FastLane Cell cDNA Kit

RNA精製なしにリアルタイムRT-PCRに使用できるcDNAを迅速に調製
  • わずか4ステップ、45分以下で細胞からcDNAを精製
  • 発現量の低い転写物でも高感度で検出
  • 複数のサンプルを簡単に同時処理可能
  • gDNA除去が組み込まれているため、RNAだけを検出可能
  • RNA特異的なプライマーやプローブのデザイン不要

FastLane Cell cDNA Kitは、RNA精製を行なわずに直接培養細胞から迅速で簡単な一本鎖cDNAの調製を実現します。本キットにはライセート調製とRNA安定化のための洗浄および溶解バッファー、混入したゲノムDNA除去用gDNA Wipeout Buffer、迅速で効率的なcDNA合成用反応液が全て含まれています。FastLane Cell cDNA Kitは迅速でハイスループットな遺伝子発現解析が必要な実験に最適です。

Product Cat. no. List price:
FastLane Cell cDNA Kit (50)
Buffer FCW, Buffer FCP, and components for 50 x 20 µl reverse-transcription reactions (gDNA Wipeout Buffer, Quantiscript Reverse Transcriptase, Quantiscript RT Buffer, RT Primer Mix, and RNase-Free Water)
215011
$1,230.00
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The FastLane Cell cDNA Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Superior sensitivity in cancer research.|Successful analysis of CDC2 knockdown.|Effective elimination of genomic DNA contamination.|Highly reproducible cDNA preparation.|
In real-time two-step RT-PCR analysis of various genes important to cancer research in HeLa cells, lower CT values were achieved when cDNA was prepared with the FastLane Kit instead of a similar kit from Supplier AIV.| MCF-7 cells were transfected with various CDC2 siRNAs (S1, S2, or S3) or nonsilencing siRNA (NS). After 48 hours, cDNA was prepared using the FastLane Kit. Expression of CDC2 (cell cycle protein) relative to GAPDH (endogenous control) was analyzed by real-time two-step RT-PCR. The relative expression of CDC2 in untreated cells (UT) was set to 100%. |cDNA was prepared using the FastLane Cell cDNA Kit, with (+RT) or without (-RT) reverse transcriptase. The cDNA was quantified using a gene expression assay for β-actin. The -RT plot in indicates that no genomic DNA was detected.|cDNA was prepared from a 48-well plate containing HeLa cells using the FastLane Kit. Expression of tubulin B (structural protein) was analyzed by real-time two-step RT-PCR.|
Performance
FastLane Cell cDNA Kitで合成したcDNAは2ステップリアルタイムRT-PCRで感度および再現性の高い結果を実現します(図"がん研究において最高の感度を実現"、"再現性の高いcDNA調製")。この高品質cDNAを用いて幅広い細胞数(1から105以上)の範囲でも検出を行なうことができます。
Principle

FastLane Cell cDNA KitはFastLane技術を利用し、培養細胞からわずか45分で直接cDNAを調製します。リアルタイムRT-PCRにおいてRNAのみを確実に検出するため、ゲノムDNAの除去に革新的なgDNA Wipeout Bufferを使用しています(図"ゲノムDNAコンタミを効率的に除去")。RNA特異的なプライマーあるいはプローブをデザインする必要がなく、時間および労力を節約できます。

リアルタイムRT-PCRに至適化済みのQuantiTect、QuantiFast、またはRotor-Gene KitsをFastLane Cell cDNA Kitと共に使用することにより、複数の細胞サンプルを数時間以内に容易に処理し、解析することができます。従って、siRNAによる遺伝子発現ノックダウンの検証のような実験において、複数の転写物のスナップショットが可能です(図"CDC2ノックダウンの優れた解析結果")。

FastLane Cell cDNA Kitは、遺伝子発現解析ワークフローのスピードアップと能率化を実現するFastLane製品の1つです。

Procedure

FastLane Cell cDNA Kitを用いて、細胞洗浄、RNAの安定化を組み込んだ細胞溶解、ゲノムDNAの除去、cDNA合成の4ステップの操作で、培養細胞からわずか45分でcDNAが得られます。合成されたcDNAは2ステップリアルタイムRT-PCRに即使用できます。

本キットには24ウェル細胞培養プレート2枚、あるいは48ウェル細胞培養プレート1枚でcDNAを調製するために十分な量の試薬が入っています。96ウェル細胞培養プレートで調製を行なう場合には、QuantiTect Reverse Transcription Kit(50)を追加購入する必要があります。

FastLane Cell cDNA Kitで調製したcDNAは、以下のQuantiTect Kitシリーズの1つを用いて2ステップリアルタイムRT-PCRで解析できます。

  • SYBR® Green検出:QuantiTect SYBR® Green PCR Kit
  • プローブ検出:QuantiTect Probe PCR Kit
  • マルチプレックスプローブ検出:QuantiTect Multiplex PCR Kits

あるいは、FastLane Cell cDNA KitをQuantiFast Kitと組み合わせて2ステップ高速リアルタイムRT-PCRを行なうことも可能です。

  • SYBR® Green検出:QuantiFast SYBR® Green PCR Kit
  • プローブ検出:QuantiFast Probe PCR Kits
  • マルチプレックスプローブ検出:QuantiFast Multiplex PCR Kits

FastLane Cell cDNA Kitで調製したcDNAを、以下のような専用Rotor-Gene Kitを用いてRotor-Gene Qサイクラーで解析すると、超高速2ステップリアルタイムRT-PCRを行なうことができます。

  • SYBR® Green検出:Rotor-Gene SYBR® Green PCR Kit
  • プローブ検出:Rotor-Gene Probe PCR Kit
  • マルチプレックスプローブ検出:Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 

QuantiTectおよびQuantiFast KitはApplied Biosystems社の装置を含む様々なリアルタイムサイクラーで使用可能です。

Applications

FastLane Cell cDNA Kit は以下のような実験に適しています。

  • siRNAによる遺伝子ノックダウンの検証
  • 薬剤効果の評価
  • 遺伝子制御の検出

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Kit Handbooks
1
For high-speed preparation of first-strand cDNA directly from cultured cells without RNA purification. For use in real-time, two-step RT-PCR
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Superior sensitivity in cancer research
Superior sensitivity in cancer research.
In real-time two-step RT-PCR analysis of various genes important to cancer research in HeLa cells, lower CT values were achieved when cDNA was prepared with the FastLane Kit instead of a similar kit from Supplier AIV.
Successful analysis of CDC2 knockdown
Successful analysis of CDC2 knockdown.

MCF-7 cells were transfected with various CDC2 siRNAs (S1, S2, or S3) or nonsilencing siRNA (NS). After 48 hours, cDNA was prepared using the FastLane Kit. Expression of CDC2 (cell cycle protein) relative to GAPDH (endogenous control) was analyzed by real-time two-step RT-PCR. The relative expression of CDC2 in untreated cells (UT) was set to 100%.

Effective elimination of genomic DNA contamination
Effective elimination of genomic DNA contamination.
cDNA was prepared using the FastLane Cell cDNA Kit, with (+RT) or without (-RT) reverse transcriptase. The cDNA was quantified using a gene expression assay for β-actin. The -RT plot in indicates that no genomic DNA was detected.
Highly reproducible cDNA preparation
Highly reproducible cDNA preparation.
cDNA was prepared from a 48-well plate containing HeLa cells using the FastLane Kit. Expression of tubulin B (structural protein) was analyzed by real-time two-step RT-PCR.