QuantiFast Multiplex PCR Kits
配列特異的なプローブを用いた迅速なマルチプレックスリアルタイムPCRおよび2ステップ定量RT-PCR
- 同一チューブ内で再興種類のターゲットを高感度で検出
- 時間を最大50%まで短縮し迅速な結果
- 至適化実験なしに良好なマルチプレックスPCRを実現
- 発現量に差異がある複数のターゲットでも信頼性のある定量が可能
QuantiFast Multiplex PCR Kit は、マルチプレックスリアルタイムPCRまたは 2ステップRT-PCRにより、同一チューブ中で最高4種類のcDNAまたはゲノムDNAターゲットを高速かつ確実に定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みのマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなくほとんどのサイクラーで性能を損なうことなく高速なマルチプレックスPCR を行なえます。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、至適化なしにほとんどのサイクラーで高感度なqRT-PCRを実現します。2種類のキットが入手できます:蛍光補正のためにROXが必要なサイクラー用QuantiFast Multiplex PCR Kit およびその他のサイクラー用のQuantiFast Multiplex PCR +R Kit。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
en-AU
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Product
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Cat. no.
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List price:
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QuantiFast Multiplex PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (with ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (with ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (80)
Trial kit for 80 x 25 µl reactions: 1 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 45 µl ROX Dye Solution, 2 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (4000)
For 4000 x 25 µl reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 2 x 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex PCR Kits are intended for molecular biology applications. These products are not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
Significantly reduced PCR times.|Sensitive duplex PCR and wide dynamic range.|Comparable results in triplex and singleplex PCR.|Uncompromised sensitivity.|Fast primer annealing.|QIAGEN multiplex kits.|Unique PCR buffer.|Linear CT values over twofold decreases in template.|
QuantiFast Multiplex Kits reduce total PCR run time by up to 50% in real-time two-step RT-PCR (40 cycles run; comparison with QuantiTect Multiplex Kits). I: iCycler iQ; L1: LightCycler 480; L2: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500 Fast System; M: Mx3005P. |Duplicate reactions were run on the Applied Biosystems 7500 Fast System using a DNA template mix providing 108 copies of β-actin (data shown in insets) and 106 to 10 copies of RPS27A (a ribosomal protein). The [A] QuantiFast Multiplex PCR +R Kit showed clearly higher sensitivity than the [B] duplex PCR kit from Supplier AII, enabling the cycler in fast-cycling mode to detect 10 copies of target and quantify over 6 log dilutions of template.|Triplex and singleplex PCR were carried out on the LightCycler 480 using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit and Primer Express designed TaqMan assays for [A] RPS27A (a ribosomal protein), [B] GAPDH (a housekeeping gene), and [C] UBC (a housekeeping gene). The template was HeLa cell cDNA (10 ng, 1 ng, or 0.1 ng), and reactions were run in duplicate. The comparable CT values for triplex PCR (colored curves) and singleplex PCR (gray curves) demonstrate the reliability of triplex PCR with the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit when analyzing targets of differing abundance.|4-plex, real-time PCR was carried out using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit and Primer Express designed TaqMan assays on the Applied Biosystems 7500 Fast System. Triplicate reactions were run using 10 ng Ramos cell line cDNA.|[A] Q-Bond in QuantiFast Buffer allows the DNA polymerase and primer to bind as a single complex, reducing the annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing annealing time.|QuantiFast Multiplex PCR Kits provide a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).|[A] NH4+ ions prevent nonspecific primers from annealing to the template. [B] Synthetic Factor MP, an innovative PCR additive, increases the local concentration of primers at the template. Together with K+ and other cations, Factor MP stabilizes specifically bound primers, allowing efficient primer extension by HotStarTaq Plus DNA Polymerase.|Duplex and singleplex PCR were carried out using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit and assays for the t(8;14) chromosomal translocation and for GAPDH on the Applied Biosystems 7500 Fast System. Quadruplicate reactions were run using genomic DNA from the Ramos cell line as template (twofold dilutions from 10 ng to 0.625 ng). CT values increased linearly by 1 CT value with decrease in template dilution for both the [A] singleplex and [B] duplex reactions, demonstrating the ability of the kit to precisely discriminate between small differences in template amount.|
Performance
QuantiFast Multiplex PCR Kit に添付の特化されたマスターミックスにより、迅速なマルチプレックス反応のセットアップができ、singleplex PCRデータに匹敵するマルチプレックスPCRデータを提供し、初めての実験でも良好な結果が得られます(図 "triplexとsingleplex PCRで同等の結果を実現")。本キットを用いると、テンプレート量のわずかな差異を明確に判別できます。QuantiFast Multiplex PCR Kitsは、発現量が大きく異なる2種類のターゲットで、連続2倍希釈したテンプレート量でさえも正確に定量できます(図 "テンプレート量の連続2倍希釈液でも直線性の高いCT 値")。
QuantiFast Multiplex PCR Kit はPCR時間を最大50%まで短縮できるため、結果がより速く得られます(図 "PCR時間を顕著に短縮")。わずか10コピーのターゲットを60分で検出できます(図 "広いダイナミックレンジを持つ高感度なduplex PCR")。従って、サンプル数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。最高4 種類のターゲットのマルチプレックスリアルタイムPCRにおいて性能を損なうことなく、迅速に結果が得られます(図"感度を損なわずに増幅")。
Principle
QuantiFast Multiplex PCR Kitsでは最適化実験の必要はなく、標準サイクラーまたは高速サイクラーのどちらでも幅広いダイナミックレンジの高感度かつ迅速な結果が得られます(フローチャート "QIAGEN multiplex kits")。特別に開発された高速PCR 用バッファーは斬新なQ-Bondを含有し、変性、アニーリングおよびエクステンション時間を顕著に短縮します(図"プライマーの高速なアニーリング")。
別々の反応ではなく同一反応内でコントロール遺伝子と標的遺伝子を増幅することで、マニュアルでの作業によるエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が高くなります。QuantiFast Multiplex PCR Bufferに入っている画期的な合成添加剤Factor MPとK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率と感度を実現します(図 "ユニークなPCRバッファー")。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase
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95℃、5分の活性化
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室温での定量PCRのセットアップ
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QuantiFast Multiplex PCR Buffer
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NH4+イオンおよび K+イオンの配合バランス
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特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
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合成添加剤Factor MP
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同一チューブで4遺伝子まで信頼できるマルチプレックス解析が可能
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ユニークなQ-Bond を含む
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PCR反応時間が短縮されるため迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる
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ROX 色素† |
Applied Biosystems製装置およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正
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ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
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Procedure
QuantiFast Multiplex PCR Kit は反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。テンプレートRNA、プライマープローブセットをマスターミックスに加えハンドブックのプロトコール通りに操作するだけで、どのリアルタイムサイクラーでも迅速に信頼性の高い結果が得られます。マスターミックス中にROX passive reference dye が入ったキットまたは入っていないキットをお求めいただけますので、実質的にあらゆるリアルタイムサイクラーで使用できます(表参照)。ROX濃度が至適化されているため、コピー数が少ない場合の検出でも自動データ解析を行なえます。
| マスターミックスに添加済み |
QuantiFast Multiplex PCR Kit |
Applied Biosystems 7500以外のApplied Biosystemsの全てのサイクラー |
| 別チューブで添付 |
QuantiFast Multiplex PCR +R Kit |
Applied Biosystems 7500 および
Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent、その他の会社のサイクラー |
2ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るために、QuantiTect Reverse Transcription Kitを使用してcDNAを合成することをお奨めします。QuantiTect Reverse Transcription Kitは、ゲノムDNAの混入を除去しながらわずか20分で迅速にcDNA を合成します。
QuantiFast Probe Assaysは加水分解プローブ検出をベースにしたデザイン済みのゲノムワイドなアッセイです。QuantiFast Probe Assaysは、duplexの2ステップリアルタイムRT-PCRで確かな結果が得られるようQuantiFast Multiplex PCR Kit に同梱されています。
Applications
QuantiFast Multiplex PCR Kits はほとんどのリアルタイム用サイクラーでcDNAのマルチプレックス遺伝子発現解析やゲノムDNAターゲットの解析に使用可能です。対応する装置は、Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche社製サイクラーです。Rotor-Gene Q およびその他のRotor-Geneサイクラーに関しては、超高速サイクリング用に特化された Rotor-Gene Multiplex PCR Kitを推奨します。
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For quantitative, multiplex, real-time PCR and two-step RT-PCR with fast cycling using sequence-specific probes
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Images
Significantly reduced PCR times.
QuantiFast Multiplex Kits reduce total PCR run time by up to 50% in real-time two-step RT-PCR (40 cycles run; comparison with QuantiTect Multiplex Kits). I: iCycler iQ; L1: LightCycler 480; L2: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500 Fast System; M: Mx3005P.
Sensitive duplex PCR and wide dynamic range.
Duplicate reactions were run on the Applied Biosystems 7500 Fast System using a DNA template mix providing 108 copies of β-actin (data shown in insets) and 106 to 10 copies of RPS27A (a ribosomal protein). The [A] QuantiFast Multiplex PCR +R Kit showed clearly higher sensitivity than the [B] duplex PCR kit from Supplier AII, enabling the cycler in fast-cycling mode to detect 10 copies of target and quantify over 6 log dilutions of template.
Comparable results in triplex and singleplex PCR.
Triplex and singleplex PCR were carried out on the LightCycler 480 using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit and Primer Express designed TaqMan assays for [A] RPS27A (a ribosomal protein), [B] GAPDH (a housekeeping gene), and [C] UBC (a housekeeping gene). The template was HeLa cell cDNA (10 ng, 1 ng, or 0.1 ng), and reactions were run in duplicate. The comparable CT values for triplex PCR (colored curves) and singleplex PCR (gray curves) demonstrate the reliability of triplex PCR with the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit when analyzing targets of differing abundance.
Uncompromised sensitivity.
4-plex, real-time PCR was carried out using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit and Primer Express designed TaqMan assays on the Applied Biosystems 7500 Fast System. Triplicate reactions were run using 10 ng Ramos cell line cDNA.
Fast primer annealing.
[A] Q-Bond in QuantiFast Buffer allows the DNA polymerase and primer to bind as a single complex, reducing the annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing annealing time.
QIAGEN multiplex kits.
QuantiFast Multiplex PCR Kits provide a simple procedure for quantitative, multiplex, real-time PCR. In contrast to current methods, the kits eliminate the need for optimization of the concentrations of primers, Mg2+, and Taq DNA polymerase, even for difficult assays (e.g., assays in which the copy number of the target gene is much smaller than that for the reference gene).
Unique PCR buffer.
[A] NH4+ ions prevent nonspecific primers from annealing to the template. [B] Synthetic Factor MP, an innovative PCR additive, increases the local concentration of primers at the template. Together with K+ and other cations, Factor MP stabilizes specifically bound primers, allowing efficient primer extension by HotStarTaq Plus DNA Polymerase.
Linear CT values over twofold decreases in template.
Duplex and singleplex PCR were carried out using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit and assays for the t(8;14) chromosomal translocation and for GAPDH on the Applied Biosystems 7500 Fast System. Quadruplicate reactions were run using genomic DNA from the Ramos cell line as template (twofold dilutions from 10 ng to 0.625 ng). CT values increased linearly by 1 CT value with decrease in template dilution for both the [A] singleplex and [B] duplex reactions, demonstrating the ability of the kit to precisely discriminate between small differences in template amount.
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