RNeasy Mini Kit

For purification of up to 100 µg total RNA from cells, tissues, and yeast
  • Fast procedure delivering high-quality total RNA in minutes
  • Ready-to-use RNA for high performance in any downstream application
  • Consistent RNA yields from small amounts of starting material
  • No phenol/chloroform extraction, no CsCl gradients, no LiCl or ethanol precipitation

The RNeasy Mini Kit provides fast purification of high-quality RNA from cells, tissues, and yeast using silica-membrane RNeasy spin columns with a binding capacity of 100 μg RNA. Tissue samples can be conveniently stabilized using RNAprotect Tissue Reagent or Allprotect Tissue Reagent, and efficiently disrupted using a TissueRuptor or TissueLyser system. RNA purification using the RNeasy Mini Kit can be fully automated on the QIAcube Connect. For smaller and larger samples, the RNeasy Micro Kit (spin-column binding capacity of up to 45 µg RNA), the RNeasy Midi Kit (spin-column binding capacity of 1 mg RNA), and RNeasy Maxi Kit (spin-column binding capacity of 6 mg RNA) are also available.

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RNeasy Mini Kit (50)
50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), RNase-free Reagents and Buffers
74104
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RNeasy Mini Kit (250)
250 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), RNase-free Reagents and Buffers
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RNeasy Mini Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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RNeasy Mini操作手順|各種サンプルから得られた高品質RNA|わずか100個の細胞から得られたRNAのRT-PCR|RNeasy Mini Spin Column|
RNeasy Mini Kitを用いて精製したトータルRNAは、高品質であり、多くのダウンストリームアプリケーションに適している。プロトコールは、部分的に精製したRNA、in vitro転写物、酵素反応液から得られたRNAのクリーンアップにも含まれている。酵母サンプルに必要なlyticase、zymolase、ガラスビーズは付属されていない。サンプルから精製されるRNAの量は、サンプルソースの発達段階、種、増殖条件により異なる可能性がある。RNeasyは200塩基以上のRNAのみを精製するので、精製物には5S rRNA、tRNAやその他の低分子RNAを含まない。|RNeasy Maxi Kitで精製したトータルRNAのホルムアルデヒドアガロースゲルおよびノーザンブロット。各種サンプルから分離したトータルRNA 10 µgを各レーンにロードした。全ての組織はマウスから採取した。酵母:Saccharomyces cerevisiae、大腸菌株:HB101。32P標識プローブは、(G)GAPDH、(E)翻訳伸長因子EF-1α、(O)外膜タンパク質Aの配列を認識した(データ提供:EはP. Philippsen, University of Basel, Switzerland、OはU. Henning, Max Planck Institute of Biology, Tübingen, Germany)。B.subtilisは調査しなかった。M:0.24~9.5kb RNAラダー。胎児、Huh7、およびHeLa細胞レーンの7.5 kbバンド(矢印)は核内RNA前駆体。|表記の数のHeLa細胞からRNeasy Mini Kitを用いて精製したトータルRNAのRT-PCR。溶出液10 µl(1/5)は、RNaseフリーDNaseで分解後、オリゴ-dTプライマーを用いて逆転写反応を行なった。このcDNAミックスの2.5 µl(1/20)を50 µlのPCR反応に使用した。GAPDHのA 452 bpフラグメントが増幅された。C-:ネガティブコントロール、C+:ポジティブコントロール、M:100 bpラダー。|RNeasy Mini Kitに添付されているRNeasy Mini Spin Column。|
パフォーマンス

Total RNA is easily purified with the RNeasy Mini Kit from up to 30 mg animal or human tissues, from 100 to 1 x 107 animal or human cells, or yeast (see table; and figures "RT-PCR of RNA from as few as 100 cells" and "High-quality RNA from a variety of samples").

Total RNA yields obtained with the RNeasy Mini Kit
Source Starting material Average yield (µg)

Animal cells
LMH
HeLa
COS-7
Lymphocytes (unstimulated)


1 x 106
1 x 106
1 x 106
1 x 106

12
15
35
0.5

Mouse tissue
Liver
Lung
Spleen


10 mg
10 mg
10 mg

40
10
35

Yeast cells
S. cerevisiae


1 x 107

25
 

原理

The RNeasy Mini Kit allows efficient purification of total RNA from small amounts of starting material. RNeasy technology simplifies total RNA isolation by combining the stringency of guanidine-isothiocyanate lysis with the speed and purity of silica-membrane purification. RNeasy Kits provide the highest-quality RNA with minimum copurification of DNA.

操作手順
With the RNeasy Mini Kit, total RNA is easily purified from 10 to 1 x 107 animal or human cells, 0.5–30 mg animal or human tissues, and <5 x 107  yeast cells. Samples are first lysed and then homogenized. Ethanol is added to the lysate to provide ideal binding conditions. The lysate is then loaded onto the RNeasy silica membrane (see figure "RNeasy Mini spin column"). RNA binds (up to 100 µg capacity), and all contaminants are efficiently washed away. For certain RNA applications that are sensitive to very small amounts of DNA, the residual amounts of DNA remaining can be removed using a convenient on-column DNase treatment. Pure, concentrated RNA is eluted in 30–100 µl water (see figure "RNeasy Mini procedure"). A variety of special application protocols is also available.
アプリケーション

RNA purified with RNeasy technology has A260/280 ratios of 1.9–2.1 (measured in 10 mM Tris­·Cl, pH 7.5) and is ideal for use in all applications. Downstream applications include:

  • Northern, dot, and slot blotting
  • End-point RT-PCR
  • Quantitative, real-time RT-PCR
  • Array analysis
  • Poly A+ RNA selection
Feature
Specifications
Applications Northern, dot, and slot blotting, end-point RT-PCR, quantitative, real-time RT-PCR, array analysis, next-generation sequencing
Elution volume 30–100 µl
Format Spin column
Main sample type Tissue, cells
Processing Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Total RNA
Sample amount 0.5–30 mg
Technology Silica technology
Time per run or per prep 20 minutes
Yield Varies

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FAQs
64
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Kit Handbooks
1
RNeasy Mini Kit - For purification of total RNA from animal cells, animal tissues, bacteria, and yeast, and for RNA cleanup; RNeasy Protect Mini Kit - For immediate stabilization of RNA in harvested animal tissues and subsequent total RNA purification; RNeasy Plant Mini Kit - For purification of total RNA from plants and filamentous fungi
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Supplementary Protocols
4

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Up to 1 x 109 bacteria are disrupted and homogenized by bead-milling in a guanidine-thiocyanate-containing lysis buffer. After addition of ethanol, the sample is loaded onto an RNeasy Mini spin column. Total RNA binds to the RNeasy silica-membrane, contaminants are efficiently washed away, and high-quality RNA is eluted in RNase-free water.
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User-Developed Protocols
1
One milliliter of milk contains approximately 50,000-200,000 leukocytes (with an average of approximately 100,000 leukocytes). In a BVDV-infected animal up to 1-30% of the leukocytes may be infected with the virus. Each infected leukocyte typically contains 10-10,000 BVDV entities.
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Scientific Posters
1
References
0
画像
RNeasy Mini Procedure
RNeasy Mini操作手順

RNeasy Mini Kitを用いて精製したトータルRNAは、高品質であり、多くのダウンストリームアプリケーションに適している。プロトコールは、部分的に精製したRNA、in vitro転写物、酵素反応液から得られたRNAのクリーンアップにも含まれている。酵母サンプルに必要なlyticase、zymolase、ガラスビーズは付属されていない。サンプルから精製されるRNAの量は、サンプルソースの発達段階、種、増殖条件により異なる可能性がある。RNeasyは200塩基以上のRNAのみを精製するので、精製物には5S rRNA、tRNAやその他の低分子RNAを含まない。

High-quality RNA from a variety of samples.
各種サンプルから得られた高品質RNA
RNeasy Maxi Kitで精製したトータルRNAのホルムアルデヒドアガロースゲルおよびノーザンブロット。各種サンプルから分離したトータルRNA 10 µgを各レーンにロードした。全ての組織はマウスから採取した。酵母:Saccharomyces cerevisiae、大腸菌株:HB101。32P標識プローブは、(G)GAPDH、(E)翻訳伸長因子EF-1α、(O)外膜タンパク質Aの配列を認識した(データ提供:EはP. Philippsen, University of Basel, Switzerland、OはU. Henning, Max Planck Institute of Biology, Tübingen, Germany)。B.subtilisは調査しなかった。M:0.24~9.5kb RNAラダー。胎児、Huh7、およびHeLa細胞レーンの7.5 kbバンド(矢印)は核内RNA前駆体。
RT-PCR of RNA from >100 cells.
わずか100個の細胞から得られたRNAのRT-PCR
表記の数のHeLa細胞からRNeasy Mini Kitを用いて精製したトータルRNAのRT-PCR。溶出液10 µl(1/5)は、RNaseフリーDNaseで分解後、オリゴ-dTプライマーを用いて逆転写反応を行なった。このcDNAミックスの2.5 µl(1/20)を50 µlのPCR反応に使用した。GAPDHのA 452 bpフラグメントが増幅された。C-:ネガティブコントロール、C+:ポジティブコントロール、M:100 bpラダー。
RNeasy Mini spin column
RNeasy Mini Spin Column
RNeasy Mini Kitに添付されているRNeasy Mini Spin Column。