HotStarTaq Plus Master Mix Kit

すべてのアプリケーションで迅速かつ特異的な増幅
  • わずか5分で迅速に酵素活性化
  • より少ないピペッティング操作でコンタミのリスクを軽減
  • 至適化なしに高いPCR特異性を実現
  • 直接ゲルにロード可能なオプションのバッファーで簡単な操作

HotStarTaq Plus Master Mix Kit には、HotStarTaq Plus DNA Polymerase、至適化が最小限で済む画期的なQIAGEN PCR Buffer およびdNTPs が含まれています。HotStarTaq Plus Master Mix KitはHotStarTaq Master Mix Kit 同様に優れた特異性と感度の高いPCR を実現し、酵素活性時間はわずか5 分です。さらに、2種類のマーカー色素を含むCoralLoad Concentrate が同梱されているので、ピペッティングの目視化が改良され、またPCR 産物を即座にゲルにアプライできます。

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HotStarTaq Plus Master Mix Kit (250)
For 250 x 20 μl reactions: 3 x 0.85 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 250 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNT), 1 x 0.55 ml CoralLoad Concentrate, 2 x 1.9 ml RNase-Free Water
203643
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HotStarTaq Plus Master Mix Kit (1000)
For 1000 x 20 μl reactions: 12 x 0.85 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 1000 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNTP), 4 x 0.55 ml CoralLoad Concentrate, 8 x 1.9 ml RNase-Free Water
203645
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HotStarTaq Plus Master Mix Kit (2500)
For 2500 x 20 μl reactions: 25 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 2500 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase total, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNTP), 5.5 ml CoralLoad Concentrate, 2 x 20 ml RNase-Free Water
203646
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HotStarTaq Plus Master Mix Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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|HotStarTaq Plus实验流程。|高特异性。|对不同的引物-模板体系均有较高的特异性。|RT-PCR中高效的热启动。|多重PCR反应中的特异性扩增。|高度灵敏的单细胞PCR。|退火时引物结合的特异性增强。|
[A] CoralLoad染料包含两种凝胶示踪染料,能够便利的进行PCR反应体系构建时的移液操作、PCR产物凝胶上样,[B] 以及清楚的看到DNA的迁移。|HotStarTaq Plus实验流程快速、简单,十分便利。|使用QIAGEN的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase,以及指定供应商的三种热启动PCR酶进行PCR反应。使用50 ng人基因组DNA,遵循供应商的建议进行并行反应。采用35个PCR循环扩增1.5 kb的人CFTR基因片段。M:分子量标准。|在相同的条件下,使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H),对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1:从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2:从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3:利用总RNA合成的cDNA,扩增214 bp的β-actin基因片段。M:分子量标准。|利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液(No hot start);使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液(Antibody-mediated);使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer (HotStarTaq)制备扩增反应,重复三次。M:分子量标准。|利用多重PCR,从基因组DNA中扩增鼠p53基因片段。在标准反应条件下使用Supplier R的酶(No hot start),或者使用QIAGEN的HotStarTaq Master Mix Kit(HotStarTaq Master Mix)制备并行反应。M:分子量标准。注意:图示数据来自HotStarTaq Master Mix Kit的实验,使用HotStarTaq Plus Master Mix Kit进行实验获得了相同的灵敏度和特异性。|使用HotStarTaq和HotStarTaq Plus DNA Polymerase对500 bp的鼠p53基因片段进行单细胞PCR,重复两次。两种酶具有同样高的特异性和灵敏度。M:分子量标准。注:显示的是HotStarTaq Plus DNA Polymerase的数据;使用HotStarTaq Plus Master Mix Kit可获得相同的灵敏度和特异性。|QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团(P)上,稳定结合到模板上的引物。在热循环中,NH4+以铵离子和氨的形式存在,可以与碱基(B)之间的氢键发生相互作用,使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用,在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。|
性能

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは全てのロットで、低コピー数のターゲットを増幅する実験によりPCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲の品質管理テストを受けています。HotStarTaq Plus Master Mix Kitは他社のキットに比べて高性能で、特異性と感度の高いホットスタートPCRを実現します (図“高い特異性”、“異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性”、および表)。キットに付属の画期的なPCRバッファーは、様々なPCR条件において特異性を実現し、至適化を最小限に抑えます。本キットには、また、CoralLoad Concentrate が付属で入っています。 これによりピペッティングを目視でき、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。CoralLoad ConcentrateをPCRに添加しても、増幅感度や特異性に影響しません。CoralLoad Concentrateの存在下で増幅したPCRフラグメントは精製が不要で、クローニングや制限酵素反応でよい結果が得られます。

高い特異性と簡便な操作を実現するHotStarTaq Plus Master Mix Kitは、複雑なゲノムテンプレートあるいはcDNAテンプレート(図“RT-PCR性能へのホットスタートの影響”)、複数のプライマーペア(図“マルチプレックスPCRでの特異的な増幅”)、増幅困難なサンプルあるいは低コピーのターゲット(図“高感度のシングルセルPCR”)などとの使用に適しています。HotStarTaq Plus Master Mix Kitはまた、遺伝子スクリーニングのような多数サンプルを増幅するプロジェクトに最適です。

ホットスタート法の比較 
HotStarTaq Plus DNA Polymerase HotStarTaq DNA Polymerase ホットスタート酵素AII R社 I社(抗体利用) マニュアル ワックスバリア
特異的な増幅 ++ ++ + ++ + +/– +/–
最小限のPCR至適化 ++ ++ +/– +/– +/–
取り扱いの簡便さ ++ ++ ++ + +
活性化のスピード ++ + ++ ++ ++
HotStarTaq Plus DNA Polymerases詳細データ

濃度:5 units/µl
組み換え酵素:Yes
基質アナログ:dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、 fluorescent-dNTP/ddNTP
エクステンション速度:72℃ で2~4 kb/min 
半減期:97℃で10分、94℃で60分 
増幅効率:≥105
5'–>3' エキソヌクレアーゼ活性:Yes
余分なA付加:Yes
3'–>5' エキソヌクレアーゼ活性:No
ヌクレアーゼの混入:No
RNasesの混入:No
プロテアーゼの混入:No
自己プライマー活性:No 

原理

HotStarTaq Plus Master Mixは HotStarTaq Plus DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、MgCl2、dNTPs がすでにミックスされ即使用可能です。HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、わずか5分間の迅速な活性化時間で、従来のHotStarTaq DNA Polymeraseの優れた性能を保持しています。

QIAGEN Taq DNA Polymerase を改良したHotStarTaq Plus Plus Polymerase は、常温では不活性状態でポリメラーゼ活性はありません。これによりPCRセットアップ中や最初のサイクル中に低温で形成されるプライマーダイマー、および非特異的にアニーリングしたプライマーのエクステンションを防ぎます(図“Highest specificity" 最高の特異性”および"異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性”)。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは、95℃、5 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer は、各PCRサイクルでアニーリングステップ中にプライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を維持します(図“プライマーアニーリングの特異性が増大”)。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH4)2SO4を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg2+濃度の範囲で厳密で特異的なプライマーアニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。 

CoralLoad Concentrate

HotStarTaq Plus Master Mix Kitには、ゲルローディング試薬と2種類のマーカー色素が入ったCoralLoad Concentrate (図“CoralLoad Concentrate”)が入っています。CoralLoad Concentrateはピペッティングの目視化を改良し、DNAの移動距離の予測およびアガロースゲルの泳動時間の至適化が容易に行なえます。CoralLoad Concentrateを用いた際は、PCR反応液を直接アガロースゲルにロードできます。 ローディングバッファーの添加の必要がありません。

操作流程
HotStarTaq Plus Master Mix Kitは簡便なマスターミックスフォーマットですので、操作は容易です。HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、95℃、5分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。マスターミックスを用いて、反応セットアップを室温で迅速かつ容易に行なえます。 10 µlのHotStarTaq Plus Master Mix を各PCRチューブにピペットでいれ、RNaseフリー水(キットに付属)で希釈したプライマートテンプレートDNAを10 µl添加します(図“HotStarTaq Plus 操作手順”)。ピペッティング・ステップは最小限に抑えられ、エラーとコンタミのリスクが減少し、スループット数と再現性が増加します。キットに付属の至適化済みのプロトコールにより、PCRセットアップを迅速かつ容易に行なえます。本キットには、また、CoralLoad Concentrate が付属で入っています。 これによりピペッティングを目視でき、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。
应用

HotStarTaq Plus Master Mix Kitは、以下の増幅などの高度なアプリケーションを含む様々なアプリケーションに最適です。 

  • 複雑なゲノムテンプレート
  • 複雑なcDNAテンプレート(例;RT-PCR)
  • 低コピーのターゲット(例;シングルセルPCR)
  • マルチプレックスPCR
特点
参数
应用 PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
酶活 5' -> 3' exonuclease activity
预混液 Yes
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart

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产品介绍与指南
2
试剂盒操作手册
1
For highly specific hot-start PCR without optimization  
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图片
Ready-to-load PCR buffer
[A] CoralLoad染料包含两种凝胶示踪染料,能够便利的进行PCR反应体系构建时的移液操作、PCR产物凝胶上样,[B] 以及清楚的看到DNA的迁移。
HotStarTaq Plus procedure
HotStarTaq Plus实验流程。
HotStarTaq Plus实验流程快速、简单,十分便利。
Highest specificity with HotStarTaq Plus Polymerase
高特异性。
使用QIAGEN的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase,以及指定供应商的三种热启动PCR酶进行PCR反应。使用50 ng人基因组DNA,遵循供应商的建议进行并行反应。采用35个PCR循环扩增1.5 kb的人CFTR基因片段。M:分子量标准。
Higher Specificity with Different Primer–Template Systems
对不同的引物-模板体系均有较高的特异性。
在相同的条件下,使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H),对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1:从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2:从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3:利用总RNA合成的cDNA,扩增214 bp的β-actin基因片段。M:分子量标准。
Effect of Hot Start on RT-PCR Performance
RT-PCR中高效的热启动。
利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液(No hot start);使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液(Antibody-mediated);使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer (HotStarTaq)制备扩增反应,重复三次。M:分子量标准。
Specific Amplification in Multiplex PCR
多重PCR反应中的特异性扩增。
利用多重PCR,从基因组DNA中扩增鼠p53基因片段。在标准反应条件下使用Supplier R的酶(No hot start),或者使用QIAGEN的HotStarTaq Master Mix Kit(HotStarTaq Master Mix)制备并行反应。M:分子量标准。注意:图示数据来自HotStarTaq Master Mix Kit的实验,使用HotStarTaq Plus Master Mix Kit进行实验获得了相同的灵敏度和特异性。
Highly Sensitive Single-Cell PCR*
高度灵敏的单细胞PCR。
使用HotStarTaq和HotStarTaq Plus DNA Polymerase对500 bp的鼠p53基因片段进行单细胞PCR,重复两次。两种酶具有同样高的特异性和灵敏度。M:分子量标准。注:显示的是HotStarTaq Plus DNA Polymerase的数据;使用HotStarTaq Plus Master Mix Kit可获得相同的灵敏度和特异性。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
退火时引物结合的特异性增强。
QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团(P)上,稳定结合到模板上的引物。在热循环中,NH4+以铵离子和氨的形式存在,可以与碱基(B)之间的氢键发生相互作用,使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用,在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。