REPLI-g UltraFast Mini Kit

微量あるいは貴重なサンプルから全ゲノムを均一かつ迅速に増幅
  • わずか1~1.5時間で全ゲノム増幅を実現
  • ダウンストリームアプリケーションに十分な量のDNAを増幅
  • 様々なスタートサンプルから再現性のある全ゲノム増幅
  • 長期保存にも非常に安定な増幅DNA
ゲノム解析のためにゲノムDNA量が不十分であるという問題は、サンプル中の全DNA増幅(whole genome amplification)により解決できます。REPLI-g UltraFast Kitには少量サンプルからわずか60~90分で均一で正確な全ゲノム増幅を実現するREPLI-g UltraFast DNA Polymeraseが含まれ、20 µlの反応液あたり通常7 µgのDNAを増幅できます。ゲノムDNA、鮮血や乾血、口腔スワブ、新鮮/凍結組織、細胞など様々なスタートサンプルが使用可能です。増幅されたDNAは様々な遺伝子解析に直接利用できます。

 

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REPLI-g UltraFast Mini Kit (25)
DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 25 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions
150033
R$ 1.681,00
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REPLI-g UltraFast Mini Kit (100)
DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 100 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions
150035
R$ 5.162,00
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The REPLI-g UltraFast Mini Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Purified genomic DNA procedure.|Consistent and high yields of amplified DNA.|
Amplification of genomic DNA using the REPLI-g UltraFast Mini Kit involves 3 basic steps. First, the sample undergoes gentle alkaline denaturation. Next, the sample is neutralized, and finally incubated with REPLI-g UltraFast DNA Polymerase at 30°C.|Genomic DNA samples (10 ng each) and non-template control (NTC) samples (containing no template DNA) were amplified using the REPLI-g UltraFast Mini Kit and the DNA yield was determined after various times. An average yield of 7 µg was obtained after amplification for 60 minutes, while 10–13 µg DNA was obtained after 90 minutes. Up to 5 µg DNA was obtained after just 45 minutes, allowing even faster downstream genetic analysis. No DNA was detected in the non-template control reactions.|
Desempenho
反応開始90分後の平均DNA収量は、標準的品質のサンプルで20 µlの反応液あたり7 µgです。限られた時間しかない場合には、わずか反応開始45分後でもダウンストリームの遺伝子解析に十分な量の増幅DNAが得られます(図"増幅DNAの一定で高い収量")。テンプレートDNAを含まないネガティブコントロール反応液では増幅産物が見られず、反応結果はサンプルあるいは混入したDNAの有無を正確に反映します(図"増幅DNAの一定で高い収量")。
Fundamento

ゲノム解析において、解析のためのゲノムDNAを十分量確保できない場面によく遭遇します。全DNA増幅により、サンプル中の全DNAを広範囲に増幅することでこの問題を解決でき、同じDNAサンプルでも全ての解析を行なうために十分な量が得られます。REPLI-g UltraFastテクノロジーは全ゲノム領域の迅速で均一なDNA増幅を実現し、遺伝子配列による増幅の偏りもほとんどありません。この方法はMultiple Displacement Amplification(MDA)テクノロジーに基づくDNA伸長性が高いユニークなDNAポリメラーゼを用いた等温ゲノム増幅反応により、最高100 kbまでのDNAをはるかに短時間で増幅でき、PCR法を用いた増幅の際に生じる配列の大きな偏りも回避できます。さらにユニークなアルカリ変性バッファーはゲノムDNAのマイルドな変性を確実に行ない、熱変性で起きるテンプレートDNAのフラグメント化を回避できます。そのため、ダウンストリームアッセイにおいてより高感度で信頼できる結果が得られます。

Procedimento
REPLI-g UltraFast Mini Kitを用いたゲノムDNAの増幅は3つの基本的な操作ステップが必要です(図"精製したゲノムDNAの操作手順")。テンプレートDNAの断片化および損傷を避けるため、まずサンプル(精製したゲノムDNA 10 ng、全血0.5 µl、組織培養細胞300個)のマイルドなアルカリ変性を行ないます。次にサンプルを中和し、最後にREPLI-g UltraFast DNA Polymeraseを添加して30 ℃でインキュベートします。増幅DNAは60分後に使用可能となり、それ以上の精製は行ないません。
Aplicações

REPLI-gで増幅したゲノムDNAは次のような様々なダウンストリームアプリケーションに使用することができます。

  • ジェノタイピング(SNP、STR、マイクロアレイなど)
  • エンドポイントPCRおよび定量リアルタイムPCR
  • シークエンシング 
  • Comparative Genome Hybridization(CGH法) 
Característica
Especificações
Amplification Whole genomic DNA
Applications Genotyping, microarray, PCR, real-time PCR
Denaturation step Alkaline
Maximum input volume 10 ng DNA, 0.5 µl whole blood, ~300 cells/µl
Minimal pipetting volume needed 1 µl
Quality assessment No
Reaction time 60–90 minutes
Reaction volume 20 µl
Samples per run (throughput) Mid
Starting amount of DNA >10 ng purified genomic DNA
Starting material Genomic DNA, blood, cells
Technology Multiple Displacement Amplification (MDA)
Yield ~10 µg

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Brochures & Guides
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FAQs
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Kit Handbooks
1
For fast whole genome amplification from purified genomic DNA, blood, and cells
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Imagens
Purified Genomic DNA Procedure.
Purified genomic DNA procedure.

Amplification of genomic DNA using the REPLI-g UltraFast Mini Kit involves 3 basic steps. First, the sample undergoes gentle alkaline denaturation. Next, the sample is neutralized, and finally incubated with REPLI-g UltraFast DNA Polymerase at 30°C.

Consistent and High Yields of Amplified DNA.
Consistent and high yields of amplified DNA.

Genomic DNA samples (10 ng each) and non-template control (NTC) samples (containing no template DNA) were amplified using the REPLI-g UltraFast Mini Kit and the DNA yield was determined after various times. An average yield of 7 µg was obtained after amplification for 60 minutes, while 10–13 µg DNA was obtained after 90 minutes. Up to 5 µg DNA was obtained after just 45 minutes, allowing even faster downstream genetic analysis. No DNA was detected in the non-template control reactions.