Rotor-Gene SYBR® Green RT-PCR Kit

SYBR Green Iを用いたRotor-Geneサイクラーでの超高速1ステップリアルタイムRT-PCR遺伝子発現解析

  • Rotor-Gene サイクラーでの信頼できる結果を超高速で実現するために最適化済み
  • 低コピー数の標的遺伝子でも高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量で正確に検出
  • 高速サイクリング用に特別に調製された即使用可能なマスターミックス
  • QuantiTect Primer Assayと組み合わせて最適な結果

Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit は Rotor-Gene Qおよび他のRotor-Geneサイクラーでの使用を目的としてデザインされ、SYBR Green Iを用いた1ステップリアルタイムRT-PCR で特異性の高いRNAターゲットの高速定量を実現します。特別に至適化されたマスターミックスとRotor-Geneサイクラーの遠心エアコントロール方式の組み合わせにより、最高の性能を実現します。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

製品名 Cat. no. List price:
Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Master Mix, 100 µl Rotor-Gene RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204174
¥102,000

Rotor-Gene SYBR® Green RT-PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


  • Main Image Navi
至適化なしに特異的な検出|プライマーの特異的なアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
ヒト白血球RNA の10倍段階希釈液(100 ng ~ 10 pg)をテンプレートとしてSYBR® Green 1ステップリアルタイム RT-PCRを行なった。BCL2 (B-cell CLL/lymphoma 2)用QuantiTect Primer Assay を用いてduplicateで行なった。[A] Rotor-Gene Q およびRotor-Gene SYBR® Green RT-PCR Kit は10 pg のRNA を高感度で検出し、特異的なPCR 産物を増幅した(挿入図は融解曲線)。[B] 一方、R 社の装置とキットでは Mg2+ 濃度の至適化後にはじめて検出できた。しかし、検出限界はRNA100 pg で、非特異的なPCR 産物の増幅が観察された(挿入図は融解曲線)。|Rotor-Gene Q PCR バッファー中の陽イオンによりプライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] Rotor-Gene SYBR® Green RT-PCR Master Mix中のQ-Bondは、短い一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス
Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR KitをQuantiTect Primer Assaysと組み合わせて使用すると、至適化なしに特異的なPCR産物の高感度な定量を実現します(図 “至適化なしに特異的な検出”)。
原理

Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit は Rotor-Gene Q において信頼できるリアルタイムRT-PCR定量を実現します。 反応条件やサイクリング条件の至適化は不要です。逆転写反応と増幅を同一チューブ中で行なう1ステップリアルタイムRT-PCRのテンプレートとしてRNAを使用します。逆転写反応の完了したRT反応液を他のPCR用チューブに移し替える必要がないのでリアルタイムRT-PCR操作を効率的に行なえ、ハイスループット解析が可能です。

マスターミックス中の蛍光色素SYBR Green Iは、ターゲットに特異的な標識プローブを合成しなくても多数の異なるターゲットを解析できます。特異的なプライマーアニーリングを促進する K+とNH4+イオンのバランスの取れた配合により、特異性の高い増幅か確保され、PCRの高い特異性と感度を実現します(“図プライマーの特異的なアニーリング”)。画期的なPCR 添加物であるQ-Bond により性能を損なうことなく高速サイクリングが行なえ、サイクラーのランニング時間は大幅に短縮されます(図“プライマーの高速なアニーリング”)。

2x Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kitの成分*
成分特長 利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase95℃、5分の活性化室温でのqPCRのセットアップ
Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR BufferNH4+とK+イオンの配合バランス特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いqPCR結果
ユニークな添加物Q-Bondより迅速なPCRランタイムでより早く結果が得られ、一日あたりの反応数も増大
SYBR Green I 色素ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生感度の高い定量
Rotor-Gene RT Mix  RNA親和性の高い逆転写酵素を特別に配合複雑な二次構造を持つRNAでもわずか10分で逆転写可能
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)も含む。
操作手順

即使用可能なマスターミックスにより、反応条件やサイクリング条件の至適化が不要です。RNAテンプレート、プライマー、添付の逆転写反応ミックスをマスターミックスに添加し、サイクラーをプログラミングします。キットに添付のハンドブックに詳細な説明が記載されています。

1ステップリアルタイムRT-PCRを用いた遺伝子発現解析において、 Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit、 QuantiTect Primer Assays、Rotor-Gene Q の組み合わせは、最適化なしに開始できるトータルソリューションです。QuantiTect Primer Assay は、ヒト、マウス、ラット、その他の生物種のほとんどの遺伝子に対応するバイオインフォマティックスで検証済みのプライマーセットです。アッセイはGeneGlobeウェブポータルサイトで容易に注文できます。

アプリケーション

Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR KitはRotor-Gene Q上でRNAターゲットの迅速なリアルタイム定量に最適です。本キットはまたRotor-Gene 3000およびRotor-Gene 6000でも使用可能です。

Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of RNA targets
Description For ultrafast quantitative real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I
Reaction type Real-time one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
With or without ROX Without ROX dye

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パンフレット
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Now with even more applications!
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優れた温度均一性を実現するリアルタイムPCR 装置
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キットハンドブック
4
For fast real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using SYBR Green I on Rotor-Gene cyclers
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit
Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit

SYBR Green I とRotor-Gene サイクラーを用いた高速リアルタイムPCR、2ステップRT-PCR、高速1ステップRT-PCR
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ゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ(SYBR Green検出)用
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MSDS
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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安全データシート
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