細胞および組織からのmicroRNAとトータルRNA精製(96ウェル)
  • miRNAとトータルRNAの効率的な精製
  • miRNAおよび200ヌクレオチド以下のRNAを効率的に濃縮
  • 全てのダウンストリームアプリケーションに最適な高純度RNA
  • サイズごとの画分の同時または分離精製に対応するプロトコール

miRNeasy 96 Kitは、溶解困難な組織を含む様々な細胞や組織から約18ヌクレオチド(nt)以上のRNAを含むトータルRNAを精製します。また、miRNA濃縮画分とトータルRNA(200 nt以上)画分を別々に分離精製することもできます(分離精製には追加でRNeasy 96プレートが必要。RNeasy 96プレートと洗浄バッファーを追加で購入される際はRNeasy 96 Kitを注文されると経済的です)。マニュアル精製はCentrifuge 4-16またはCentrifuge 4-16K、オプションでQIAvac 96吸引マニホールドを用いて行ないます。

製品名 Cat. no. List price:
miRNeasy 96 Kit (4)
For 4 x 96 preps: 4 RNeasy 96 plates, Collection Microtubes (racked), Elution Microtubes CL, Caps, S-Blocks, AirPore Tape Sheets, QIAzol Lysis Reagent, RNase-Free Reagents and Buffers
217061
¥207,000

miRNeasy 96 Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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幅広いサンプル量からの効率的精製|様々な組織からの効率的な同時精製|miRNeasy Kitの性能をTRIzol調製法と比較|Small RNAの効率的な濃縮|フェノールのキャリーオーバーがない高純度RNA|miRNeasy精製法|
[A] 102~107個のJurkat細胞からmiRNeasy 96 Kitを用いて、また[B] ラット肺組織のホモジネートの連続希釈液(20 mg~200 ng)からmiRNeasy Mini Kitを用いてトータルRNAを精製した。同じサンプルからmiRNA濃縮画分(200 nt以下)も精製した。精製したRNAを、miRNA miR-16のリアルタイム定量RT-PCRアッセイのテンプレートとして使用した。|RNAlaterで安定化した様々なラット組織(25 mg)からmiRNeasy 96 Kitを用いてmiRNAを含むトータルRNAを精製した。精製したRNAを、miRNA miR-16およびPGK1遺伝子のmRNAのリアルタイム定量RT-PCRのテンプレートとして使用した。これらの結果は同量の溶出液からPGK1 m RNA(large RNA)とmiR-16(small RNA)の両方の検出に成功したことを示している。|幅広い細胞数のJurkat細胞からmiRNeasy Mini KitあるいはTRIzol Reagentを用いたRNA精製法によりmiRNAを含むトータルRNAを精製した。精製したRNAを、miRNA miR-16のリアルタイム定量RT-PCRアッセイのテンプレートとして使用した。結果から、miRNeasy Kitを用いた精製後のCT値は低いことが示され、TRIzolによる精製時よりもmiRNA量が多かった。miRNeasy Kitを用いた場合、わずか1 x 102個の細胞からでも効率的にmiRNAが精製された。しかしTRIzolを用いた精製法では、1 x 102個の細胞から40サイクルのPCR増幅後にもmiRNAは検出されなかった。|miRNeasy Mini KitあるいはSupplier AIVのキットを用いて3 x 106個のHeLa細胞からmiRNA濃縮画分を精製した。miRNA濃縮画分から同量のRNAを1.5%ゲルで電気泳動した。比較するために、20merと21merの合成RNAも同じゲルで電気泳動した。miRNeasy Kitで調製したmiRNA濃縮画分は約18 ntまでの異なるサイズのRNAのスメアを示した。反対にSupplier AIVのキットを用いて調製したmiRNA濃縮画分には主にtRNAや5S rRNAが観察された。|miRNAを含むトータルRNAをJurkat細胞(1 x 10 6個)からmiRNeasy Mini KitあるいはTRIzol Reagentを用いて精製した。吸光度スペクトルはmiRNeasy Kitで精製したRNAの最大ODが260 nmであることを示した。しかし、TRIzolを用いた精製では最大ODが260 nm以上であり、フェノールのキャリーオーバーを示唆している。さらにTRIzolで調製したRNAでは、OD230の値がより高いことから、TRIzol Reagentによる精製は塩類のキャリーオーバーがあることが示唆される。|miRNeasy Mini Kitは18ヌクレオチド(nt)以上のRNAを含むトータルRNAの精製を実現します。また、miRNA濃縮画分とトータルRNA(200 nt以上)画分を別々に分離精製することもできます。特に感度の高いダウンストリームアプリケーションではバックグラウンドを抑えるために、濃縮されたmiRNAのみの画分が必要とされます。|
パフォーマンス

miRNAを含むトータルRNAが精製されるため、リファレンス遺伝子としてのハウスキーピング遺伝子あるいはその他の関心のあるmRNAとmiRNAの発現レベルを直接比較できます。miRNeasy Kitsは約18 ntまでの大きさのRNAも効率的に濃縮できます。miRNeasy Mini Kitによる精製後には、別のキットを用いて調製したサンプルとは対照的に、極めて小さなRNAの存在が明らかに確認できます(図"small RNAの効率的な濃縮")。miRNeasy Kitsは、少量のスタートサンプルを用いても組織および細胞からRNAを効率的に精製できます(図"幅広いサンプル量からの効率的精製")。 

本キットにより、難溶性組織を含む様々なサンプルからRNAを精製できます(図"広範な組織からの効率的な同時精製")。miRNeasy精製法では、後の解析を阻害する可能性のある塩またはフェノールのコンタミネーションを防ぎます(図"フェノールのキャリーオーバーのない高純度のRNA")。高純度の精製に加え、miRNeasy Kitsは、TRIzol Reagentを用いたようなmiRNA精製法に比べてより高い収量を実現します(図"miRNeasy Kitの性能をTRIzol調製法と比較")。miRNeasy Kitを用いて調製したRNAは高純度で感度の高いダウンストリームアプリケーションにすぐに使用できます。

原理

miRNeasy 96 Kitは、フェノール/グアニジンベースのサンプル溶解法とシリカゲルメンブレンベースによるRNA精製法を、吸引法とスピン法(またはどちらか一方)の迅速さと統合させたものです。本キットに含まれているQIAzol Lysis Reagentは、フェノールとグアニジンチオシアネートの単相溶液であり、組織の溶解を促進しRNaseを阻害すると共に、大部分の細胞のDNAおよびタンパク質を、有機溶媒抽出によりライセートから除去できるようデザインされています。

操作手順

miRNeasy 96 Kitは18ヌクレオチド(nt)以上のRNAを含むトータルRNAの精製を実現します。また、miRNA濃縮画分とトータルRNA(200 nt以上)画分を別々に分離精製することもできます(フローチャート"miRNeasy精製法")。特に感度の高いダウンストリームアプリケーションではバックグラウンドを抑えるために、濃縮されたmiRNAのみの画分が必要とされます。miRNAなどのsmall RNA(200 nt以下)の濃縮を可能にするこの特殊なプロトコールには、96サンプルあたり2枚のRNeasy 96プレートが必要です。

 

アプリケーション

miRNeasy 96 Kit は以下のような様々なアプリケーションに使用するmiRNAを含むトータルRNA精製を実現します。

ノーザンブロット解析
リアルタイム定量RT-PCR
マイクロアレイ解析
Feature
Specifications
Applications PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume 45 µl
Format 96-well plate
Main sample type Tissue, cells
Processing Manual (centrifugation or vacuum)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein miRNA, total RNA
Sample amount 50–100 mg
Technology Silica technology
Time per run or per prep <2 hours
Yield Varies

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キットハンドブック
2
動物細胞および組織からのmiRNAを含むトータルRNAのハイスループット精製用
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クイックスタートプロトコール
1
MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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安全データシート
2