QuantiTect Probe RT-PCR Kit

QuantiTect Probe RT-PCR Kit は、PCRテンプレートへのプライマーとプローブの高度に特異的なアニーリングを促進するユニークなRT-PCRバッファーを備えています。このバッファーは、他のポリメラーゼと比べて非常に厳密なホットスタートを実現するHotStarTaq DNA Polymeraseを含んでいます（図 "特異性の高い増幅"）。

QuantiTect Probe RT-PCR Kitに添付のHotStarTaq DNA PolymeraseとユニークなRT-PCRバッファー成分により、低コピー数のRNAターゲットを高感度で定量し、広範囲にわたり直線性のある正確な定量を実現します （図 "幅広いダイナミックレンジにわたり効率的で感度の高い定量を実現"）。リアルタイムの2ステップRT-PCRで得られたC_T 値に匹敵するC_T 値が示しているとおり、逆転写反応とPCRを同じ管内で連続的に起こしても、感度は低下しません（図 "2ステップRT-PCRのパフォーマンスと同等の1ステップRT-PCR - A" 、"2ステップRT-PCRのパフォーマンスと同等の1ステップRT-PCR - B"、および表）。

QuantiTect Probe RT-PCR Kit には、配列特異的なプローブを用いてRNAターゲットのリアルタイム定量を高感度で正確に行なうために、至適化済みの即使用可能なマスターミックスが添付されています。本キットは、加水分解プローブ（TaqMan などのダブル標識プローブ）、FRETプローブ、Molecular Beaconsなどのあらゆる種類の配列特異的プローブを使用できるようにデザインされています。QuantiTect Probe RT-PCR Kit に添付のユニークなバッファーのK⁺/NH₄⁺イオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率を実現します（図 “特異的なアニーリング”）。さらに、HotStarTaq DNA Polymeraseが、厳密なホットスタートを実現して非特異的産物の形成を防ぐ一方で、逆転写酵素の最適な混合が、様々な量のRNA テンプレートからcDNAを合成することを可能にします。

QuantiTect Probe RT-PCR Master MixもdUTPが含まれているので、uracil-N-glycosylase（UNG）による前処理をPCR開始前に行なうことができます。従って、混入しているPCR産物がその後のPCR反応に影響を与えることはありません。

QuantiTect Probe RT-PCR Kit は面倒で時間のかかる反応条件の至適化が不要です。プライマー、プローブ、およびRNAテンプレートを即使用可能なRT-PCRマスターミックスに添加するだけで、反応を開始することができます（フローチャート “1ステップRT-PCR”）。リアルタイムサイクラーに関する迅速かつ正確な結果を得るために、ハンドブックに記載されているプロトコールに従ってください。PCR 開始前にuracil-N-glycosylase（UNG）で前処理することにより、PCR 増幅産物のコンタミは分解され、続いて行なうPCR に影響を与えません。

QuantiTect Probe RT-PCR Kitsは、RNAターゲットの発現解析をほとんどのサーマルサイクラーで行なえます。これには、Applied Biosystems およびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent 製サイクラーを含みます。Rotor-Gene Q および他のRotor-Gene サイクラーを使用する場合は、専用に開発されたRotor-Gene Probe RT-PCR Kitの使用をお勧めします。