新しいEuropean Standard SetローカスとAmelogeninのマルチプレックス増幅

  • 約90分での迅速なPCR反応
  • 阻害物質に対して高い耐性があり高感度
  • シグナル/ノイズ比の改良により品質の高い結果
  • 即使用可能なFast Reaction Mixで操作手順を簡便化
  • 16 種類のローカスを同時に増幅

Investigator ESSplex Plus Kitは、新しいEuropean Standard Set(ESS)ローカスの15種類のSTRマーカーすべてと、性別を特定するAmelogeninを増幅します。これらのマーカーはEuropean Network of Forensic Science Institutes(ENFSI) により推奨され、European Union Councilにより認可されています。本キットはQIAGENの高速サイクリングテクノロジーを採用し、わずか90分での増幅が可能です。ユニークな色素セットのBT5 Matrixでキャリブレーションし、遺伝子解析を行ないます。

製品名 Product no. Cat. no. List price:
 
 
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製品名 Cat. no. List price:
Investigator ESSplex Plus Kit (100)
Primer Mix, Reaction Mix, DNA Polymerase, Control DNA, Allelic Ladder ESSplex Plus, DNA Size Standard 550 (BTO), and Nuclease-Free Water
381535
¥262,000
Investigator ESSplex Plus Kit (400)
Primer Mix, Reaction Mix, DNA Polymerase, Control DNA, Allelic Ladder ESSplex Plus, DNA Size Standard 550 (BTO), and Nuclease-Free Water
381537
¥991,000

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PCR作動時間の比較|Investigator ESSplex Plus阻害物質耐性|高濃度の阻害物質が入ったサンプルからのプロファイル作成|
他のメーカーの製品に比べてInvestigator ESSplex Plus Kitを使用した場合に効率的な作動時間を示した。PCRはApplied Biosystems GeneAmp PCR System 9700 Thermal CyclerとGold-plated Silver blockで実施した。|エレクトロフェログラムは500 μM Hematin存在下で作成した 500 pg Control DNA XY5のプロファイルを示す。解析はInvestigator IDproof Softwareを用いてApplied Biosystems 3500 Genetic Analyzerで行なった。
|6種類の代表的な阻害物質の濃度を増やしてアッセイ性能のテストを行なった。500 pgのControl DNA 9948をマスターミックスに添加し、スタンダード条件下でPCRを実施した。解析はInvestigator IDproof Softwareを用いてApplied Biosystems 3500 Genetic Analyzerで行なった。アレルコーリングのthreshold として100 rfuを用いた。|
パフォーマンス

高速サイクリングテクノロジーを採用しているため、約90分という他社に比べ格段に早い反応時間で信頼のある高感度な結果が得られます。(図 "PCR実行時間の比較"を参照)。

画期的なFast Reaction Mixは、阻害物質への耐性を高めるために実績あるQIAGENのマルチプレックスPCRテクノロジーをベースに最適化されています。 6種類の阻害物質(フミン酸、ヘマチン、タンニン酸、インジゴカルミン、カルシウム、コラーゲン)の濃度を増加して評価したアッセイの性能は、高い感度と優れた阻害物質耐性を示します(図“阻害物質存在下でのプロファイル作成”および“阻害物質耐性アッセイ”)。 このテクノロジーにより、信頼性のある高品質な結果を得ることができます。  

Investigator ESSplex Plus Kit は、GeneAmp 9700サーマルサイクラー(標準モード)とApplied Biosystems 3500 Genetic Analyzerを用いて検証、評価されました。

標準条件下で必要なDNA量は0.5 ngです。弊社の検証では、0.2~2 ngのDNAで安定した結果が、0.1 ng未満のDNAでは信頼できる結果が得られました。

原理

Investigator ESSplex Plus Kit は、European Standard Set(ESS)ローカスを構成する15種類の多型性STRマーカーとAmelogeninを迅速に同時増幅するために、QIAGENの高速サイクリングPCRテクノロジーを用いています。 プライマーはアレルのローカスの重複を防止するように入念に設計されており、間違った解釈の可能性が最小限に抑えられます。

操作手順

15種類の多型性STRマーカーや性別を特定するAmelogeninは、シングルPCRで同時に増幅され、表“Investigator ESSplex Plus Kit 色素と対応するマーカー”に記載の色素により標識されます。

その後、増幅されたローカスのキャピラリー電気泳動を行ないます。結果はQIAGENのInvestigator IDproofあるいはIDproof Mixture Softwareなどの専用ソフトウェアにより解析することができます。詳細は表 "技術仕様"をご覧ください。

Investigator ESSplex Plus Kit 色素と対応するマーカー
色素 マーカー
6-FAM Amelogenin TH01 D3S1358 vWA D21S11
BTG D16S539 D1S1656 D19S433 D8S1179 D2S1338
BTY D10S1248 D22S1045 D12S391 FGA
BTR D2S441 D18S51
技術仕様
容量/増幅反応 25 μl
マトリックス BT5
蛍光標識 6-FAM, BTG, BTY, BTR, BTO
遺伝子解析装置 ABI PRISM 310、ABI PRISM 3100/3100-Avant、Applied Biosystems 3130/3130xl、Applied Biosystems 3500/3500xL Genetic Analyzers
解析用ソフトウェア QIAGEN Investigator IDproof、Investigator IDproof Mixture Software、Applied Biosystems GeneMapper ID、GeneMapper ID-X、Genotyper Software
アプリケーション

Investigator ESSplex Plus Kitは血液、口腔スワブ、法医学的斑痕からのDNAプロファイルを作成し、以下の目的に最適です:

犯罪データベースや法医学ケースワークサンプル
父子鑑定
集団遺伝学研究
その他の個人識別

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