QIAamp DNA Blood Midi Kit

血液および関連体液からゲノム、ミトコンドリアあるいはウイルスDNA(最大60 µg)を精製
  • 高品質で即使用可能なDNAの迅速精製
  • 有機溶媒抽出あるいはアルコール沈殿が不要
  • 一定した高い収量
  • 夾雑物および阻害物質を完全に除去

QIAamp DNA Blood Midi Kitは全血、血漿、血清、その他の体液からシリカメンブレンを利用したDNA精製を実現します。本キットは、0.3~2 mlのヒト全血(新鮮・凍結)を調製するようにデザインされています。QIAamp Midi Spin Column は遠心機あるいは吸引マニホールド(吸引法の場合には、Buffer AW1 [Cat. no. 19081] とBuffer AW2 [Cat. no. 19072]が追加で必要)のどちらでも簡単に処理できます。

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QIAamp DNA Blood Midi Kit (20)
For 20 DNA midipreps: 20 QIAamp Midi Spin Columns, QIAGEN Protease, Buffers, Collection Tubes (15 ml)
51183
£153.00
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QIAamp DNA Blood Midi Kit (100)
For 100 DNA midipreps: 100 QIAamp Midi Spin Columns, QIAGEN Protease, Buffers, Collection Tubes (15 ml)
51185
£640.00
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The QIAamp DNA Blood Midi Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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QIAamp Spin Column procedure.|Apoptotic banding in stored blood.|Long-range PCR.|Paternity testing by RFLP analysis.|

Optimized buffers lyse samples, stabilize nucleic acids, and enhance selective DNA adsorption to the QIAamp membrane. Alcohol is added and lysates loaded onto the QIAamp spin column. Wash buffers are used to remove impurities and pure, ready-to-use DNA is then eluted in water or low-salt buffer. |Genomic DNA from 8 blood samples stored at 4°C for 1 week. DNA was purified using the QIAamp DNA Blood Mini Kit. When blood is stored at 4°C, the DNA is rapidly degraded due to apoptosis; the resulting apoptotic banding pattern can clearly be seen in these samples. M1: lambda-HindIII; M2:100 bp ladder.|Amplification of a 10 kb fragment of the human ALDH1 gene from genomic DNA isolated from blood. DNA was purified using conventional methods (Phenol) or the QIAamp DNA Blood Maxi Kit (QIAamp). PCR products were sequenced directly. M: 1 kb ladder.|Three paternity cases tested with DNA purified from blood samples with the QIAamp DNA Blood Mini Kit. 1: mother; 2: child; 3: alleged father; 4: child + alleged father. M: markers. Each lane had 3 µg of DNA loaded. Outcome: A: alleged father excluded; B & C: alleged father confirmed.
(Data kindly provided by J. James, Gene Proof Technologies, Nashville, TN, USA.)|

Performance

QIAamp DNA Blood Kitでは、サンプルの保存期間および保存状態により200 bpから50 kbまでのDNAを調製できます(図 “保存血液のアポトーシスバンド”)。精製したDNAは、ロングレンジPCR増幅(図 “長いフラグメントのPCR増幅")や、父子鑑定などに使用される制限断片長多型(RFLP)分析法(図 “RFLP分析による父子鑑定”)に最適です。

QIAamp DNA Blood Midi Kitは、DNA回収率が、開始時の細胞密度によっては最高94.5%になります(表参照)。

様々な細胞密度を有するヒト全血からのDNA精製
1 mlあたりの白血球数 DNA収量 (µg) DNA回収率(%)
2.5 x 105 3.0 92.3
1.0 x 106 11.0 91.7
5.0 x 106 62.4 94.5
1.0 x 107 116.3 88.1

ゲノムDNAはヒト全血の2 mlから精製し、300 µlの溶出バッファーで溶出した。1回目の溶出液をもう一度カラムにアプライし、再度遠心操作を行なった。リンパ球1個あたり6.6 pgのDNAを含むと仮定してDNAの回収率を計算した。

Principle

フェノール/クロロホルム抽出は不要です。DNAは選択的にQIAampシリカゲルメンブレンに結合し、夾雑物は洗い流されます。2価の陽イオンやタンパク質などのPCR阻害物質は2回の洗浄ステップで完全に除去され、高純度な核酸はキットに同梱の水あるいはバッファーで溶出されます。QIAamp DNA Bloodテクノロジーにより血液および関連体液から分離したゲノム、ミトコンドリアあるいはウイルスDNA は、PCR およびブロット法にすぐに使用できます。

Procedure

QIAamp DNA Blood Midi Kitは、迅速なスピンカラム操作法を使用し、血液および関連体液から簡便にDNAを精製します(フローチャート "QIAamp Spin Column の操作手順"参照)。EDTA、クエン酸、ヘパリンなどの汎用の抗凝血剤を含む新鮮または凍結した全血を処理することができます。QIAamp DNA Blood Midi Kitでは、0.3~2 mlのサンプル量が調製時間55分で処理されます。通常、1 mlの健常人の全血から100~400 µl の溶出量で20~60 µgのDNAが得られます。

QIAamp DNA Blood Kit には、各種サンプルからのDNA精製に関するプロトコールを含む詳細なハンドブックが提供されています。QIAampによるサンプル調製テクノロジーは、ライセンス保証されています。

Applications

QIAamp DNA Blood Midi Kitは15 mlのコレクションチューブ付きのQIAamp Midi Spin Column を用いた実績のあるQIAampテクノロジーにより、様々なサンプルからDNAを精製します。処理可能なサンプルには以下のようなものがあります。

血液(新鮮/凍結)あるいはバフィコート
血漿あるいは血清
骨髄
白血球
体液
Feature
Specifications
Applications PCR, southern blotting
Elution volume 100–400 µl
Format Spin column
Main sample type Whole blood, body fluids
Processing Manual (centrifugation or vacuum)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Genomic DNA, mitochondrial DNA, viral DNA
Sample amount 0.3–2 ml
Technology Silica technology
Time per run or per prep 55 minutes
Yield 20–60 µg

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Kit Handbooks
1
For large-scale genomic and viral DNA purification from whole blood, plasma, serum, body fluids, lymphocytes
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User-Developed Protocols
1
As starting material, 5 g soil was mixed with different amounts of Bacillus subtilis cells. Sensitivity was 5 x 103 cells/5g soil.
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References
0
Images
QIAamp Spin Column and Vacuum Procedures
QIAamp Spin Column procedure.

Optimized buffers lyse samples, stabilize nucleic acids, and enhance selective DNA adsorption to the QIAamp membrane. Alcohol is added and lysates loaded onto the QIAamp spin column. Wash buffers are used to remove impurities and pure, ready-to-use DNA is then eluted in water or low-salt buffer.

Apoptotic banding in stored blood
Apoptotic banding in stored blood.
Genomic DNA from 8 blood samples stored at 4°C for 1 week. DNA was purified using the QIAamp DNA Blood Mini Kit. When blood is stored at 4°C, the DNA is rapidly degraded due to apoptosis; the resulting apoptotic banding pattern can clearly be seen in these samples. M1: lambda-HindIII; M2:100 bp ladder.
Efficient long-range PCR
Long-range PCR.
Amplification of a 10 kb fragment of the human ALDH1 gene from genomic DNA isolated from blood. DNA was purified using conventional methods (Phenol) or the QIAamp DNA Blood Maxi Kit (QIAamp). PCR products were sequenced directly. M: 1 kb ladder.
Paternity Testing by RFLP Analysis
Paternity testing by RFLP analysis.
Three paternity cases tested with DNA purified from blood samples with the QIAamp DNA Blood Mini Kit. 1: mother; 2: child; 3: alleged father; 4: child + alleged father. M: markers. Each lane had 3 µg of DNA loaded. Outcome: A: alleged father excluded; B & C: alleged father confirmed.
(Data kindly provided by J. James, Gene Proof Technologies, Nashville, TN, USA.)