体細胞DNA変異の状態を迅速かつ正確にプロファイリングできる遺伝子パネル

  • パスウェイあるいは疾病に特異的な遺伝子体細胞変異状態のプロファイリング
  • 簡単なリアルタイムPCR操作
  • 高い感度と幅広いダイナミックレンジ
  • ほとんどのリアルタイムPCR装置でルーチン使用が可能
  • マスターミックス付属

qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayは翻訳研究ツールで、生物学的パスウェイあるいは疾病に関連する重要な遺伝子の体細胞変異状態のプロファイリングを迅速かつ正確に行ないます。変異は、臨床または機能的関連性および出現頻度に基づいて、広範な体細胞突然変異のデータベース(例;COSMIC)と査読済み科学文献から選択されています。

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qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrays は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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一般的ながん細胞株の体細胞突然変異状態のプロファイリング|FFPEサンプルを用いた場合のqBiomarker Somatic Mutation Array 感度|ARMSテクノロジーの原理|高い感度|qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrays|
野生型あるいはがん細胞株からのゲノムDNA 200 ngを、Human EGFR Pathway qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayにより 85種類の突然変異(x軸)でプロファイルした。検出された変異はそれぞれピークで示されている。これらの細胞株で既に同定されているEGFRパスウェイの変異をすべて正しく確認できた。|Human EGFR Pathway qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayを用いて、4種類の細胞株のFFPEサンプル、1種類の野生型胎盤FFPEサンプル(コントロール)、および9種類の肺腺がんのFFPE組織サンプル(このうち8サンプルはコーカソイド由来、性別混合、喫煙者)で85種類の変異(x軸)に対してプロファイルした(サンプルをy軸)。FFPE MDAMB- 231細胞株でBRAFとKRAS変異を検出した(ピークで示す)。 これらはQIAGEN KRAS PCR Kit とパイロシークエンス法により個別に同定した。また、KRAS体細胞変異1つと EGFR体細胞変異1つが2種類の肺腺がんのFFPE組織サンプルで検出された。||A375細胞(BRAF V600E positive)由来のゲノムDNAと野生型ゲノムDNAのミックスの希釈系列を作製し、全ゲノム増幅(WGA)を行なった場合と行なわない場合でBRAF V600Eを調べた。その結果、このアッセイ感度は1~2 %の変異であった。||
パフォーマンス

qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayはホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織でも高い感度を示します(図 “高い感度” および “FFPEサンプルを用いた場合のqBiomarker Somatic Mutation PCR Array感度”)。

qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayは、毒性研究、創薬、がん研究において重要となる、細胞株または研究サンプル中の変異検出に有用です(図 “一般的ながん細胞株の体細胞突然変異状態のプロファイリング”)。

原理
リアルタイムPCRはDNA変異検出において感度と信頼性が最も高い方法です。対立遺伝子特異的増幅と加水分解プローブ検出を組み合わせたqBiomarker Somatic Mutation real-time PCR assayは、野生型ゲノムDNAのバックグランドからわずか1%の体細胞突然変異を検出することが可能です。アレルの特異的な増幅は、PCRプライマーの3'末端でのマッチとミスマッチをTaq ポリメラーゼにより判別するAmplification Refractory Mutation System(ARMS)テクノロジーをベースにしています(図“ARMSテクノロジーの原理”)。
操作手順

DNAテンプレートと即使用可能なPCRマスターミックスを、同一プレートの各ウェルに等量分注し、リアルタイムPCRサイクリングプリグラムを起動します。 qBiomarker Somatic Mutation PCR ArrayはABI、Bio-Rad、Eppendorf、Roche、Stratagene社の装置で使用可能です。

96ウェルおよび384ウェルプレートでの入手が可能なqBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayは、疾病状態やパスウェイに関連する変異検出に加えて、標準化のための遺伝子コピー数コントロール用に使用します。各qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayにはまた、一般的なPCRパフォーマンスをチェックするためのコントロールが含まれています。

使いやすいデータ解析

エクセルベースのデータ解析テンプレートを用いてデータ解析を行なえます。データ解析は∆∆CT 法あるいは平均 ∆CT 法をベースにしています。

アレイは様々なフォーマットでお届けし、すべてマスターミックスが入っています。

qBiomarker Somatic Mutation PCR Array Format A:Fluoroscein, 96-well; for Bio-Rad iCycler, iQ5, MyiQ, and MyiQ2 instruments
qBiomarker Somatic Mutation PCR Array Format A:ROX, 96-well; for ABI Standard 96-well Blocks (5700, 7000, 7300, 7500, 7900HT, ViiA 7); Bio-Rad Chromo 4 (MJ Research); Stratagene Mx3005p, Mx3000p; Eppendorf ep realplex 2/2S, and 4/4S instruments
qBiomarker Somatic Mutation PCR Array Format C:ROX, 96-well; for ABI 7500 FAST 96-well Block, 7900HT FAST 96-Well Block, StepOnePlus, and ViiA 7 FAST 96-well Block instruments
qBiomarker Somatic Mutation PCR Array Format D:ROX, 96-well; for Bio-Rad CFX96, Opticon and Opticon 2 (MJ Research); Stratagene Mx4000 instruments
qBiomarker Somatic Mutation PCR Array Format E:ROX, 384-well; for ABI 7900HT 384-well Block, ViiA 7 384-well Block; Bio-Rad CFX384 instruments
qBiomarker Somatic Mutation PCR Array Format F:ROX, 96-well; for Roche LightCycler 480 96-well Block instruments
qBiomarker Somatic Mutation PCR Array Format G:ROX, 384-well; for Roche LightCycler 480 96-well Block instruments
アプリケーション

qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrayは、パスウェイあるいは疾病に特異的な遺伝子セットおよびダウンストリームでシグナル伝達に関与する遺伝子の変異を迅速かつ正確にプロファイリングできます。

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FAQ
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機器テクニカル資料
2
For screening disease-focused mutation panels by PCR
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For gene expression and genomic analysis
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キットハンドブック
1
For real-time PCR-based, pathway- or disease-focused, somatic mutation profiling
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安全データシート
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References
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