miRNeasy 96 Kit

[A] 10²～10⁷個のJurkat細胞からmiRNeasy 96 Kitを用いて、また[B] ラット肺組織のホモジネートの連続希釈液（20 mg～200 ng）からmiRNeasy Mini Kitを用いてトータルRNAを精製した。同じサンプルからmiRNA濃縮画分（200 nt以下）も精製した。精製したRNAを、miRNA miR-16のリアルタイム定量RT-PCRアッセイのテンプレートとして使用した。|RNAlaterで安定化した様々なラット組織（25 mg）からmiRNeasy 96 Kitを用いてmiRNAを含むトータルRNAを精製した。精製したRNAを、miRNA miR-16およびPGK1遺伝子のmRNAのリアルタイム定量RT-PCRのテンプレートとして使用した。これらの結果は同量の溶出液からPGK1 m RNA（large RNA）とmiR-16（small RNA）の両方の検出に成功したことを示している。|幅広い細胞数のJurkat細胞からmiRNeasy Mini KitあるいはTRIzol Reagentを用いたRNA精製法によりmiRNAを含むトータルRNAを精製した。精製したRNAを、miRNA miR-16のリアルタイム定量RT-PCRアッセイのテンプレートとして使用した。結果から、miRNeasy Kitを用いた精製後のC_T値は低いことが示され、TRIzolによる精製時よりもmiRNA量が多かった。miRNeasy Kitを用いた場合、わずか1 x 10²個の細胞からでも効率的にmiRNAが精製された。しかしTRIzolを用いた精製法では、1 x 10²個の細胞から40サイクルのPCR増幅後にもmiRNAは検出されなかった。|miRNeasy Mini KitあるいはSupplier A_IVのキットを用いて3 x 10⁶個のHeLa細胞からmiRNA濃縮画分を精製した。miRNA濃縮画分から同量のRNAを1.5％ゲルで電気泳動した。比較するために、20merと21merの合成RNAも同じゲルで電気泳動した。miRNeasy Kitで調製したmiRNA濃縮画分は約18 ntまでの異なるサイズのRNAのスメアを示した。反対にSupplier A_IVのキットを用いて調製したmiRNA濃縮画分には主にtRNAや5S rRNAが観察された。|miRNAを含むトータルRNAをJurkat細胞（1 x 10 ⁶個）からmiRNeasy Mini KitあるいはTRIzol Reagentを用いて精製した。吸光度スペクトルはmiRNeasy Kitで精製したRNAの最大ODが260 nmであることを示した。しかし、TRIzolを用いた精製では最大ODが260 nm以上であり、フェノールのキャリーオーバーを示唆している。さらにTRIzolで調製したRNAでは、OD₂₃₀の値がより高いことから、TRIzol Reagentによる精製は塩類のキャリーオーバーがあることが示唆される。|miRNeasy Mini Kitは18ヌクレオチド（nt）以上のRNAを含むトータルRNAの精製を実現します。また、miRNA濃縮画分とトータルRNA（200 nt以上）画分を別々に分離精製することもできます。特に感度の高いダウンストリームアプリケーションではバックグラウンドを抑えるために、濃縮されたmiRNAのみの画分が必要とされます。|