QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit

SYBR Green Iを用いた遺伝子発現解析用高速1ステップRT-PCR
  • 時間を最大60 %まで短縮し迅速な結果
  • 低コピーの標的遺伝子でも高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量を正確に検出
  • 高速サイクリングに即使用可能な至適化済みマスターミックス
  • 標準的および高速サイクラーに対応する共通プロトコール

QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitはSYBR Green I 検出を用いた1ステップリアルタイムRT-PCRで迅速かつ特異的にRNAターゲットを定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みの即使用可能なマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなく標準的なサイクラーで短時間でリアルタイムRT-PCRを実現します。ホットスタートと独自のqRT-PCRバッファーシステムの組み合わせは、RNAターゲットのリアルタイム定量を高い特異性と感度で実現します。QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitはわずか10分で効率的なcDNA合成を実現する至適化済みRT Mixも付いています。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

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QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204154
$944.00
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QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 0.5 ml QuantiFast RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204156
$3,898.00
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The QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Significantly reduced RT-PCR times.|Specific one-step RT-PCR.|Detection over 7 logs of template.|Specific primer annealing.|Fast primer annealing.|
The QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit reduces total RT-PCR run time by up to 60% in real-time one-step RT-PCR on standard cyclers (40 cycles without melting curve analysis; comparison with standard QIAGEN real-time PCR kits). L: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500; A3: ABI PRISM 7000.|Expression of BCL2 (an apoptosis gene) in HeLa cells was analyzed by one-step RT-PCR on the LightCycler 2.0. Duplicate reactions were run using 10-fold RNA dilutions (100 ng to 0.1 ng). Unlike [B] the instrument-dedicated kit from Supplier R (which was used according to the fast cycling protocol), the [A] QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit provided specific amplification (single peak in melting curve analysis) and sensitive quantification (lower CT values that are evenly spaced from each other).|The QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit provided accurate quantification of HSP89 (a heat shock protein) transcript over a wide dynamic range in a one-step RT-PCR reaction on the Applied Biosystems 7500 Fast System. Reactions were run in triplicate using 10-fold dilutions of in vitro transcript (107 down to 10 copies).|A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers and probes to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing annealing of primers and probes. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.|[A] Q-Bond in QuantiFast Buffer increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.|
Performance

Fastサイクリングモードで使用した他のリアルタイムRT-PCRキットに比較して、QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitでは卓越した特異性と感度の高い結果が得られます(図"特異的な1ステップRT-PCR結果")。RT-PCR時間を最大60 %まで短縮(図"PCR時間を顕著に短縮")するため、結果をより速く得られます。従って、サンプル処理数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。

1ステップRT-PCRの結果は2ステップRT-PCRの結果と同等です(表参照)。

Applied Biosystems 7500 Fast Systemで2ステップRT-PCRおよび1ステップRT-PCRの性能を比較
平均CT
cDNA/RNA量 QuantiFast SYBR Green PCR Kit(2ステップRT-PCR) QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit(1ステップRT-PCR)
10 ng 20.27 20.11
1 ng 23.44 23.46
0.1 ng 27.18 26.86
NTC 45.00 45.00
T98G細胞のAK2(アデニル酸キナーゼ)発現では、2ステップRT-PCR解析と1ステップRT-PCR解析のCT値は同等であった。反応はtriplicateで行なった。NTC:No template control。

QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitは、数段階に対数希釈したテンプレート液でターゲットの正確な定量を実現します(図"107倍希釈したテンプレートの検出")。低コピー数のターゲットのわずかな差異も明確に区別することができます。

Principle

QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitでは、標準的なサイクラー、高速サイクラーともに、広範なダイナミックレンジで非常に高感度、特異的な結果が得られます。マスターミックス中の蛍光色素SYBR Green Iは、ターゲットに特異的な標識プローブを合成しなくても多数の異なるターゲットを解析できます。新規PCR添加剤のQ-Bondを含有する特別に開発された高速RT-PCR用バッファーにより、変性、アニーリングおよびエクステンション時間も顕著に短縮されます(図"プライマーの高速なアニーリング")。PCRバッファー中のK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーの特異的なアニーリングが促進され、高いPCR効率と感度を実現します(図"特異的なプライマーアニーリング")。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseで活性化に必要な時間は95℃ではわずか5分で、厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。至適化済みのQuantiFast RT Mixはわずか10分でcDNA合成を実現します。 

2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitの成分*
成分 特長 利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95℃、5分間の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Buffer NH4+/K+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
ユニークなQ-Bondを含む PCR反応時間が短縮されるため、迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる
SYBR Green I色素 ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 高感度な定量
ROX色素 Applied Biosystems社およびオプションのAgilent社の装置で蛍光シグナルを補正 サイクラーでの正確な定量にはROX色素が必要。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
QuantiFast RT Mix RNAへのアフィニティーが高い逆転写酵素の特殊なブレンド 複雑な二次構造でも、わずか10分でRNAを転写可能
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)も含む。
Procedure

QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitは反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。プライマーおよびDNAテンプレートをPCRマスターミックスに添加するだけで、すぐに反応を開始することができます。ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、全てのリアルタイムサイクラーで迅速で正確な結果が得られます。

1ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るためには、QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitとQuantiTect Primer Assaysを組み合わせて使用することをお薦めします。これらは、ヒト、マウス、ラット、その他の生物種の全ての遺伝子に対応するバイオインフォマティックスで検証済みのプライマーセットです。アッセイはGeneGlobe Webポータルサイトで簡単にオーダーできます。

Applications

QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitはRNAターゲットの遺伝子発現解析に使用できます。QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitsはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、RocheおよびAgilent社製などの市販されている全てのリアルタイムサイクラーに対応します。Rotor-Gene Qおよびその他のRotor-Geneサイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に特別に開発されたRotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications SYBR Green-based, real-time, one-step RT-PCR
Reaction type Real-time and one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQs
38
FAQ ID -1085
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FAQ ID-751
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FAQ ID -849
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Kit Handbooks
2
For fast, quantitative, real-time, one-step RT-PCR using SYBR Green I
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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Significantly reduced PCR times
Significantly reduced RT-PCR times.
The QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit reduces total RT-PCR run time by up to 60% in real-time one-step RT-PCR on standard cyclers (40 cycles without melting curve analysis; comparison with standard QIAGEN real-time PCR kits). L: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500; A3: ABI PRISM 7000.
Specific one-step RT-PCR on the LightCycler 2.0.
Specific one-step RT-PCR.
Expression of BCL2 (an apoptosis gene) in HeLa cells was analyzed by one-step RT-PCR on the LightCycler 2.0. Duplicate reactions were run using 10-fold RNA dilutions (100 ng to 0.1 ng). Unlike [B] the instrument-dedicated kit from Supplier R (which was used according to the fast cycling protocol), the [A] QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit provided specific amplification (single peak in melting curve analysis) and sensitive quantification (lower CT values that are evenly spaced from each other).
Detection over 7 logs of template in one-step RT-PCR ont eh Applied Biosystems 7500 Fast System.
Detection over 7 logs of template.
The QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit provided accurate quantification of HSP89 (a heat shock protein) transcript over a wide dynamic range in a one-step RT-PCR reaction on the Applied Biosystems 7500 Fast System. Reactions were run in triplicate using 10-fold dilutions of in vitro transcript (107 down to 10 copies).
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
Specific primer annealing.
A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers and probes to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing annealing of primers and probes. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.
Fast primer annealing with Q-Bond
Fast primer annealing.
[A] Q-Bond in QuantiFast Buffer increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.