QIAGEN OneStep RT-PCR Kit

For highly sensitive and specific one-step RT-PCR
  • Fast and easy one-tube setup
  • Efficient one-step RT-PCR of any RNA template without optimization
  • Unique enzyme mix for high specificity and sensitivity
  • Balanced mixture of enzymes with optimized reverse-transcription buffer
The QIAGEN One-Step RT-PCR Kit provides a blend of Sensiscript and Omniscript Reverse Transcriptases, HotStarTaq DNA Polymerase, QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer, a dNTP mix, and Q-Solution, a novel additive that enables efficient amplification of "difficult" (e.g., GC-rich) templates. The easy one-tube setup and optimized components result in highly sensitive and successful results.
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QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (25)
For 25 x 50 µl reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix (1 x 50 µl), 5x QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer (1 x 250 µl), dNTP Mix (1 x 50 µl, 10 mM each), 5x Q-Solution (1 x 400 µl), RNase-Free Water (1 x 1.9 ml)
210210
¥20,000
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (100)
For 100 x 50 µl reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix (1 x 200 µl), 5x QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer (1 x 1 ml), dNTP Mix (1 x 200 µl, 10 mM each), 5x Q-Solution (1 x 2 ml), RNase-Free Water (2 x 1.9 ml)
210212
¥68,000
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions (available in a single tube): QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix (2 x 1 ml), 5x QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer (1 x 10 ml), dNTP Mix (2 x 1 ml, 10 mM each), 5x Q-Solution (1 x 10 ml), RNase-Free Water (1 x 40 ml)
210215
¥550,000

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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OneStep RT-PCR操作手順|微量のテンプレートを使用して特異性の高いRT-PCR|ウイルスRNAの効率的な検出|特異性に対するアニーリング温度の影響|GCリッチなテンプレートのRT-PCR|特異的なプライマーアニーリングの促進|
QIAGEN OneStep RT-PCR Kitにより迅速で簡単なRT-PCRセットアップが可能です。ウイルスの検出、分子診断研究、遺伝子発現解析など、どのようなアプリケーションでも、全ての成分を1本のチューブ中で混和し、サーマルサイクルプログラムをスタートするだけで完了。反応液は逆転写およびPCRに必要な全ての試薬を含んでいるので、反応開始後は何も添加する必要がありません。|HeLa細胞から単離した表記量のトータルRNAとα-cateninに特異的なプライマーを用いて、690 bp断片の増幅を1ステップRT-PCRにより行なった。全ての反応は各社の説明書に従って行なった。 M:100 bpラダー。|持続感染Vero細胞から単離したセンダイウイルスRNAからF遺伝子mRNAの336 bp断片を逆転写し、増幅した。表記したウイルスゲノムのコピー数でQIAGEN OneStep RT-PCR Kitを用いて反応を行なった。 M:マーカー(データ提供:H. Rausch, Max Planck Institute for Biochemistry, Martinsried, Germany、バイエルン環境省により後援されているプロジェクト「バイエルンにおける安全基準レベル2およびレベル3でのウイルス作業の実験コントロール」の一部)。|一定のアニーリング温度範囲で表記のメーカーのキットを用いて1ステップRT-PCRを実施した。HeLa細胞のRNAからヒトRCC1遺伝子のフラグメント(1289 bp)を逆転写し、増幅した(矢印)。 M:マーカー。至適化実験なしで特異性の高い増幅がQIAGEN OneStep RT-PCR Kitを用いた場合にのみ観察された。|HeLa細胞のトータルRNAから転写因子TAFII100 mRNA(GC含有率:75%)のフラグメント(439 bp)を逆転写し、増幅した。Q-Solutionの存在下(+)あるいは非存在下()でQIAGEN OneStep RT-PCR Kitを用いて反応液を調製した。Q-SolutionはGCリッチなテンプレートの特異的増幅を確実にする。 M:マーカー。|QIAGEN PCR Buffer中のNH4+とK+がプライマーのアニーリングにおける特異性を増加。K+はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチな塩基対の弱い水素結合を不安定化する。これら2種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において特異的/非特異的なプライマーテンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|
パフォーマンス
The QIAGEN OneStep RT-PCR Kit provides a convenient format for highly sensitive and specific RT-PCR using any RNA template. The kit includes optimized components that allow both reverse transcription and PCR amplification to take place in the same reaction mix in a "one-step" reaction. A unique enzyme combination and specially developed reaction buffer ensure efficient, highly specific reverse transcription and PCR in one tube, without the need for optimization (see figures "Highly specific RT-PCR using low amounts of template" and "Efficient detection of viral RNA"). The innovative, dual-cation PCR buffer provided with the kit ensures high yields of specific PCR product over a wide range of annealing temperatures (see figure "Influence of annealing temperature on specificity"). Suboptimal RT-PCR is improved using Q-Solution, a unique additive that facilitates reverse transcription and amplification of templates with a high GC content or a high degree of secondary structure (see figure "RT-PCR of GC-rich template").
原理

The QIAGEN OneStep RT-PCR Kit is designed for easy and sensitive one-step RT-PCR using any RNA template.

The QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix contains a specially formulated enzyme blend for both reverse transcription and PCR. The unique combination of Omniscript and Sensiscript Reverse Transcriptases, with their high affinity for RNA templates, ensures highly efficient and sensitive transcription of RNA amounts from as little as 1 pg up to 2 µg. After reverse transcription, reactions are heated to 95°C for 15 minutes to activate HotStarTaq DNA Polymerase and simultaneously inactivate the reverse transcriptases. This hot-start step eliminates nonspecific amplification products such as primer dimers and reduces background smear, ensuring highly sensitive and reproducible RT-PCR (see figures "Highly specific RT-PCR using low amounts of template" and "Efficient detection of viral RNA").

Wide range of annealing temperatures

The optimal primer annealing temperature is dependent on the base composition (i.e., the proportion of A, T, G, and C nucleotides), primer concentration, and ionic reaction environment. QIAGEN PCR Buffers contain both K+ and NH4+ and deliver high yields of specific PCR product over a wide range of annealing temperatures (see figure "Increased specific primer annealing"). This specificity is achieved by destabilizing non-specifically bound primers, providing a more robust reaction environment and eliminating the need for tedious annealing temperature optimization. In contrast, the range of optimal PCR annealing temperatures is smaller and less predictable using a PCR or one-step RT-PCR buffer that only contains K+, as illustrated in figure "Influence of annealing temperature on specificity".

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer has been specially developed to allow both efficient reverse transcription and PCR amplification. The buffer contains novel additives that prevent inhibition of PCR amplification by reverse transcriptases, a problem often encountered in one-step RT-PCR. The buffer ensures specific primer annealing over a wide range of temperatures and Mg2+ concentrations; providing robust and highly efficient RT-PCR from any RNA template. The QIAGEN OneStep RT-PCR Kit includes Q-Solution, an innovative additive that modifies the melting behavior of nucleic acids. Q-Solution facilitates reverse transcription and amplification of templates with a high GC content or a high degree of secondary structure (see figure "RT-PCR of GC-rich template"). Using Q-Solution simplifies optimization of RT-PCR for difficult templates. The QIAGEN OneStep RT-PCR Kit includes everything required for faster and easier RT-PCR for even the most sensitive applications (see table).   

Reliable one-step RT-PCR results
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit contentsFeatures
HotStarTaq DNA Polymerase Highly specific products
Sensiscript and Omniscript Reverse Transcriptases Wide range of RNA amounts (1 pg – 2 µg)
High sensitivity
OneStep RT-PCR Buffer Minimal optimization needed
No inhibition of PCR by reverse transcriptases
Inhibition of RNases
Q-Solution Facilitates amplification of GC-rich templates
操作手順

The QIAGEN OneStep RT-PCR Kit allows fast and easy RT-PCR setup. Whatever the application — virus detection, molecular diagnostics research, or gene expression analysis — just mix all components together in one tube and start the thermal-cycler program (see flowchart "OneStep RT-PCR procedure"). The reaction mixture contains all of the reagents required for both reverse transcription and PCR; nothing needs to be added once the reaction has been started (see table).

アプリケーション

The QIAGEN OneStep RT-PCR Kit is suitable for RT-PCR applications such as:

  • Virus detection
  • Single-cell RT-PCR
  • Gene-expression analysis
Feature
Specifications
Applications Gene-expression analysis, virus detection
Enzyme activity Reverse transcription, 5' -> 3' exonuclease activity
Mastermix No
Reaction type One-step RT-PCR
Real-time or endpoint Endpoint
Sample/target type RNA template
Single or multiplex Single
With/without hotstart With hotstart

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キットハンドブック
2
クイックスタートプロトコール
1
References
0
画像
OneStep RT-PCR Procedure
OneStep RT-PCR操作手順

QIAGEN OneStep RT-PCR Kitにより迅速で簡単なRT-PCRセットアップが可能です。ウイルスの検出、分子診断研究、遺伝子発現解析など、どのようなアプリケーションでも、全ての成分を1本のチューブ中で混和し、サーマルサイクルプログラムをスタートするだけで完了。反応液は逆転写およびPCRに必要な全ての試薬を含んでいるので、反応開始後は何も添加する必要がありません。

Efficient, sensitive RT-PCR
微量のテンプレートを使用して特異性の高いRT-PCR
HeLa細胞から単離した表記量のトータルRNAとα-cateninに特異的なプライマーを用いて、690 bp断片の増幅を1ステップRT-PCRにより行なった。全ての反応は各社の説明書に従って行なった。 M:100 bpラダー。
Effective detection of viral RNA
ウイルスRNAの効率的な検出
持続感染Vero細胞から単離したセンダイウイルスRNAからF遺伝子mRNAの336 bp断片を逆転写し、増幅した。表記したウイルスゲノムのコピー数でQIAGEN OneStep RT-PCR Kitを用いて反応を行なった。 M:マーカー(データ提供:H. Rausch, Max Planck Institute for Biochemistry, Martinsried, Germany、バイエルン環境省により後援されているプロジェクト「バイエルンにおける安全基準レベル2およびレベル3でのウイルス作業の実験コントロール」の一部)。
Influence of Annealing Temperature on One-Step RT-PCR Specificity
特異性に対するアニーリング温度の影響
一定のアニーリング温度範囲で表記のメーカーのキットを用いて1ステップRT-PCRを実施した。HeLa細胞のRNAからヒトRCC1遺伝子のフラグメント(1289 bp)を逆転写し、増幅した(矢印)。 M:マーカー。至適化実験なしで特異性の高い増幅がQIAGEN OneStep RT-PCR Kitを用いた場合にのみ観察された。
RT-PCR of GC-Rich Template with Q-Solution
GCリッチなテンプレートのRT-PCR
HeLa細胞のトータルRNAから転写因子TAFII100 mRNA(GC含有率:75%)のフラグメント(439 bp)を逆転写し、増幅した。Q-Solutionの存在下(+)あるいは非存在下()でQIAGEN OneStep RT-PCR Kitを用いて反応液を調製した。Q-SolutionはGCリッチなテンプレートの特異的増幅を確実にする。 M:マーカー。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
特異的なプライマーアニーリングの促進
QIAGEN PCR Buffer中のNH4+とK+がプライマーのアニーリングにおける特異性を増加。K+はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチな塩基対の弱い水素結合を不安定化する。これら2種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において特異的/非特異的なプライマーテンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。