細胞からRNAとタンパク質を同時に分離精製
  • 同一サンプルから高品質なRNAおよびタンパク質
  • スピンカラムを用いたプロトコールで迅速な精製
  • 少量の培養細胞から効率的なサンプル調製
  • 良好な結果を実現するRNAとネイティブなタンパク質

AllPrep RNA/Protein Kitは同一の細胞培養液サンプルからトータルRNAとネイティブなタンパク質を同時に分離精製します。

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AllPrep RNA/Protein Kit (50)
50 AllPrep Mini Spin Columns, 50 RNeasy Mini Spin Columns, 50 Protein Cleanup Mini Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Reagents and Buffers
80404
¥64,000

AllPrep RNA/Protein Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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同一の細胞サンプルから全く分解されていない高品質なRNAとタンパク質を精製|AllPrep RNA/Protein操作手順|機能性タンパク質の精製|高感度なリアルタイムRT-PCR|
HeLa細胞からトータルRNAを精製し、Agilent 2100 Bioanalyzerで解析した。rRNAの比率(28S/18S)は2.04だった。HeLa細胞からトータルタンパク質を精製し、ウェスタンブロットで解析した。Lamin(核タンパク質)とTIM23(ミトコンドリアタンパク質)に対する抗体を用いたタンパク質サンプルの解析(duplicate)はトータルタンパク質画分に細胞内コンパートメント由来のタンパク質が含まれていることを証明している。||96ウェルプレート中のHeLa細胞にβ-ガラクトシダーゼレポータープラスミドをトランスフェクトした。48時間後にタンパク質を精製し、β-ガラクトシダーゼの活性を測定した(黄色は酵素活性を示す)。タンパク質はAllPrep RNA/Protein Kit(AllPrep)あるいはRNeasy Mini Kit(細胞ライセートをRNeasy Spin Columnに通し、ろ過液からタンパク質を沈殿させた)(その他)を用いて精製した。ウェルの縦の1列は、同一細胞サンプルのtriplicateの結果である。|AllPrep RNA/Protein Kitを用いてHeLa細胞からRNAを精製し、逆転写反応を行なった。トータルRNAの100 pg から100 ngに相当するcDNAの連続希釈系列を、ヒトGSK3B(glycogen synthase kinase 3 beta)のリアルタイムRT-PCR アッセイを用いて分析した。反応はduplicateで行なった。RNeasy Mini Kitで精製したRNAは、類似するCT値を示し、再現性が得られた(データ未提示)。NTC:テンプレートを含まないコントロール。|
パフォーマンス
AllPrep RNA/Protein Kitは同一の細胞培養液サンプルからトータルRNAとネイティブなタンパク質を同時に分離精製します。細胞サンプルから精製したRNAをAgilent 2100 Bioanalyzerで解析すると、RIN値は通常10となり、RNAが分解されていないことが示されます。同一の細胞サンプルから精製されたネイティブなタンパク質には、全ての細胞タンパク質が含まれています(図“同一の細胞サンプルから精製された全く分解されていない高品質なRNAおよびタンパク質を精製")。AllPrep RNA/Protein Kitにより精製されたRNAはリアルタイムRT-PCRに適しており(図"リアルタイムRT-PCRにおける感度")、精製された細胞タンパク質はダウンストリームの酵素アッセイにおいて機能性が示されています(図"機能タンパク質の精製")。
原理

AllPrep RNA/Protein Kitは同一の細胞培養液サンプルからトータルRNAとネイティブなタンパク質を同時に分離精製します。mRNAとタンパク質のレベルでsiRNAによるノックダウンを検証する実験において、本キットはサンプル調製を合理化するとともに、培養細胞数を顕著に減らせます。また、RNAおよびタンパク質は同一サンプル由来であるため、ノックダウン解析の信頼性がより高くなります。AllPrep RNA/Protein Kitは、RNAiおよび遺伝子発現解析用に開発されたQIAGEN社の製品グループの一部です。これらの製品によって、再現性が極めて高い、高感度な結果が得られます。これらの製品グループには、至適化済みのPCRマスターミックス、即使用できるアッセイ、siRNA、トランスフェクション試薬が含まれています。これらの製品を用いたRNAiや遺伝子発現解析のワークフローの標準化は、バイオメディカル研究の多くの分野での成功に寄与しています。

操作手順
スピンカラム法によりRNAとタンパク質を、単一のサンプル細胞からわずか40分以内で精製できます(フローチャート"AllPrep RNA/Protein操作手順")。AllPrep DNA/RNA/Protein Kitを用いて、培養細胞および組織からDNA、RNA、およびタンパク質(ウェスタンブロットに適しているが酵素アッセイには不適)を同時に精製分離する方法もあります。
アプリケーション

AllPrep RNA/Protein Kitは、同一の細胞からRNA、タンパク質を調製します。精製したRNAおよびタンパク質によって、リアルタイムRT-PCR、ウェスタンブロット、酵素アッセイなどのダウンストリームアプリケーションにおいて最適な結果が得られます(注:アッセイにおける目的タンパク質の機能性は、それぞれのタンパク質の特性に従って検証が必要です)。

Feature
Specifications
Applications PCR, real-time PCR, blotting, microarray
Elution volume 30–50 µl
Format Spin column
Main sample type Cultured cells
Processing Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein RNA, native protein
Sample amount 700 µl
Technology Silica technology
Time per run or per prep 40 minutes

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Kit Handbooks
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Safety Data Sheets
2