DyeEx 96 Kit

1~96個のシークエンス反応液から未反応のダイターミネーターを除去
  • わずか2回の簡単な遠心ステップだけの迅速操作
  • ろ過用のゲル粒子は水和済みで即使用可能
  • あらゆるダイターミネーターを効率的に除去
DyeEx Kit はスピンカラムおよび96 ウェルプレートの両フォーマットを取り揃えており、シークエンシング反応液からダイターミネーターを除去するためにゲルろ過法を使用しています。シークエンシング反応液を水和済みのゲルろ過樹脂にロードします。短い遠心操作の後、反応液をキャピラリーシークエンサーに直接ロードできます。未反応のダイターミネーターはゲル粒子の中に保持されます。
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DyeEx 96 Kit (4)
4 DyeEx 96 Plates; 4 Collection Plates, 48-Well
63181
4.795,00 kr
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DyeEx 96 Kit (24)
24 DyeEx 96 Plates; 4 Collection Plates, 48-Well
63183
25.910,00 kr
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The DyeEx 96 Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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DyeEx separation principle.|DyeEx 96 procedure.|Long-read sequence.|Superior sequencing results.|
The DyeEx procedure uses gel filtration to quickly and efficiently remove unincorporated terminators from sequencing reactions.|A quick centrifugation step removes storage buffer from the wells, the sequencing samples are loaded, and a second centrifugation step removes unincorporated dye terminators.
|Sequence of a 4.7 kb plasmid sequenced using the ABI PRISM BigDye Terminator Sequencing Kit and purified using the DyeEx 96 Kit.|[A] Gel images and [B] sequence profiles of QIAprep purified plasmids sequenced using the ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit and ABI PRISM 377 DNA Sequencer. Sequencing reactions were purified using the DyeEx 96 Kit or precipitated with ethanol, as recommended by the supplier of the sequencing kit. The plasmids sequenced were plasmids from a genomic library (ethanol precipitation, gel image) or were pUC21 (DyeEx 96 Kit and ethanol precipitation, sequence profiles). Dye terminators present in ethanol-precipitated sequencing reactions cause dye blobs (indicated by arrows) resulting in unreadable sequences.|
Performance

DyeEx Kitは、BigDye、dRhodamine dye、Rhodamine、DYEnamic ET、WellREDターミネーターを含むあらゆるタイプのダイターミネーターを10~20 µlのシークエンシング反応液から除去します。本キットによるクリーンアップ後、シークエンシング反応液はどのようなキャピラリーシークエンサーでも解析できます。また、シグナル強度が高く、長い読み取りが可能です(図"ロングリードシークエンス")。

高性能なシークエンシング

DyeEx Kit は迅速で簡便なダイターミネーター除去に最適で、優れたシークエンシング結果を得ることができます。一方、エタノール沈殿法を用いたシークエンシング反応液のクリーンアップは、非常に時間がかかり(表 “DyeExおよびエタノール沈殿法の比較”)、非効率的です。ダイターミネーターが完全に除去されていない場合、シ-クエンシングデータにダイブロッブが生じ、判読不能な領域が生じますシ-クエンシング反応液のクリーンアップにDyeEx Kitを使用するとシークエンサーにロードする反応液は確実にダイターミネーターフリーになり、ダイブロッブが現れないので、シークエンスの全領域を読み取ることが可能になります(図"優れたシークエンシング結果")。

DyeExおよびエタノール沈殿法の比較
操作手順 DyeEx 96 エタノール
沈殿
所要時間*
(12 サンプル、スピンフォーマット)
10 分 45 分以上
所要時間*
(96サンプル用 マイクロプレートフォーマット)
N.A. 60 分以上
操作法 即使用可能な
スピンフォーマット
煩雑なピペッティング操作
シークエンスの精度 ++ +
N.A.:該当なし
* ゲルにローディングする前のサンプルの乾燥時間は含まれていない (必要な場合)。
標準プロトコール使用
Principle

DyeEx Spin Column はシークエンシング反応液から未反応のダイターミネーターを迅速かつ効率的に除去するためにゲルろ過を使用しています。未反応のダイターミネーターは、シークエンシングゲルの解析を妨害するので、ダイターミネーターの除去は大変重要です。DyeExゲルろ過樹脂は一定の大きさの孔径を有し、分子量の大きさにより分離します。シークエンシング反応液をDyeExカラムにアプライすると、ダイターミネーターはゲル粒子の中に入り、保持される一方、標識されたDNAフラグメントはゲル粒子に入り込めずにフロースルー中に回収されます(図 "DyeEx分離の原理")。

Procedure

DyeEx 96 Kit を使用するにはQIAGEN 96ウェルプレート分離システムのようなスウィングアウトバケット用のローターを備えた卓上型遠心機が必要です。DyeEx Kit は操作手順が非常に簡単で、迅速なダイターミネーターの除去を可能にします(フローチャート "DyeEx 96 操作手順"参照)。短い遠心操作によりカラムから保存バッファーを取り除いた後、シークエンシング反応液をロードし、2回目の遠心ステップでダイターミネーターを除去します。精製されたサンプルはキャピラリーシークエンサーに直接ロードあるいは乾燥、再溶解し、シークエンシングゲルにロードできます。

Applications

DyeEx Kitは、BigDye、dRhodamine dye、Rhodamine、DYEnamic ET、WellREDターミネーターを含むあらゆるタイプのダイターミネーターを10~20 µlのシークエンシング反応液から除去します。本キットによるクリーンアップ後、シークエンシング反応液はあらゆるキャピラリーシークエンサーで解析できます。シグナル強度が高く、長い読み取りが可能です。

Feature
Specifications
Binding capacity 10–20 µl
Elution volume 10–20 µl
For DyeEx Kits: Terminator removal, ABI PRISM 377, 373, 310, 3100, or 3700, MegaBACE 1000, or CEQ 2000 sequencers
Format 96-well plate
Processing Manual
Removal <10mers 17–40mers dye terminator proteins Dye terminator
Sample type: applications Sequencing reactions
Technology Gel filtration

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Kit Handbooks
1
For DyeEx 2.0 Spin Kit and DyeEx 96 Kit 
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References
0
Images
DyeEx Separation Principle
DyeEx separation principle.
The DyeEx procedure uses gel filtration to quickly and efficiently remove unincorporated terminators from sequencing reactions.
DyeEx Separation Principle
DyeEx 96 procedure.
A quick centrifugation step removes storage buffer from the wells, the sequencing samples are loaded, and a second centrifugation step removes unincorporated dye terminators.
Long-Read Sequence after DyeEx Dye-Terminator Removal
Long-read sequence.
Sequence of a 4.7 kb plasmid sequenced using the ABI PRISM BigDye Terminator Sequencing Kit and purified using the DyeEx 96 Kit.
Superior Sequencing Results Using DyeEx Kits
Superior sequencing results.
[A] Gel images and [B] sequence profiles of QIAprep purified plasmids sequenced using the ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit and ABI PRISM 377 DNA Sequencer. Sequencing reactions were purified using the DyeEx 96 Kit or precipitated with ethanol, as recommended by the supplier of the sequencing kit. The plasmids sequenced were plasmids from a genomic library (ethanol precipitation, gel image) or were pUC21 (DyeEx 96 Kit and ethanol precipitation, sequence profiles). Dye terminators present in ethanol-precipitated sequencing reactions cause dye blobs (indicated by arrows) resulting in unreadable sequences.