AllPrep RNA/Protein Kit

細胞からRNAとタンパク質を同時に分離精製
  • 同一サンプルから高品質なRNAおよびタンパク質
  • スピンカラムを用いたプロトコールで迅速な精製
  • 少量の培養細胞から効率的なサンプル調製
  • 良好な結果を実現するRNAとネイティブなタンパク質

AllPrep RNA/Protein Kitは同一の細胞培養液サンプルからトータルRNAとネイティブなタンパク質を同時に分離精製します。

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AllPrep RNA/Protein Kit (50)
50 AllPrep Mini Spin Columns, 50 RNeasy Mini Spin Columns, 50 Protein Cleanup Mini Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Reagents and Buffers
80404
515,00 €
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The AllPrep RNA/Protein Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Highly intact RNA and high-quality protein from the same cell sample.|AllPrep RNA/Protein procedure.|Purification of functional protein.|Sensitivity in real-time RT-PCR.|
Total RNA was purified from HeLa cells and analyzed on the Agilent 2100 Bioanalyzer. The rRNA ratio (28S/18S) was 2.04. Total protein was purified from HeLa cells and analyzed by western blot. Analysis of duplicate protein samples with antibodies against Lamin (numclear protein) and TIM23 (mitochondrial protein) demonstrates that the total protein fraction contains proteins from subcellular compartments.||HeLa cells in a 96-well plate were transfected with a β-galactosidase-reporter plasmid. After 48 hours, protein was purified and β-galactosidase activity was assayed (yellow indicates enzyme activity). Protein was purified using either the AllPrep RNA/Protein Kit (AllPrep) or the RNeasy Mini Kit (cell lysate was passed through an RNeasy spin column, and protein was precipitated from the flow-through) (Other). Each column of wells shows triplicate results from one cell sample.|RNA was purified from HeLa cells using the AllPrep RNA/Protein Kit and reverse-transcribed. Serial dilutions of cDNA equivalent to 100 pg to 100 ng of total RNA were analyzed using a real-time RT-PCR assay for human GSK3B (glycogen synthase kinase 3 beta). Reactions were performed in duplicate. RNA purified using the RNeasy Mini Kit showed similar CT values and reproducibility (data not shown). NTC: No template control.|
Performance
AllPrep RNA/Protein Kitは同一の細胞培養液サンプルからトータルRNAとネイティブなタンパク質を同時に分離精製します。細胞サンプルから精製したRNAをAgilent 2100 Bioanalyzerで解析すると、RIN値は通常10となり、RNAが分解されていないことが示されます。同一の細胞サンプルから精製されたネイティブなタンパク質には、全ての細胞タンパク質が含まれています(図“同一の細胞サンプルから精製された全く分解されていない高品質なRNAおよびタンパク質を精製")。AllPrep RNA/Protein Kitにより精製されたRNAはリアルタイムRT-PCRに適しており(図"リアルタイムRT-PCRにおける感度")、精製された細胞タンパク質はダウンストリームの酵素アッセイにおいて機能性が示されています(図"機能タンパク質の精製")。
Principle

AllPrep RNA/Protein Kitは同一の細胞培養液サンプルからトータルRNAとネイティブなタンパク質を同時に分離精製します。mRNAとタンパク質のレベルでsiRNAによるノックダウンを検証する実験において、本キットはサンプル調製を合理化するとともに、培養細胞数を顕著に減らせます。また、RNAおよびタンパク質は同一サンプル由来であるため、ノックダウン解析の信頼性がより高くなります。AllPrep RNA/Protein Kitは、RNAiおよび遺伝子発現解析用に開発されたQIAGEN社の製品グループの一部です。これらの製品によって、再現性が極めて高い、高感度な結果が得られます。これらの製品グループには、至適化済みのPCRマスターミックス、即使用できるアッセイ、siRNA、トランスフェクション試薬が含まれています。これらの製品を用いたRNAiや遺伝子発現解析のワークフローの標準化は、バイオメディカル研究の多くの分野での成功に寄与しています。

Procedure
スピンカラム法によりRNAとタンパク質を、単一のサンプル細胞からわずか40分以内で精製できます(フローチャート"AllPrep RNA/Protein操作手順")。AllPrep DNA/RNA/Protein Kitを用いて、培養細胞および組織からDNA、RNA、およびタンパク質(ウェスタンブロットに適しているが酵素アッセイには不適)を同時に精製分離する方法もあります。
Applications

AllPrep RNA/Protein Kitは、同一の細胞からRNA、タンパク質を調製します。精製したRNAおよびタンパク質によって、リアルタイムRT-PCR、ウェスタンブロット、酵素アッセイなどのダウンストリームアプリケーションにおいて最適な結果が得られます(注:アッセイにおける目的タンパク質の機能性は、それぞれのタンパク質の特性に従って検証が必要です)。

Feature
Specifications
Applications PCR, real-time PCR, blotting, microarray
Elution volume 30–50 µl
Format Spin column
Main sample type Cultured cells
Processing Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein RNA, native protein
Sample amount 700 µl
Technology Silica technology
Time per run or per prep 40 minutes

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Kit Handbooks
2
Images
High-quality RNA and protein fractions
Highly intact RNA and high-quality protein from the same cell sample.

Total RNA was purified from HeLa cells and analyzed on the Agilent 2100 Bioanalyzer. The rRNA ratio (28S/18S) was 2.04. Total protein was purified from HeLa cells and analyzed by western blot. Analysis of duplicate protein samples with antibodies against Lamin (numclear protein) and TIM23 (mitochondrial protein) demonstrates that the total protein fraction contains proteins from subcellular compartments.

AllPrep RNA/Protein procedure
AllPrep RNA/Protein procedure.
Purification of functional protein
Purification of functional protein.
HeLa cells in a 96-well plate were transfected with a β-galactosidase-reporter plasmid. After 48 hours, protein was purified and β-galactosidase activity was assayed (yellow indicates enzyme activity). Protein was purified using either the AllPrep RNA/Protein Kit (AllPrep) or the RNeasy Mini Kit (cell lysate was passed through an RNeasy spin column, and protein was precipitated from the flow-through) (Other). Each column of wells shows triplicate results from one cell sample.
Sensitivity in real-time RT-PCR
Sensitivity in real-time RT-PCR.
RNA was purified from HeLa cells using the AllPrep RNA/Protein Kit and reverse-transcribed. Serial dilutions of cDNA equivalent to 100 pg to 100 ng of total RNA were analyzed using a real-time RT-PCR assay for human GSK3B (glycogen synthase kinase 3 beta). Reactions were performed in duplicate. RNA purified using the RNeasy Mini Kit showed similar CT values and reproducibility (data not shown). NTC: No template control.