HotStarTaq Plus Master Mix Kit
すべてのアプリケーションで迅速かつ特異的な増幅
- わずか5分で迅速に酵素活性化
- より少ないピペッティング操作でコンタミのリスクを軽減
- 至適化なしに高いPCR特異性を実現
- 直接ゲルにロード可能なオプションのバッファーで簡単な操作
HotStarTaq Plus Master Mix Kit には、HotStarTaq Plus DNA Polymerase、至適化が最小限で済む画期的なQIAGEN PCR Buffer およびdNTPs が含まれています。HotStarTaq Plus Master Mix KitはHotStarTaq Master Mix Kit 同様に優れた特異性と感度の高いPCR を実現し、酵素活性時間はわずか5 分です。さらに、2種類のマーカー色素を含むCoralLoad Concentrate が同梱されているので、ピペッティングの目視化が改良され、またPCR 産物を即座にゲルにアプライできます。
es-MX
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Product
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Cat. no.
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List price:
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HotStarTaq Plus Master Mix Kit (250)
For 250 x 20 μl reactions: 3 x 0.85 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 250 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNT), 1 x 0.55 ml CoralLoad Concentrate, 2 x 1.9 ml RNase-Free Water
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HotStarTaq Plus Master Mix Kit (1000)
For 1000 x 20 μl reactions: 12 x 0.85 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 1000 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNTP), 4 x 0.55 ml CoralLoad Concentrate, 8 x 1.9 ml RNase-Free Water
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HotStarTaq Plus Master Mix Kit (2500)
For 2500 x 20 μl reactions: 25 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 2500 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase total, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNTP), 5.5 ml CoralLoad Concentrate, 2 x 20 ml RNase-Free Water
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The HotStarTaq Plus Master Mix Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
CoralLoad Concentrate.|HotStarTaq Plus procedure.|Highest specificity.|Higher specificity with different primer–template systems.|Effect of hot start on RT-PCR performance.|Specific amplification in multiplex PCR.|Highly sensitive single-cell PCR.|Increased specificity of primer annealing.|
[A] CoralLoad Concentrate contains 2 gel-tracking dyes for improved pipetting visibility during PCR setup, enabling immediate gel loading of PCR products for [B] easy visualization of DNA migration.|The HotStarTaq Plus procedure is fast and easy for maximum convenience.|PCR was performed with HotStarTaq Plus DNA Polymerase, HotStarTaq DNA Polymerase, and Taq DNA Polymerase from QIAGEN, and 3 hot-start PCR enzymes from the indicated suppliers. Parallel reactions were performed following the suppliers' recommendations, using 50 ng human genomic DNA. A 1.5 kb fragment of the human CFTR gene was amplified in 35 PCR cycles. M: markers.|Three different primer-template systems were amplified under the same conditions with either Taq DNA polymerase from Supplier R (R) or with HotStarTaq DNA Polymerase (H). System 1: A 1.1 kb fragment of a D-IgI homolog was amplified from human genomic DNA. System 2: A 296 bp fragment from the chromosomal region correlated with X-linked juvenile retinoschisis was amplified from human genomic DNA. System 3: A 214 bp fragment of the β-actin gene was amplified from cDNA synthesized from total RNA. M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus DNA Polymerase.|A 1.1 kb fragment of the human interleukin 1 receptor (type II) gene was amplified from cDNA. Amplification reactions were prepared in triplicate using Taq DNA polymerase and buffer from Supplier L (No hot start); antibody-mediated hot start using enzyme and buffer from Supplier L (Antibody-mediated); and HotStarTaq DNA Polymerase and PCR Buffer from QIAGEN (HotStarTaq). M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus DNA Polymerase.|Fragments from the murine p53 gene were amplified from genomic DNA in multiplex PCR. Parallel reactions were prepared using standard reaction conditions and an enzyme from Supplier R (No hot start) or using HotStarTaq Master Mix Kit from QIAGEN (HotStarTaq Master Mix). M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq Master Mix Kit; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus Master Mix Kit.|Single-cell PCR of a 500 bp fragment of the murine p53 gene was carried out in duplicate using HotStarTaq and HotStarTaq Plus DNA Polymerase. Both enzymes showed equally high specificity and sensitivity. M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq Plus DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with the HotStarTaq Plus Master Mix Kit.|Ammonium and potassium cations in QIAGEN PCR Buffers increase specificity of primer annealing. K+ binds to the phosphate groups (P–) on the DNA backbone, stabilizing the annealing of the primers to the template. NH4+, which exists both as the ammonium ion and as ammonia under thermal-cycling conditions, can interact with the hydrogen bonds between the bases (B), destabilizing the weak hydrogen bonds at mismatched bases. The combined effect of the two cations maintains a high ratio of specific-to-nonspecific primer-template binding over a wide temperature range.|
Performance
HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは全てのロットで、低コピー数のターゲットを増幅する実験によりPCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲の品質管理テストを受けています。HotStarTaq Plus Master Mix Kitは他社のキットに比べて高性能で、特異性と感度の高いホットスタートPCRを実現します (図“高い特異性”、“異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性”、および表)。キットに付属の画期的なPCRバッファーは、様々なPCR条件において特異性を実現し、至適化を最小限に抑えます。本キットには、また、CoralLoad Concentrate が付属で入っています。 これによりピペッティングを目視でき、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。CoralLoad ConcentrateをPCRに添加しても、増幅感度や特異性に影響しません。CoralLoad Concentrateの存在下で増幅したPCRフラグメントは精製が不要で、クローニングや制限酵素反応でよい結果が得られます。
高い特異性と簡便な操作を実現するHotStarTaq Plus Master Mix Kitは、複雑なゲノムテンプレートあるいはcDNAテンプレート（図“RT-PCR性能へのホットスタートの影響”）、複数のプライマーペア（図“マルチプレックスPCRでの特異的な増幅”）、増幅困難なサンプルあるいは低コピーのターゲット（図“高感度のシングルセルPCR”）などとの使用に適しています。HotStarTaq Plus Master Mix Kitはまた、遺伝子スクリーニングのような多数サンプルを増幅するプロジェクトに最適です。
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| 取り扱いの簡便さ |
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| 活性化のスピード |
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HotStarTaq Plus DNA Polymeraseｓ詳細データ
濃度：5 units/µl
組み換え酵素：Yes
基質アナログ：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、 fluorescent-dNTP/ddNTP
エクステンション速度：72℃ で2～4 kb/min
半減期：97℃で10分、94℃で60分
増幅効率：≥105 倍
5'–>3' エキソヌクレアーゼ活性：Yes
余分なA付加：Yes
3'–>5' エキソヌクレアーゼ活性：No
ヌクレアーゼの混入：No
RNasesの混入：No
プロテアーゼの混入：No
自己プライマー活性：No
Principle
HotStarTaq Plus Master Mixは HotStarTaq Plus DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、MgCl2、dNTPs がすでにミックスされ即使用可能です。HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、わずか5分間の迅速な活性化時間で、従来のHotStarTaq DNA Polymeraseの優れた性能を保持しています。 QIAGEN Taq DNA Polymerase を改良したHotStarTaq Plus Plus Polymerase は、常温では不活性状態でポリメラーゼ活性はありません。これによりPCRセットアップ中や最初のサイクル中に低温で形成されるプライマーダイマー、および非特異的にアニーリングしたプライマーのエクステンションを防ぎます(図“Highest specificity" 最高の特異性”および"異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性”）。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは、95℃、5 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。 QIAGEN PCR BufferQIAGEN PCR Buffer は、各PCRサイクルでアニーリングステップ中にプライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を維持します（図“プライマーアニーリングの特異性が増大”）。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH4)2SO4を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg2+濃度の範囲で厳密で特異的なプライマーアニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。 CoralLoad ConcentrateHotStarTaq Plus Master Mix Kitには、ゲルローディング試薬と2種類のマーカー色素が入ったCoralLoad Concentrate (図“CoralLoad Concentrate”）が入っています。CoralLoad Concentrateはピペッティングの目視化を改良し、DNAの移動距離の予測およびアガロースゲルの泳動時間の至適化が容易に行なえます。CoralLoad Concentrateを用いた際は、PCR反応液を直接アガロースゲルにロードできます。 ローディングバッファーの添加の必要がありません。
Procedure
HotStarTaq Plus Master Mix Kitは簡便なマスターミックスフォーマットですので、操作は容易です。HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、95℃、5分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。マスターミックスを用いて、反応セットアップを室温で迅速かつ容易に行なえます。 10 µlのHotStarTaq Plus Master Mix を各PCRチューブにピペットでいれ、RNaseフリー水（キットに付属）で希釈したプライマートテンプレートDNAを10 µl添加します（図“ HotStarTaq Plus 操作手順”）。ピペッティング・ステップは最小限に抑えられ、エラーとコンタミのリスクが減少し、スループット数と再現性が増加します。キットに付属の至適化済みのプロトコールにより、PCRセットアップを迅速かつ容易に行なえます。本キットには、また、CoralLoad Concentrate が付属で入っています。 これによりピペッティングを目視でき、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。
Applications
HotStarTaq Plus Master Mix Kitは、以下の増幅などの高度なアプリケーションを含む様々なアプリケーションに最適です。 - 複雑なゲノムテンプレート
- 複雑なcDNAテンプレート（例；RT-PCR）
- 低コピーのターゲット（例；シングルセルPCR）
- マルチプレックスPCR
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Feature
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Specifications
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Applications
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PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
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Enzyme activity
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5' -> 3' exonuclease activity
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Mastermix
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Yes
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Reaction type
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PCR amplification
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Real-time or endpoint
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Endpoint
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Sample/target type
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Genomic DNA and cDNA
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Single or multiplex
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Single
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With/without hotstart
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With hotstart
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For highly specific hot-start PCR without optimization
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Show details
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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View
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Images
CoralLoad Concentrate.
[A] CoralLoad Concentrate contains 2 gel-tracking dyes for improved pipetting visibility during PCR setup, enabling immediate gel loading of PCR products for [B] easy visualization of DNA migration.
HotStarTaq Plus procedure.
The HotStarTaq Plus procedure is fast and easy for maximum convenience.
Highest specificity.
PCR was performed with HotStarTaq Plus DNA Polymerase, HotStarTaq DNA Polymerase, and Taq DNA Polymerase from QIAGEN, and 3 hot-start PCR enzymes from the indicated suppliers. Parallel reactions were performed following the suppliers' recommendations, using 50 ng human genomic DNA. A 1.5 kb fragment of the human CFTR gene was amplified in 35 PCR cycles. M: markers.
Higher specificity with different primer–template systems.
Three different primer-template systems were amplified under the same conditions with either Taq DNA polymerase from Supplier R (R) or with HotStarTaq DNA Polymerase (H). System 1: A 1.1 kb fragment of a D-IgI homolog was amplified from human genomic DNA. System 2: A 296 bp fragment from the chromosomal region correlated with X-linked juvenile retinoschisis was amplified from human genomic DNA. System 3: A 214 bp fragment of the β-actin gene was amplified from cDNA synthesized from total RNA. M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus DNA Polymerase.
Effect of hot start on RT-PCR performance.
A 1.1 kb fragment of the human interleukin 1 receptor (type II) gene was amplified from cDNA. Amplification reactions were prepared in triplicate using Taq DNA polymerase and buffer from Supplier L (No hot start); antibody-mediated hot start using enzyme and buffer from Supplier L (Antibody-mediated); and HotStarTaq DNA Polymerase and PCR Buffer from QIAGEN (HotStarTaq). M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus DNA Polymerase.
Specific amplification in multiplex PCR.
Fragments from the murine p53 gene were amplified from genomic DNA in multiplex PCR. Parallel reactions were prepared using standard reaction conditions and an enzyme from Supplier R (No hot start) or using HotStarTaq Master Mix Kit from QIAGEN (HotStarTaq Master Mix). M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq Master Mix Kit; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus Master Mix Kit.
Highly sensitive single-cell PCR.
Single-cell PCR of a 500 bp fragment of the murine p53 gene was carried out in duplicate using HotStarTaq and HotStarTaq Plus DNA Polymerase. Both enzymes showed equally high specificity and sensitivity. M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq Plus DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with the HotStarTaq Plus Master Mix Kit.
Increased specificity of primer annealing.
Ammonium and potassium cations in QIAGEN PCR Buffers increase specificity of primer annealing. K+ binds to the phosphate groups (P–) on the DNA backbone, stabilizing the annealing of the primers to the template. NH4+, which exists both as the ammonium ion and as ammonia under thermal-cycling conditions, can interact with the hydrogen bonds between the bases (B), destabilizing the weak hydrogen bonds at mismatched bases. The combined effect of the two cations maintains a high ratio of specific-to-nonspecific primer-template binding over a wide temperature range.
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