product
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Cat. no.
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List price:
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 100 µl QuantiTect Multiplex RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 0.5 ml QuantiTect Multiplex RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
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QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Master Mix (without ROX dye), 100 µl QuantiTect Multiplex RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Master Mix (without ROX dye), 0.5 ml QuantiTect Multiplex RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits are intended for molecular biology applications. These products are not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
Comparable amplification in triplex PCR and singleplex PCRs.|Detection of down to 10 copies of target RNA in duplex PCR.|Comparable amplification in 4-plex PCR and singleplex PCRs.|QIAGEN multiplex kits.|Unique PCR buffer.|
Triplex, real-time one-step RT-PCR was performed on the Applied Biosystems 7500 using the QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit and TaqMan probes. The template was 20 ng total RNA from the Burkitt's lymphoma cell line Ramos. Reactions were performed in triplicate. 28S rRNA was detected using a HEX labeled probe. POLD3 (accessory subunit of DNA polymerase delta 3) was detected using a FAM labeled probe. CDK2 (cell cycle-dependent kinase 2) was detected using a Cy5 labeled probe. For comparison, the targets were also quantified by singleplex, real-time one-step RT-PCR (black curves). Curves for triplex PCR and singleplex PCRs overlap, demonstrating comparable amplification (i.e., equivalent CT values).|Duplex, real-time one-step RT-PCR was performed on the Applied Biosystems 7500 using the QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit and TaqMan probes. The target was [A] 1000, 100, or 10 copies of an in vitro transcript of a viral gene, each spiked with [B] 1000 copies of synthetic internal control RNA. Reactions were performed in replicate. Target RNA was detected using a FAM labeled probe. Internal control was detected using a HEX labeled probe. 7 replicates of 10 copies of target RNA were reproducibly detected.|4-plex, real-time one-step RT-PCR was performed on the LightCycler 2.0 using the QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit and TaqMan probes. The template was 10, 1, or 0.1 ng of total RNA purified from K562 cells. [A] c-myc (a proto-oncogene) was detected using a FAM labeled probe. [B] GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) was detected using a HEX labeled probe. [C] HSP89 (a heat shock protein) was detected using a Texas Red labeled probe. [D] H28S (28S rRNA) was detected using an Alexa Fluor 660 labeled probe. For comparison, the targets were also quantified by singleplex, real-time one-step RT-PCR (black curves). Curves for 4-plex and singleplex PCRs overlap, showing comparable amplification (i.e., equivalent CT values).|QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits provide a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, probes, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).|[A] NH4+ ions prevent nonspecific primers from annealing to the template. [B] Synthetic Factor MP, an innovative PCR additive, increases the local concentration of primers at the template. Together with K+ and other cations, Factor MP stabilizes specifically bound primers, allowing efficient primer extension by HotStarTaq DNA Polymerase.|
Performance
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitはわずか10コピーのターゲットRNAを高い感度で検出しました（図"Duplex PCR で10 コピーまでのターゲットRNA を検出"）。スタートコピー数が最高100,000倍も異なるような転写物を4-plexアッセイで定量した結果、良好な結果が得られました（図"4plex PCR およびSingle PCR で同等の増幅"）。 遺伝子発現の相対定量は、同一ウェルあるいはチューブ中でターゲット遺伝子と内因性コントロール遺伝子の発現を定量することにより、正確に行なえます。QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitを用いて行なったマルチプレックス反応で得られたターゲットのCT値は、ターゲットの増幅を別々の反応で行なったコントロール実験で得られたCT値と同等の結果が得られました（図"Triplex PCR とSingle PCR で同等の増幅"）。このことは異なるターゲットが同一のマルチプレックス反応液中で同じ効率と感度で増幅され、互いが増幅反応を妨害しないことを証明しました。
Principle
遺伝子発現の相対定量は、同一ウェルあるいはチューブ中でターゲット遺伝子と内因性コントロール遺伝子の発現を定量することにより、正確に行なえます。QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitは1ステップのマルチプレックスRT-PCRで初回実験から良好な結果が得られます（図"QIAGEN Multiplex Kits"）。至適化したマスターミックスを使用することで、マルチプレックス反応のPCR産物は、対応する単一増幅反応のPCR産物と同じ効率および感度で確実に増幅されます。標的遺伝子のコピーが10個もあれば、本キットで検出することができます。
別々の反応ではなく同一反応内でリファレンス遺伝子と標的遺伝子を増幅することで、マニュアルでの作業によるエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が高くなります。QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mixに入っている画期的な合成添加剤Factor MPとK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定にアニーリングし、高いPCR効率を実現します（図 "ユニークなPCRバッファー"）。さらに、HotStarTaq DNA Polymeraseが、厳密なホットスタートを実現して非特異的産物の形成を防ぐ一方で、逆転写酵素の最適なブレンドが、様々な量のRNA テンプレートからcDNAを合成することを可能にします。
QuantiTect Multiplex RT-PCR Master MixもdUTPを含んでいるので、uracil-N-glycosylase（UNG）による前処理をPCR開始前に行なうことができます。従って、混入しているPCR産物がその後のPCR反応に影響を与えることはありません。
| HotStarTaq DNA Polymerase |
95℃、15分の活性化 |
室温での定量PCRのセットアップ |
| QuantiTect Multiplex RT-PCR Buffer |
NH4+ イオンとK+ イオンの配合バランス |
特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果 |
| 合成添加剤Factor MP |
同一チューブで4遺伝子まで信頼できるマルチプレックス解析が可能 |
| dNTP Mix |
一部dTTPの代わりにdUTPを含むので、PCR産物にコンタミが予想される場合、オプションのUNG処理が可能 |
PCR産物のキャリーオーバーによるコンタミをオプションのUNG処理により除去 |
| ROX 色素* |
Applied Biosystems およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正 |
ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない |
| Omniscript Reverse TranscriptaseおよびSensiscript Reverse Transcriptase |
RNAに対する高い親和性を有する酵素の特別なブレンド |
複雑な二次構造のRNAでも転写可能 |
Procedure
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitsは、反応条件やサイクリング条件の至適化が不要な、即使用可能なマスターミックスです。ハンドブックに記載されたプロトコールは1種類のみで、市販のほとんどのリアルタイム用サーマルサイクラーと推奨する色素で使用可能です。必要に応じて、前の反応液からのPCR産物の混入を防ぐために、反応液をuracil-N-glycosylase（UNG）で前処理することができます。
マスターミックス中にROX パッシブリファレンス色素が添付されているキットもしくは添付されていないキットを選択することで、ほぼ全ての市販のリアルタイムサイクラーで使用することができます（表参照）。ROX濃度が至適化されているため、コピー数が少ない場合の検出でも自動データ解析を行なえます。
| マスターミックスに添加済み |
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits |
Applied Biosystems社のサイクラー |
| マスターミックスに入っていない |
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits |
Rotor-Geneサイクラー、およびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilentなどのメーカーのサイクラー |
Applications
QuantiTect Multiplex RT-PCR KitはRNAターゲットの遺伝子発現解析をほとんどのサーマルサイクラーで行なえます。これには、Applied Biosystems およびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent 製サイクラーを含みます。Rotor-Gene Q および他のRotor-Gene サイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に開発されたRotor-Gene Multiplex RT-PCR Kitの使用をお勧めします。
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Feature
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Specifications
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Applications
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Real-time quantification of RNA targets in a multiplex format
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Description
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For quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
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Reaction type
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Real-time one-step RT-PCR
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Real-time or endpoint
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Real-time
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Sample/target type
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RNA targets
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Single or multiplex
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Multiplex
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SYBR Green I or sequence-specific probes
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Sequence-specific probes
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Thermal cycler
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Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time cyclers, Roche LightCycler 480, and Bio-Rad iCycler iQ)
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With or without ROX
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With ROX or without
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit - with master mix containing ROX passive reference dye
QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit - with master mix free of ROX passive reference dye
For gene expression analysis by quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
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Show details
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Images
Comparable amplification in triplex PCR and singleplex PCRs.
Triplex, real-time one-step RT-PCR was performed on the Applied Biosystems 7500 using the QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit and TaqMan probes. The template was 20 ng total RNA from the Burkitt's lymphoma cell line Ramos. Reactions were performed in triplicate. 28S rRNA was detected using a HEX labeled probe. POLD3 (accessory subunit of DNA polymerase delta 3) was detected using a FAM labeled probe. CDK2 (cell cycle-dependent kinase 2) was detected using a Cy5 labeled probe. For comparison, the targets were also quantified by singleplex, real-time one-step RT-PCR (black curves). Curves for triplex PCR and singleplex PCRs overlap, demonstrating comparable amplification (i.e., equivalent CT values).
Detection of down to 10 copies of target RNA in duplex PCR.
Duplex, real-time one-step RT-PCR was performed on the Applied Biosystems 7500 using the QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit and TaqMan probes. The target was [A] 1000, 100, or 10 copies of an in vitro transcript of a viral gene, each spiked with [B] 1000 copies of synthetic internal control RNA. Reactions were performed in replicate. Target RNA was detected using a FAM labeled probe. Internal control was detected using a HEX labeled probe. 7 replicates of 10 copies of target RNA were reproducibly detected.
Comparable amplification in 4-plex PCR and singleplex PCRs.
4-plex, real-time one-step RT-PCR was performed on the LightCycler 2.0 using the QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit and TaqMan probes. The template was 10, 1, or 0.1 ng of total RNA purified from K562 cells. [A] c-myc (a proto-oncogene) was detected using a FAM labeled probe. [B] GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) was detected using a HEX labeled probe. [C] HSP89 (a heat shock protein) was detected using a Texas Red labeled probe. [D] H28S (28S rRNA) was detected using an Alexa Fluor 660 labeled probe. For comparison, the targets were also quantified by singleplex, real-time one-step RT-PCR (black curves). Curves for 4-plex and singleplex PCRs overlap, showing comparable amplification (i.e., equivalent CT values).
QIAGEN multiplex kits.
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits provide a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, probes, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).
Unique PCR buffer.
[A] NH4+ ions prevent nonspecific primers from annealing to the template. [B] Synthetic Factor MP, an innovative PCR additive, increases the local concentration of primers at the template. Together with K+ and other cations, Factor MP stabilizes specifically bound primers, allowing efficient primer extension by HotStarTaq DNA Polymerase.
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