HotStarTaq DNA Polymerase

最小限の至適化で特異性の高い増幅反応

最小限の至適化
高いPCR特異性
取り扱いが簡単、室温でのセットアップが可能

HotStarTaq DNA Polymerase は抗体によるホットスタートシステムではなく、化学修飾によるホットスタートを利用しているため、最初の熱活性化ステップまではポリメラーゼ活性は全くありません。HotStarTaq DNA Polymerase には、非特異的な増幅産物、プライマーダイマー、バックグラウンドを最小限に抑える画期的なQIAGEN PCR Buffer が入っています。また増幅困難なテンプレート（例；GC リッチ）の効率的な増幅を実現するQ-Solutionも含まれています。

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関連資料

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製品名	Cat. no.	List price:
HotStarTaq DNA Polymerase (250 U) 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl₂	203203	¥23,500
HotStarTaq DNA Polymerase (1000 U) 4 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl₂	203205	¥84,500
HotStarTaq DNA Polymerase (5000 U) 1 x 5000 units HotStarTaq DNA Polymerase, 1 x HotStarTaq Buffer Set (1 x 22 ml PCR Buffer, 1 x 40 ml Q-Solution, 1 x 22 ml MgCl₂)	203207	¥355,000
HotStarTaq DNA Polymerase (25000) 100 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 100 x 1.2 ml HotStarTaq Buffer Set, 100 x 2.0 ml Q-Solution, 100 x 1.2 ml MgCl₂	203209	¥1,421,000

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HotStarTaq DNA Polymerase は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。

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HotStarTaq操作手順は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現する。|ヒトゲノムDNA 1 μgに添加されたHIV-pol遺伝子50コピーから、497 bpフラグメントを増幅した。様々なホットスタート酵素を用いた：QIAGENのHotStarTaq DNA Polymerase（HotStarTaq）、A_II社のホットスタート酵素（Hot-start enzyme)）、L社のTaq 抗体ミックス（Antibody-mediated）、R社のホットスタートではない酵素（No hot start）。矢印は特異的なPCR産物を示す。各PCR反応液から同量を2%アガロースゲルにロードした。M：マーカー。|2種類のプライマー／テンプレートシステムにおいて、1x Q-Solutionの非存在下（–）あるいは存在下（+）で、QIAGEN PCR BufferとTaq DNA DNA Polymeraseを用いてduplicateで増幅した。Q-Solutionは増幅困難なテンプレートの特異性の高い増幅を実現する。[A] ヒトアンジオテンシンレセプターII遺伝子；[B] 　マウスプロテインキナーゼC遺伝子、M：マーカー。|3種類の異なるプライマー／テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase（R）、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase（H）を用い、同じ条件下でPCRを行なった。システム 1：ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2：ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3：トータルRNAより合成されたcDNAからβ-Actinの214 bpのフラグメントを増幅した。M：マーカー。|ヒト・インターロイキン１レセプター（タイプII）遺伝子の1.1kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した。 L社のTaq DNA polymeraseとバッファー（No hot start）; L社の抗体修飾した酵素とバッファー（Antibody-mediated）; QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer（HotStarTaq）。M：マーカー.|フローサイトメトリーを用いて直接各PCRチューブに分離した1個の細胞からマウスp53 遺伝子の500 bp フラグメントを増幅した。各反応は以下の組み合わせで行なった：QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer（HotStarTaq）、A_II社のホットスタート酵素とバッファー（Hot-start enzyme）、L社の抗体修飾した酵素とバッファ（Antibody-mediated）。M：マーカー。|表記のMg²⁺濃度で、QIAGEN PCR BufferとTaq DNA Polymerase（QIAGEN）を用いてPCR反応を行なった。同じ条件のPCR反応をA_II社のPCRバッファーとTaq DNA ｐolymerase を用いて行なった。QIAGENの酵素およびバッファーを使った場合にはシングルコピーのヒトプリオンタンパク遺伝子が良好に増幅された。M：マーカー。|QIAGEN PCR Buffer中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K⁺はDNA バックボーンのリン酸基（P^–）に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH₄⁺は、塩基（B）間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|

パフォーマンス

HotStarTaq DNA Polymeraseは全てのロットで、低コピー数のターゲットを増幅する実験によりPCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲の品質管理テストを受けています。HotStarTaq DNA Polymeraseは他社のキットに比べて高性能で、特異性と感度の高いホットスタートPCRを実現します (図“異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性”、“卓越した性能”および表)。キットに付属の画期的なPCRバッファーは、様々なPCR条件において特異性を実現し、至適化は最小限に抑えられます（図 “幅広い至適アニーリング温度” および“異なったマグネシウム濃度への適応”)。また、キットに付属のQ - Solutionにより、不適切なPCR条件を改善することができます(図 “増幅困難なテンプレートの増幅”）。これらの成分により様々なアプリケーションで特異的な増幅を実現します(図 “RT-PCRにおけるホットスタートの効果”および “高感度のシングルセルPCR”）。

ホットスタート法の比較
	HotStarTaq DNA Polymerase	ホットスタート酵素A_II社	抗体利用	マニュアル	ワックスバリア
特異的な増幅	++	+	+	+/–	+/–
PCR至適化の不要性	++	+/–	+/–	–	–
取り扱いの簡便さ	++	++	+	–	–

HotStarTaq DNA Polymerase 詳細データ

濃度：5 units/µl
組み換え酵素：Yes
基質アナログ：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、 fluorescent-dNTP/ddNTP
エクステンション速度：72℃ で2～4 kb/min　
半減期：97℃で10分、94℃で60分　
増幅効率：≥10⁵ 倍
5'–>3' エキソヌクレアーゼ活性：Yes
余分なA付加：Yes
3'–>5' エキソヌクレアーゼ活性：No
ヌクレアーゼの混入：No
RNasesの混入：No
プロテアーゼの混入：No
自己プライマー活性：No

原理

Taq DNA Polymeraseを修飾したHotStarTaq DNA Polymeraseは、ホットスタートPCR において高い特異性を実現します。本キットには、2種類の陽イオンを含む画期的なPCRバッファー、Q-Solution、MgCl₂が入っています。

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA Polymeraseは、常温では不活性状態でポリメラーゼ活性はありません。この特性により、PCR セットアップや最初のPCR サイクル中の低温での非特異的なプライマーのアニーリングやプライマーダイマーの形成を回避できます（図“ホットスタートPCRで最高のパフォーマンスを実現”および“異なるプライマー／テンプレートシステムにおける高特異性”）。HotStarTaq DNA Polymeraseは、95℃、5 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer は、各PCRサイクルでアニーリングステップ中にプライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を維持します（図“プライマーアニーリングの特異性増大”）。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH₄)₂SO₄を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg²⁺濃度の範囲で厳密で特異的なプライマーアニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg²⁺ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります(図“幅広い至適アニーリング温度”および“異なったマグネシウム濃度への適応”)。

Q-Solution

HotStarTaq DNA Polymeraseに入っているQ-Solutionは、DNAの融解を変更することにより増幅困難なテンプレートの増幅を促進する革新的なPCR添加物です。このユニークな試薬により、高度な二次構造をもつテンプレートやGC リッチなテンプレートなどにより生じる不適切なPCR 条件が改善されることがあります（図“増幅困難なテンプレートの増幅”）。DMSOのような汎用されているPCR添加物と異なり、Q-Solutionは一定の濃度で作用し、毒性もなく、PCR純度は保証されています。Q-Solution の添加により、PCR のフィデリティは損なわれません。

操作手順

HotStarTaq DNA Polymeraseに付属の至適化済みプロトコールを用いてPCRセットアップを迅速かつ容易に行なえます。HotStarTaq DNA Polymeraseは、95℃、15 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。反応は室温で設定することができるので、使いやすく便利です(図"HotStarTaq procedure"）。

アプリケーション

HotStarTaq DNA Polymeraseは、増幅などの高度なアプリケーションを含む様々なアプリケーションに最適です：

複雑なゲノムテンプレート
複雑なcDNAテンプレート（例；RT-PCR）
低コピーのターゲット（例；シングルセルPCR）
マルチプレックスPCR

Feature	Specifications
Applications	PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
Enzyme activity	5' -> 3' exonuclease activity
Mastermix	No
Reaction type	PCR amplification
Real-time or endpoint	Endpoint
Sample/target type	Genomic DNA and cDNA
Single or multiplex	Single
With/without hotstart	With hotstart

パンフレット

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	(EN) - Maximizing PCR and RT-PCR success — Third Edition Addressing critical factors and new solutions	詳細を表示
	(JA) - PCR およびRT-PCR の成功率を高めるために PCR 実験における重要項目と新技術	詳細を表示
	(JA) - 遺伝子発現および発現制御の解析	詳細を表示
	HotStarTaq DNA Polymerase	詳細を表示

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	HotStarTaq DNA Polymerase	詳細を表示

FAQ

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	What should the starting template DNA quality and quantity be for PCR? FAQ ID -74	表示
	How is "Touchdown PCR" used to increase PCR specificity? FAQ ID -75	表示
	Why do I get smeared PCR products? FAQ ID -87	表示
	What kind of PCR products can be cloned with the QIAGEN PCR Cloning Kit? FAQ ID -165	表示
	Do CoralLoad dyes supplied in various QIAGEN PCR Kits interfere with downstream applications? FAQ ID -1745	表示
	Does QIAGEN sell Q-Solution separately? FAQ ID -204	表示
	How can one determine the optimal annealing temperature for a specific PCR assay? FAQ ID -288	表示
	Do any of the buffers in the HotStarTaq DNA Polymerase Kit contain Triton? FAQ ID -327	表示
	Is Q-Solution required for PCR with QIAGEN's PCR kits? FAQ ID -380	表示
	Can Taq DNA Polymerase use RNA as a template, and generate false positives in "no-RT" controls? FAQ ID -523	表示
	How can I avoid primer-dimer formation during PCR amplification? FAQ ID -544	表示
	How can I tell if I have primer-dimers in my PCR reaction? FAQ ID -552	表示
	Can I shorten the activation time for the HotStarTaq DNA Polymerase? FAQ ID -565	表示
	What makes QIAGEN's 10x Taq and HotStarTaq DNA Polymerase PCR buffer superior? FAQ ID -566	表示
	What is the composition of the QIAGEN 10x PCR Buffer in Taq- and HotStarTaq DNA Polymerase Kits? FAQ ID -606	表示
	Can QIAGEN's Taq- and HotstarTaq DNA Polymerases be used for cycle sequencing? FAQ ID -741	表示
	How much DNA is obtained in the average PCR reaction? FAQ ID -750	表示
	Have you tested the effect of inhibitors on PCR performance? FAQ ID -818	表示
	Do you have a protocol for polyacrylamide gel analysis of oligonucleotides? FAQ ID -961	表示

キットハンドブック

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	HotStarTaq PCR Handbook - (EN) HotStarTaq DNA Polymerase; HotStarTaq Master Mix Kit - For highly specific hot-start PCR without optimization	詳細を表示

テクニカルインフォメーション

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	(EN) - Maximizing end-point PCR success with QIAGEN's automatable PCR solutions	詳細を表示

Supplementary Protocols

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	(JA) - マイクロダイセクション用特別プロトコール - DNA分離と増幅マイクロダイセクションにより採取した組織サンプルからのDNA分離およびHotStarTaq DNA Polymeraseを用いた増幅	詳細を表示
	Polyacrylamide gel analysis of oligonucleotides	詳細を表示

クイックスタートプロトコール

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	HotStarTaq DNA Polymerase (EN)	詳細を表示

MSDS

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	Safety Data Sheets Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.	表示
	Safety Data Sheets Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.	表示

安全データシート

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	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (250 U)
	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (1000 U)
	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (5000 U)
	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (25000)
	CofA

画像

Highly specific PCR results with both manual and automated PCR setup

HotStarTaq操作手順

HotStarTaq操作手順は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現する。

卓越した性能

ヒトゲノムDNA 1 μgに添加されたHIV-pol遺伝子50コピーから、497 bpフラグメントを増幅した。様々なホットスタート酵素を用いた：QIAGENのHotStarTaq DNA Polymerase（HotStarTaq）、A_II社のホットスタート酵素（Hot-start enzyme)）、L社のTaq 抗体ミックス（Antibody-mediated）、R社のホットスタートではない酵素（No hot start）。矢印は特異的なPCR産物を示す。各PCR反応液から同量を2%アガロースゲルにロードした。M：マーカー。

Amplification of Difficult Templates with Q-Solution

増幅困難なテンプレートの増幅

2種類のプライマー／テンプレートシステムにおいて、1x Q-Solutionの非存在下（–）あるいは存在下（+）で、QIAGEN PCR BufferとTaq DNA DNA Polymeraseを用いてduplicateで増幅した。Q-Solutionは増幅困難なテンプレートの特異性の高い増幅を実現する。[A] ヒトアンジオテンシンレセプターII遺伝子；[B] 　マウスプロテインキナーゼC遺伝子、M：マーカー。

Higher Specificity with Different Primer–Template Systems

異なるプライマー／テンプレートシステムにおける高特異性

3種類の異なるプライマー／テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase（R）、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase（H）を用い、同じ条件下でPCRを行なった。システム 1：ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2：ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3：トータルRNAより合成されたcDNAからβ-Actinの214 bpのフラグメントを増幅した。M：マーカー。

Effect of Hot Start on RT-PCR Performance

RT-PCR におけるホットスタートの効果

ヒト・インターロイキン１レセプター（タイプII）遺伝子の1.1kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した。 L社のTaq DNA polymeraseとバッファー（No hot start）; L社の抗体修飾した酵素とバッファー（Antibody-mediated）; QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer（HotStarTaq）。M：マーカー.

高感度のシングルセルPCR

フローサイトメトリーを用いて直接各PCRチューブに分離した1個の細胞からマウスp53 遺伝子の500 bp フラグメントを増幅した。各反応は以下の組み合わせで行なった：QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer（HotStarTaq）、A_II社のホットスタート酵素とバッファー（Hot-start enzyme）、L社の抗体修飾した酵素とバッファ（Antibody-mediated）。M：マーカー。

異なったマグネシウム濃度への適応

表記のMg²⁺濃度で、QIAGEN PCR BufferとTaq DNA Polymerase（QIAGEN）を用いてPCR反応を行なった。同じ条件のPCR反応をA_II社のPCRバッファーとTaq DNA ｐolymerase を用いて行なった。QIAGENの酵素およびバッファーを使った場合にはシングルコピーのヒトプリオンタンパク遺伝子が良好に増幅された。M：マーカー。

NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing

プライマーアニーリングの特異性増大

QIAGEN PCR Buffer中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K⁺はDNA バックボーンのリン酸基（P^–）に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH₄⁺は、塩基（B）間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。