配列特異的なプローブを用いた遺伝子発現解析用高速1 ステップリアルタイム定量RT-PCR
  • 時間を最大60%まで短縮し迅速な結果
  • 低コピー数の標的遺伝子でも高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量で正確に検出
  • 高速サイクリングに即使用可能な至適化済みマスターミックス
  • スタンダードおよび高速サイクラーに対応する1種類のプロトコール

QuantiFast Probe RT-PCR Kitsは配列特異的なプローブを用いて1ステップリアルタイムRT-PCRで迅速かつ高感度にRNAターゲットを定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みのマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなくほとんどのサイクラーで短時間でリアルタイムPCRを実現します。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、最適化実験の必要なしにほとんどのサイクラーで高感度な定量RT-PCRを実現します。本キットにはわずか10分で効率的なcDNA合成を実現する至適化済みRTミックスも付いています。蛍光補正のためにROX色素が必要なサイクラー用にQuantiFast Probe RT-PCR Kit、およびその他のサイクラーに対応するQuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kitの2種類のキットフォーマットがあります。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

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QuantiFast Probe RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204454
¥86,000
QuantiFast Probe RT-PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 0.5 ml QuantiFast RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204456
¥350,000
QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 210 µl ROX Dye Solution, 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 ml RNase-Free Water
204554
¥86,000
QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 0.5 ml QuantiFast RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204556
¥350,000

QuantiFast Probe RT-PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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RT-PCR時間を顕著に短縮|高感度な1 ステップRT-PCR結果|同等のダイナミックレンジ|感度を損なわずにより迅速な結果を実現|幅広いダイナミックレンジと高感度を実現|特異的なプライマーアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
QuantiFast Probe Kitは、標準的なサーマルサイクラーでリアルタイム1ステップRT-PCRトータル時間を最大60%まで短縮する(40サイクル;標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 790、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。|ヒト白血球RNA の10 倍段階希釈液(0.1 ng~ 100 ng)と、Primer Express でデザインしたIL12RBI (type I transmembrane protein)用TaqMan アッセイを用いて、Applied Biosystems 7500 Fast System上でduplicate で反応を行なった。[A] QuantiFast Kit は、[B] Supplier Iのキット(標準的サイクリングプロトコールを使用)と比較して高い感度を示し、低いCT 値とわずか0.1 ngのRNAからの転写物の定量を実現した。|Primer ExpressでデザインしたTaqManアッセイを用いてヒト白血球でユビキチン発現を解析した。ABI PRISM 7900サイクラーで2ステップおよび1ステップの定量PCR反応をduplicateで行なった。[A] QuantiFast Probe PCR Kit を用いてcDNAの10倍段階希釈液(100 ng~ 10 pg)を解析した。[B] QuantiFast Probe RT-PCR Kit を用いてRNAの10倍段階希釈液(100 ng ~ 10 pg)を解析した。|ヒト白血球RNAの10倍段階希釈液(100 pg~0.01 pg)と28S rRNA用TaqMan Gene Expression Assayを用いてtriplicateで反応を行なった。[A] QuantiFast Kit は、[B]Supplier AII の標準的なサイクリングキット(標準的サイクリングプロトコールを使用)よりも高い感度を示し、非常に低いCT 値とわずか0.01 pg のRNAからの定量を実現した。|ヒト白血球RNの10倍希釈液とβ-actin用TaqManアッセイを用いてtriplicate で反応を行なった。QuantiFast Probe RT-PCR Kit により100 ng から1 pg までのRNA テンプレートの正確な遺伝子発現解析ができた。|バランスの取れたKCl および(NH4)2SO4 の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートへの特異的なアニーリングを促進する。K+ は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+ は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

QuantiFast Probe RT-PCR Kits は他のリアルタイムPCRキットより優れた性能を示し、高感度な結果を実現します(図 "高感度な1ステップRT-PCR 結果")。RT-PCR時間を60%まで短縮し(図 "PCR時間を顕著に短縮")、RT-PCRのパフォーマンスを損なわずに迅速なPCR結果が得られます(図 "感度を損なわずにより迅速な結果を実現")。従って、サンプル数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。QuantiFast Probe RT-PCR Kit を使用する場合、高速サイクラーでも標準的なサイクラーでも同じプロトコールです。

QuantiFast Probe PCR Kitは幅広いダイナミックレンジにわたり正確な定量を実現します(図"同等のダイナミックレンジ")。10の6乗まで希釈したテンプレートを正確に検出できます(図 "幅広いダイナミックレンジおよび高感度を実現")。

原理

QuantiFast Probe RT-PCR Kit では、標準サイクラーまたは高速サイクラーのどちらでも幅広いダイナミックレンジの高感度かつ迅速な結果が得られます。本キットは、加水分解プローブによる検出(例、TaqMan あるいはその他のダブル標識プローブ)やFRETプローブをはじめとする全種類の配列特異的プローブを使用できるようデザインされています。至適化済みQuantiFast RT Mixを用いると、わずか10分で cDNAを合成できます。また、特別に開発された高速RT-PCRバッファーは斬新な添加剤 Q-Bondを含んでおり、変性、アニーリング、エクステンションの時間を大幅に短縮します(図 "プライマーの高速なアニーリング")。また、RT-PCRバッファー中のK+イオンおよびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率と感度を実現します(図 "特異的なプライマーアニーリング")。また、HotStarTaq Plus DNA Polymerase は95℃でわずか5分で活性化でき、厳密なホットスタートが可能であると同時に非特異的産物の形成を防ぎます。  

2x QuantiFast Probe RT-PCR Kitの成分*
成分 特長 利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95℃、5分の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiFast Probe RT-PCR Buffer NH4+イオンおよび K+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
ユニークなQ-Bond を含む PCR反応時間が短縮されるため迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる
ROX色素 Applied Biosystems製装置およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正 ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
QuantiFast RT Mix 別包装の溶液でPCRセットアップ中に添加 わずか10 分で迅速にcDNA合成
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTPおよびdTTP)も含む。ROX色素はマスターミックス中に含有あるいは別包装の溶液
操作手順

QuantiFast Probe RT-PCR Kits には、反応条件やサイクリング条件の最適化実験が不要で即使用可能なマスターミックスが入っています。テンプレートRNA、プライマー、プローブをマスターミックスに加えハンドブックのプロトコール通りに操作するだけで、どのリアルタイムサイクラーでも迅速に信頼性の高い結果が得られます。マスターミックス中にROX passive reference dye が入ったキットまたは入っていないキットをお求めいただけますので、実質的にあらゆるリアルタイムサイクラーで使用できます(表を参照)。ROX濃度が至適化されているため、コピー数が少ない場合の検出でも自動データ解析を行なえます。

正しいQuantiFast Probe RT-PCR Kitの選択ガイド
ROX 色素 キット 対応するサイクラー
マスターミックスに添加済み QuantiFast Probe RT-PCR Kit Applied Biosystems 7500以外のApplied Biosystemsの全てのサイクラー
別チューブで添付 QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit Applied Biosystems 7500 および Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent、その他のサイクラー
アプリケーション

QuantiFast Probe RT-PCR Kitは、プローブを利用したRNAターゲットの遺伝子発現解析をほとんどのサーマルサイクラーで行なえます。これには、Applied Biosystems およびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent 製サイクラーを含みます。Rotor-Gene Qおよび他のRotor-Geneサイクラーを使用する場合は、専用に開発されたRotor-Gene Probe RT-PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications Probe-based, real-time RT-PCR
Reaction type Real-time one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes Sequence-specific probes
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX Available with ROX in master mix and with ROX as a separate vial

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FAQ
27
FAQ ID -1085
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サイエンティフィック・ポスター
1
キットハンドブック
2
配列特異的なプローブを用いた高速な1ステップ・リアルタイム定量RT-PCR
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QuantiFast Probe RT-PCR Kit
QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit For fast, quantitative, real-time, one-step RT-PCR using sequence-specific probes
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