AllPrep DNA/RNA Micro Kit
細胞あるいは組織サンプルから DNA および RNA を同時に分離精製
- 同一サンプルから高品質のDNAおよびRNA
- 貴重なサンプルから最大収量のDNAおよびRNAを精製
- 簡単で効率的なプロトコールにより迅速に精製
- 全てのダウンストリームアプリケーションに即使用可能な DNAおよびRNA
AllPrep DNA/RNA Micro Kitは同一の生体サンプルから同時にゲノムDNAとトータルRNAを精製できます。ゲノムDNA は画期的なAllPrep DNA Spin cloumnにより精製されます。RNA はRNeasy MinElute Spin cloumnを用いてAllPrepカラムのろ液から精製します。このキットは最大5 x 105 個の細胞あるいは5 mgの組織から調製できます。
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AllPrep DNA/RNA Micro Kit
For 50 micropreps: AllPrep DNA Spin Columns, RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes, Carrier RNA, RNase-Free Water and Buffers
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80284
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AllPrep DNA/RNA Micro Kit は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
AllPrep DNA/RNA操作手順|トータルRNA およびゲノムDNA の同時精製|幅広いダイナミックレンジ|
|AllPrep テクノロジー(AllPrep DNA/RNA Mini Kit)を用いてラット肝臓サンプル10 mg からトータルRNAとゲノムDNAを精製した。[A] 精製したRNAを1.2%ホルムアルデヒドアガロースゲルで解析した。[B] 精製したDNAを0.8%アガロースゲルで解析した。M:マーカー。|AllPrep DNA/RNA Micro Kit を用いて腎臓ホモジネートの10 倍連続希釈液からゲノムDNAとトータルRNAを精製した。各希釈液ごとにDNAはduplicates、RNA は4 replicates で精製した。[A] Pgk1 遺伝子のリアルタイムPCR 解析、[B] Jun 転写物のリアルタイムRT-PCR解析は、5 mgから50 ngの組織で正確な定量が広範囲で行なえたことを示した。|
パフォーマンス
培養細胞や溶解しやすい組織の両方にAllPrep DNA/RNA Micro Kitを用いることができます(表を参照)。ゲノムDNA は斬新なAllPrep DNA Spin Columnを用いて、トータルRNA はRNeasy あるいはRNeasy MinElute Spin Columnを用いて精製します。Agilent RIN値が10に近いトータルRNAが、培養細胞から通常得られます。精製したゲノムDNAの平均長は、ホモジナイズ条件によりますが15~30 kb となります(図 "トータルRNA およびゲノムDNA の同時精製")。ゲノムDNAおよびトータルRNAを用いて、幅広いダイナミックレンジで信頼性の高い定量が可能です(図 "幅広いダイナミックレンジ")。
| 心臓 |
3.89 |
2.00 |
| 脳 |
2.60 |
3.08 |
| 腎臓 |
11.33 |
12.70 |
| 肝臓 |
32.40 |
16.02 |
| 肺 |
9.65 |
24.63 |
| 脾臓 |
20.50 |
43.51 |
| 胸腺 |
34.90 |
56.89 |
| 腸 |
26.71 |
27.38 |
原理
AllPrep DNA/RNA Micro Kitは、単一細胞または組織サンプルからゲノムDNAおよびトータルRNAの両方を精製するように設計されており、レーザーマイクロダイセクションで採取した凍結切片や穿刺吸引生検など少量のサンプルに適しています。本キットを用いた分離精製法は各サンプルを分割する必要がなく、最大収量のDNA およびRNAを精製できます。DNAおよびRNAを別々に溶出・精製でき、どのようなダウンストリームアプリケーションにもすぐに使用できます。
操作手順
簡単なワークフローで同一サンプルから高品質なDNA およびRNAをわずか40 分で分離精製できます(フローチャート"AllPrep DNA/RNA 操作手順")。本キットは培養細胞および溶解しやすい組織に使用できます。ゲノムDNAは斬新なAllPrep DNA Spin Columnを用いて、トータルRNA はRNeasy MinElute spin columnを用いて精製します。
Buffer RLT Plus(AllPrep DNA/RNA Micro Kit に添付)で組織を破砕およびホモジナイズする時、気泡が大量に生じることがあります。破砕とホモジナイゼーションの前に、Buffer RLT PlusにReagent DX(別売)を最終濃度が0.5%(v/v)になるように添加することにより、気泡の発生が抑えられます。Reagent DX は本キットで十分にテストされており、RNA純度あるいはリアルタイムRT-PCRのようなダウンストリームアプリケーションへの影響はありません。Reagent DXを含むBuffer RLT Plusは、室温(15~25℃)で少なくとも9ヶ月は保存できます。
補足プロトコールを用いてオプションでタンパク質精製も可能です。サンプル量が多い場合には、AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit を用いて同一の細胞あるいは組織サンプルから同時にDNA、RNA、タンパク質を精製できます。
アプリケーション
精製したゲノムDNA はホモジナイゼーション条件によりますが平均15 ~ 30 kbの長さで、サザンブロット法、ドットブロット法、スロットブロット法、PCR、マルチプレックスPCRのようなあらゆるアプリケーションに最適です。
精製したトータルRNA は RT-PCR、リアルタイム RT-PCR、ディファレンシャルディスプレイ、cDNA 合成、ノーザンブロット法、ドットブロット法、スロットブロット法、マイクロアレイを含む様々なアプリケーションに使用できます。
補足プロトコールを用いてオプションでタンパク質精製が可能です。精製したタンパク質を変性し、SDS-PAGE、ウェスタンブロット、2Dゲル電気泳動のようなアプリケーションに使用することができます。
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Feature
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Specifications
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Applications
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PCR, RT-PCR, real-time PCR, cDNA synthesis, microarray, blotting
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Elution volume
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DNA: 30 µl; RNA: 10 µl
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Format
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Spin column
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Main sample type
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Cells, tissue
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Processing
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Manual (centrifugation)
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Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein
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Genomic DNA and total RNA
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Sample amount
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5 x 10e5 cells or 5 mg tissue
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Technology
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Silica technology
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Time per run or per prep
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35 min
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Yield
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Varies
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FAQ ID -1089
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FAQ ID -1749
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FAQ ID -1750
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FAQ ID -1751
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FAQ ID - 3391
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I received one of the kits in the list below containing the MinElute columns, however they were left out for a while and not stored at 2-8°C upon receipt. Can I still use them? AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro
FAQ ID - 3560
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FAQ ID -530
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FAQ ID -1164
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For simultaneous purification of genomic DNA and total RNA from the same small sample, including
- animal and human cells (≤5 x 10^5)
- animal and human tissues (≤5 mg)
- microdissected cryosections
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同一の少量サンプルからゲノムDNA およびトータルRNA を同時に分離精製
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画像
トータルRNA およびゲノムDNA の同時精製
AllPrep テクノロジー(AllPrep DNA/RNA Mini Kit)を用いてラット肝臓サンプル10 mg からトータルRNAとゲノムDNAを精製した。[A] 精製したRNAを1.2%ホルムアルデヒドアガロースゲルで解析した。[B] 精製したDNAを0.8%アガロースゲルで解析した。M:マーカー。
幅広いダイナミックレンジ
AllPrep DNA/RNA Micro Kit を用いて腎臓ホモジネートの10 倍連続希釈液からゲノムDNAとトータルRNAを精製した。各希釈液ごとにDNAはduplicates、RNA は4 replicates で精製した。[A] Pgk1 遺伝子のリアルタイムPCR 解析、[B] Jun 転写物のリアルタイムRT-PCR解析は、5 mgから50 ngの組織で正確な定量が広範囲で行なえたことを示した。
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