QIAGEN Fast Cycling PCR Kitには、あらゆるサイクラーでの迅速かつ特異的な増幅に必要な全ての成分を含むマスターミックスが入っています(表参照)。増幅が困難なテンプレートを含むゲノムDNAやcDNAから最高3.5 kbまでのPCR増幅産物が確実に得られます。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによって、特異性が確実に高まります。特許で保護された斬新なPCRバッファー組成によって、ポリメラーゼ、プライマー、およびテンプレートの複合体形成に必要な時間が大幅に短縮されるため、時間を最大75%節約することができます。このバッファーにより、ポリメラーゼはPCRアニーリングステップ中にプライマーを伸長し、その結果各PCRサイクルのアニーリングおよびエクステンションステップ時間が大幅に短縮されます。PCRサイクリング時間は1時間以上(35サイクルの場合)から20分未満に短縮できます(図 "顕著に時間を節約")。迅速に加熱・冷却できる サイクラーではPCRの合計時間はわずか30分で完了します (図 "PCR時間を最大75%まで短縮可能")。
| HotStarTaq Plus DNA Polymerase |
高特異性の産物(最長3.5 kb)
高感度
室温セットアップ |
| 高速サイクリングPCRバッファー(Q-Bond Molecule含有) |
高速
必要最小限の至適化 |
| CoralLoad Dye |
IPCR産物の迅速なゲルローディング
可視化によるピペット操作の改善 |
| Q-Solution |
GCリッチなテンプレートの増幅を促進 |
| QIAGEN Fast Cycling PCR Master Mix |
簡便で迅速な反応セットアップ |
高い特異性と感度
マスターミックスにHotStarTaq Plus DNA Polymeraseが含まれているため、比類のないホットスタートPCR性能が確実に得られます。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは、常温では不活性状態でポリメラーゼ活性はありません。この特性により、低温でのミスプライムによる増幅産物およびプライマーダイマーの形成を回避でき(図 "特異性の高い信頼できる結果")、また反応溶液のセットアップも室温で簡便に行なえます。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは、95℃、5 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。
ユニークな高速サイクリングPCRバッファー
斬新な高速サイクリングPCRバッファーを使用することで、サイクリング時間を大幅に短縮して特定のPCR産物を増幅することが容易になります。オリジナルのQIAGEN PCR Bufferをベースに、この新しい組成によって、毎PCRサイクルの短いアニーリングステップの間、非特異的なプライマー結合に対する特異的なプライマー結合の比率を高く保つことができます。このPCRバッファーは、KClと (NH4)2SO4 のユニークな配合比により、従来のPCR バッファーに比べ幅広いアニーリング温度やMg2+濃度の範囲で厳密なプライマーアニーリング条件を実現します。異なるアニーリング温度あるいはMg2+濃度を用いて行なうPCRの至適化は、劇的に緩和され、多くの場合、不要となります。
革新的な高速サイクリングPCRバッファーも、一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大する斬新なQ-Bondを含んでいるため、アニーリング時間をわずか5秒まで短縮することができます(図 "アニーリングステップでのFast Cycling PCRのメカニズム")。ユニークなバッファー組成および最適化されたDNAポリメラーゼ濃度により変性およびエクステンション時間も顕著に短縮できます。Fast Cycling PCR Bufferは、個々のプライマー/テンプレートシステムでの至適化が不要で、実験の時間および経費を節約できます。時間のかかる至適化実験の必要性なく、幅広い温度、Mg2+濃度において特異的な増幅を維持します。
CoralLoad Dye
QIAGEN Fast Cycling PCR Kit には増幅反応液を直接アガロースゲルにアプライできるCoralLoad Dyeが入っており、ゲルロードバッファーを添加する必要がありません (図 "PCR産物を即電気泳動可能")。CoralLoad Dye には2種類のマーカー色素(オレンジ色素と赤色色素)が入っており、DNAの移動距離の予測およびアガロースゲルの泳動時間の至適化が容易に行なえます。これらの色素はピペッティングの目視を改良し、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。
Q-Solution
QIAGEN Fast Cycling PCR Kit にはまた画期的なPCR添加剤であるQ-Solutionが添付されており、DNAの変性環境を改善することにより、増幅困難なテンプレートの増幅を可能にします。このユニークな試薬により、高度な二次構造を持つテンプレートやGC リッチなテンプレートなどにより生じる不適切なPCR 条件が改善されることがあります。Q-Solutionは、DMSOのような通常使用される他のPCR添加物とは異なり、毒性がなく一定の濃度で使用でき、PCRの正確性を損なわずにPCR純度を確保します。