QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit

SYBR Green Iを用いた遺伝子発現解析用高速1ステップRT-PCR
  • 時間を最大60 %まで短縮し迅速な結果
  • 低コピーの標的遺伝子でも高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量を正確に検出
  • 高速サイクリングに即使用可能な至適化済みマスターミックス
  • 標準的および高速サイクラーに対応する共通プロトコール

QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitはSYBR Green I 検出を用いた1ステップリアルタイムRT-PCRで迅速かつ特異的にRNAターゲットを定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みの即使用可能なマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなく標準的なサイクラーで短時間でリアルタイムRT-PCRを実現します。ホットスタートと独自のqRT-PCRバッファーシステムの組み合わせは、RNAターゲットのリアルタイム定量を高い特異性と感度で実現します。QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitはわずか10分で効率的なcDNA合成を実現する至適化済みRT Mixも付いています。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

製品名 Cat. no. List price:
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204154
¥102,000
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 0.5 ml QuantiFast RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204156
¥426,000

QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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RT-PCR時間を顕著に短縮|特異的な1ステップRT-PCR|107倍希釈したテンプレートの検出|特異的なプライマーアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは、標準的なサイクラーで1ステップリアルタイムRT-PCRのトータルRT-PCR時間を最大60%短縮する(40サイクルで融解曲線解析なし、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。|HeLa細胞のBCL2(アポトーシス遺伝子)発現をLightCycler 2.0上で、1ステップRT-PCRで解析した。RNAの10倍段階希釈液(0.1 ng~100 ng)を用いてduplicateで反応を行なった。[B] Supplier Rの機器専用キット(高速サイクリングプロトコールを使用)と異なり、[A] QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは特異的な増幅(融解曲線解析でシングルピーク)および高感度定量(CT値がより低く、各濃度ごとの間隔が均等)を実現した。|QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは、Applied Biosystems 7500 Fast System上の1ステップRT-PCR反応で幅広いダイナミックレンジにわたり、HSP89(ヒートショックタンパク質)の転写物を正確に定量した。in vitro転写物の10倍段階希釈液(107~10コピー数)を用いてtriplicateで反応を行なった。|バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

Fastサイクリングモードで使用した他のリアルタイムRT-PCRキットに比較して、QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitでは卓越した特異性と感度の高い結果が得られます(図"特異的な1ステップRT-PCR結果")。RT-PCR時間を最大60 %まで短縮(図"PCR時間を顕著に短縮")するため、結果をより速く得られます。従って、サンプル処理数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。

1ステップRT-PCRの結果は2ステップRT-PCRの結果と同等です(表参照)。

Applied Biosystems 7500 Fast Systemで2ステップRT-PCRおよび1ステップRT-PCRの性能を比較
平均CT
cDNA/RNA量 QuantiFast SYBR Green PCR Kit(2ステップRT-PCR) QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit(1ステップRT-PCR)
10 ng 20.27 20.11
1 ng 23.44 23.46
0.1 ng 27.18 26.86
NTC 45.00 45.00
T98G細胞のAK2(アデニル酸キナーゼ)発現では、2ステップRT-PCR解析と1ステップRT-PCR解析のCT値は同等であった。反応はtriplicateで行なった。NTC:No template control。

QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitは、数段階に対数希釈したテンプレート液でターゲットの正確な定量を実現します(図"107倍希釈したテンプレートの検出")。低コピー数のターゲットのわずかな差異も明確に区別することができます。

原理

QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitでは、標準的なサイクラー、高速サイクラーともに、広範なダイナミックレンジで非常に高感度、特異的な結果が得られます。マスターミックス中の蛍光色素SYBR Green Iは、ターゲットに特異的な標識プローブを合成しなくても多数の異なるターゲットを解析できます。新規PCR添加剤のQ-Bondを含有する特別に開発された高速RT-PCR用バッファーにより、変性、アニーリングおよびエクステンション時間も顕著に短縮されます(図"プライマーの高速なアニーリング")。PCRバッファー中のK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーの特異的なアニーリングが促進され、高いPCR効率と感度を実現します(図"特異的なプライマーアニーリング")。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseで活性化に必要な時間は95℃ではわずか5分で、厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。至適化済みのQuantiFast RT Mixはわずか10分でcDNA合成を実現します。 

2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitの成分*
成分 特長 利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95℃、5分間の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Buffer NH4+/K+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
ユニークなQ-Bondを含む PCR反応時間が短縮されるため、迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる
SYBR Green I色素 ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 高感度な定量
ROX色素 Applied Biosystems社およびオプションのAgilent社の装置で蛍光シグナルを補正 サイクラーでの正確な定量にはROX色素が必要。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
QuantiFast RT Mix RNAへのアフィニティーが高い逆転写酵素の特殊なブレンド 複雑な二次構造でも、わずか10分でRNAを転写可能
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)も含む。
操作手順

QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitは反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。プライマーおよびDNAテンプレートをPCRマスターミックスに添加するだけで、すぐに反応を開始することができます。ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、全てのリアルタイムサイクラーで迅速で正確な結果が得られます。

1ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るためには、QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitとQuantiTect Primer Assaysを組み合わせて使用することをお薦めします。これらは、ヒト、マウス、ラット、その他の生物種の全ての遺伝子に対応するバイオインフォマティックスで検証済みのプライマーセットです。アッセイはGeneGlobe Webポータルサイトで簡単にオーダーできます。

アプリケーション

QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitはRNAターゲットの遺伝子発現解析に使用できます。QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitsはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、RocheおよびAgilent社製などの市販されている全てのリアルタイムサイクラーに対応します。Rotor-Gene Qおよびその他のRotor-Geneサイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に特別に開発されたRotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications SYBR Green-based, real-time, one-step RT-PCR
Reaction type Real-time and one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQ
38
FAQ ID -1085
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FAQ ID -1141
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FAQ ID -539
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FAQ ID -589
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FAQ ID -729
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FAQ ID-751
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FAQ ID -849
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キットハンドブック
4
For fast, quantitative, real-time, one-step RT-PCR using SYBR Green I
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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ゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ(SYBR Green検出)用
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SYBR Green I を用いた高速な1ステップ・リアルタイム定量RT-PCR
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MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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