RNeasy Plant Mini Kit

植物と菌類からのトータルRNA精製用
  • 30分で高品質のトータルRNA
  • フェノール/クロロホルム抽出不要
  • CsCl 勾配遠心分離、LiCl やエタノール沈殿は不要
  • 非常に高いRNA回収率
  • あらゆるダウンストリームアプリケーションに即使用可能なRNA

RNeasy Plant Mini Kitには、粘性の高い植物や菌類ライセートのホモジナイズとろ過用のQIAshredder Spin Column、シリカゲルメンブレンテクノロジーを用いた高品質RNA精製用(100 µgまで)のRNeasy Spin Columnが含まれています。精製はQIAcube上で自動化可能です。また、本キットは植物サンプルの効率的な破砕とホモジナイゼーションを実現するTissueRuptorあるいはTissueLyserシステムと組み合わせて使用することも可能です。

Product Cat. no. List price:
RNeasy Plant Mini Kit (50)
50 RNeasy Mini Spin Columns, 50 QIAshredder Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), RNase-free Reagents and Buffers
74904
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The RNeasy Plant Mini Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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RNeasy Plant Mini procedure.|Detection of viruses.|Tissue specificity of histone H4 expression.|
|Total RNA was isolated from budwood obtained from infected apple (1), cherry (2), pear (3), and grapevine (4–8), leaf tissue from black currant (9, 10), and dormant tuber tissue from infected potato (11, 12) using a modification of the RNeasy protocol. Viral RNA was amplified using a one-tube RT-PCR. Amplification products were analyzed on a 1.5% agarose gel. M: DNA Markers VI, Boehringer Mannheim. (Data kindly provided by D.J. MacKenzie, Centre for Plant Health, Agriculture and Agri-Food Canada and M.A. McLean, Euro Nursery & Vineyard (West) Inc., Sidney, Canada.)|Formaldehyde agarose gel and northern blot of total RNA (7 µg) from indicated tissues of tomato. Blot was hybridized with a 32P-labeled DNA probe for the tomato histone H4 gene. M: 0.24-9.5 kb RNA ladder. (Plant tissues and histone H4 cDNA clone kindly provided by K. Theres, MPI for Breeding Research, Cologne, Germany.)|
Performance

RNeasy Plant Mini Kitは、様々な植物や菌類サンプルからのトータルRNAの精製に最適です。サンプルサイズは、10~100 mgの組織、または100~1 x 107個の細胞に対応しています(表"RNeasy Plant Mini Kitで調製したサンプルの例")。スピンカラムは最大100 µgのRNAを結合できます。100 mgの植物組織から得られる一般的なRNA収量は25~65 µgですが、RNA量はサンプルの発達段階および増殖条件により異なる可能性があります(表"100 mgの組織から得られる収量")。

RNeasy Plant Mini Kit で調製したサンプルの例
植物 糸状菌類
Anemone sp.
Arabidopsis thaliana1
Begonia sp.
Beta vulgaris (サトウダイコン)2
Chlamydomonas reinhardii(単細胞藻)
Chrysanthemum
Clarkia spp.3
Daucus carota (ニンジン)4
Diascia sp.
Dendranthema sp.
Euglena gracilis(単細胞藻)
Funaria hygrometrica(コケ)
Hordeum vulgare(オオムギ)
Lycopersicon esculentum(トマト)5
Malus sp. (リンゴ)6
Nicotiana tabacum(タバコ)
Oryza sativa(イネ)
Pelargonium sp.(ゼラニウム)
Petroselinum crispum(パセリ)7
Pisum sativum(エンドウ)
Prunus sp.(サクラ)6
Ranunculus sp.
Ribes nigrum(クロフサスグリ)
Riccia fluitans(ゼニゴケ)
Sinapis arvensis (カラシ)
Solanum tuberosum(ジャガイモ)8
Spinacia oleracea(ホウレンソウ)
Surfinia sp.
Triticum aestivum(小麦)
Vitis sp.(ブドウ)6
Zea mays(トウモロコシ)
Acremonium crysogenum9
Fusarium avenaceum9
若い葉または針状葉、ただし以下に記載されるものは除く。1花、蕾、長角果、根。2根。3花弁、雄蕊、柱頭、萼片、花柱。4培養細胞。5成熟花、展開葉、茎端、茎、青玉果。6若枝。7実生。8休眠塊茎。9菌糸体

 

収量(組織100 mg)
サンプルタイプ 収量
アラビドプシスの葉 35 µg
トウモロコシの葉 25 µg
トマトの葉 65 µg
タバコの葉 60 µg

30~100 µlで溶出したRNAにはウイルスRNAが含まれています(図"ウイルスの検出")。多糖類等の夾雑物は全て除去されるため、溶出されたRNAはあらゆるダウンストリームアプリケーションにすぐに使用できます(図"ヒストンH4発現の組織特異性")。

Principle

RNeasy Plant Mini Kitには、粘性の高い植物や菌類のライセートの微小遠心操作によるホモジナイゼーションおよびろ過用のQIAshredderカラムと、組み合わせて使用するRNA精製用のRNeasy Mini Spin Columnが付いています。グアニジンイソチオシアネート溶解と、シリカゲルメンブレンによる迅速な精製を組み合わせたRNeasyテクノロジーにより、トータルRNA精製を簡便に行なうことができます。RNeasy Kitで精製した高品質のRNAはほとんどDNAを含みません。微量のDNAに敏感なアプリケーションを行なう場合、DNase処理によってRNeasy操作中に残存するDNAを除去できます。

Procedure
まずサンプルを溶解し、QIAshredderカラムでホモジナイズします。ライセートにエタノールを添加して最適な結合条件にします。その後、ライセートをRNeasy シリカメンブレンにアプライします。RNAは結合し、全ての夾雑物は洗浄除去されます。最後に高純度で濃縮されたRNAが水で溶出されます(フローチャート""RNeasy Plant Mini操作手順")。
Applications

RNeasyテクノロジーで精製されたRNAは品質が高く、以下を含む幅広いアプリケーションに最適です。

ノーザン、ドットおよびスロットブロット
エンドポイントRT-PCR
リアルタイム定量RT-PCR
アレイ解析
Poly A+ RNA 調製

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FAQs
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1
RNeasy Mini Kit - For purification of total RNA from animal cells, animal tissues, bacteria, and yeast, and for RNA cleanup; RNeasy Protect Mini Kit - For immediate stabilization of RNA in harvested animal tissues and subsequent total RNA purification; RNeasy Plant Mini Kit - For purification of total RNA from plants and filamentous fungi
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RNeasy Plant Mini Procedure
RNeasy Plant Mini procedure.
Detection of viruses from a variety of plant species by RT-PCR
Detection of viruses.
Total RNA was isolated from budwood obtained from infected apple (1), cherry (2), pear (3), and grapevine (4–8), leaf tissue from black currant (9, 10), and dormant tuber tissue from infected potato (11, 12) using a modification of the RNeasy protocol. Viral RNA was amplified using a one-tube RT-PCR. Amplification products were analyzed on a 1.5% agarose gel. M: DNA Markers VI, Boehringer Mannheim. (Data kindly provided by D.J. MacKenzie, Centre for Plant Health, Agriculture and Agri-Food Canada and M.A. McLean, Euro Nursery & Vineyard (West) Inc., Sidney, Canada.)
Tissue specificity of histones H4 expression.
Tissue specificity of histone H4 expression.
Formaldehyde agarose gel and northern blot of total RNA (7 µg) from indicated tissues of tomato. Blot was hybridized with a 32P-labeled DNA probe for the tomato histone H4 gene. M: 0.24-9.5 kb RNA ladder. (Plant tissues and histone H4 cDNA clone kindly provided by K. Theres, MPI for Breeding Research, Cologne, Germany.)