QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit

遺伝子発現解析のためのSYBR Green I を用いた1 ステップリアルタイム定量RT-PCR

  • 1ステップRT-PCRでの高い特異性
  • 発現量の低い転写物を確実に検出
  • テンプレートの数段階の対数希釈範囲で正確な定量
  • 反応およびサイクリング条件の至適化不要
QuantiTect SYBR Green RT-PCR KitはSYBR Green I検出を用いた1ステップリアルタイムRT-PCRで特異的にRNAターゲットを定量します。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、RNAターゲットのリアルタイム定量を高い特異性と感度で定量します。dNTP MixはdUTPを含み、オプションのUNG処理ができます。QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitも、様々なRNAテンプレート量での効率的かつ高感度な逆転写に最適なRTミックスを備えています。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
Product Cat. no. List price:
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix, 100 µl QuantiTect RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204243
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QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix, 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204245
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The QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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One-step RT-PCR.|Highly specific amplification.|Comparable results in one-step and two-step RT-PCR.|Specific primer annealing.|
The QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit overcomes the need for optimization of reaction conditions, which can be tedious and time-consuming. Simply add primers and template to the ready-to-use RT-PCR master mix, and start the reaction on any real-time cycler.|In comparison with other DNA polymerases, only HotStarTaq DNA Polymerase in combination with a unique buffer specifically amplified a 497 bp fragment (from 50 copies of an HIV-pol-gene construct in a background of 1 µg human genomic DNA). M: Markers.|Total RNA (10 ng to 100 pg) or the equivalent amounts of cDNA from HeLa cells were analyzed using the QuantiTect Primer Assay for human MAPK14 and the indicated kits. Similar CT values were achieved in one-step and two-step RT-PCR.|A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing primer annealing. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.|
Performance
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitは、様々なRNAテンプレート量での効率的かつ高感度なcDNA 合成を実現するユニークな逆転写酵素ブレンドを含んでおり、広範囲にわたって直線性のある特異的定量を可能にします(図"1ステップおよび2ステップRT-PCRが類似した結果")。HotStarTaq DNA Polymeraseは、他のポリメラーゼに比較して厳密なホットスタートを実現することで、PCR反応の特異性をさらに高めます(図"特異性の高い増幅")。
Principle

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitsは、SYBR Green I を使用するRNAターゲットの高特異的かつ高感度なリアルタイム定量に最適かつ即使用可能なマスターミックスを含んでいます。このマスターミックスのSYBR Green I 蛍光色素によって、標的特異的な標識プローブを合成する必要もなく、多くの異なるターゲットを分析することが可能になります。PCR 用バッファー中のK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率を実現します(図 “特異的なプライマーアニーリング”)。さらに、HotStarTaq DNA Polymeraseが、厳密なホットスタートを実現して非特異的産物の形成を防ぐ一方で、逆転写酵素の最適な混合が、様々な量のRNA テンプレートからcDNAを合成することを可能にします。

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master MixもdUTPを含んでいるので、uracil-N-glycosylase(UNG)による前処理をPCR開始前に行なうことができます。従って、混入しているPCR産物がその後のPCR反応に影響を与えることはありません。

2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kitの成分
成分 特長 利点
HotStarTaq DNA Polymerase 95℃、15分の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Buffer NH4+イオンとK+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
dNTP Mix 一部dTTPの代わりにdUTPを含むので、PCR産物にコンタミが予想される場合、オプションのUNG処理が可能 PCR産物のキャリーオーバーによるコンタミをオプションのUNG処理により除去
SYBR Green I 色素 ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 高感度な定量
ROX 色素 Applied Biosystems およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正 ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
Omniscript Reverse TranscriptaseおよびSensiscript Reverse Transcriptase RNAに対する高い親和性を有する酵素の特別な混合 複雑な二次構造のRNAでも転写可能
Procedure

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit は面倒で時間のかかる反応条件の至適化が不要です。プライマーおよびテンプレートを即使用可能なRT-PCRマスターミックスに添加するだけで、反応を開始することができます(フローチャート “1ステップRT-PCR”)。リアルタイムサイクラーに関する迅速かつ正確な結果を得るために、ハンドブックに記載されているプロトコールに従ってください。PCR 開始前にuracil-N-glycosylase(UNG)で前処理することにより、PCR 増幅産物のコンタミは分解され、続いて行なうPCR に影響を与えません。

QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kits と QuantiTect Primer Assays を組み合わせることにより、非常に特異性の高い遺伝子発現解析結果が得られます。ヒト、マウス、ラット、その他の生物種からの転写物解析のためのバイオインフォマティックス検証済みのプライマーセットで、GeneGlobeポータルサイトで簡単にオーダーできます。

Applications

QuantiTect SYBR Green RT-PCR KitはRNAターゲットの遺伝子発現解析に使用できます。QuantiTect SYBR Green RT-PCR KitはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、RocheおよびAgilent社製などの市販されているほとんどの装置に対応します。Rotor-Gene Q および他のRotor-Gene サイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に開発されたRotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of RNA targets
Reaction type Real-time and one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQs
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Kit Handbooks
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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For quantitative, real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I
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Safety Data Sheets
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PCR and two-step RT-PCR.
One-step RT-PCR.
The QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit overcomes the need for optimization of reaction conditions, which can be tedious and time-consuming. Simply add primers and template to the ready-to-use RT-PCR master mix, and start the reaction on any real-time cycler.
Highly specific amplification.
Highly specific amplification.
In comparison with other DNA polymerases, only HotStarTaq DNA Polymerase in combination with a unique buffer specifically amplified a 497 bp fragment (from 50 copies of an HIV-pol-gene construct in a background of 1 µg human genomic DNA). M: Markers.
Comparable results in one-sep and two-step RT-PCR on the LightCycler 2.0.
Comparable results in one-step and two-step RT-PCR.
Total RNA (10 ng to 100 pg) or the equivalent amounts of cDNA from HeLa cells were analyzed using the QuantiTect Primer Assay for human MAPK14 and the indicated kits. Similar CT values were achieved in one-step and two-step RT-PCR.
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
Specific primer annealing.
A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing primer annealing. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.