あらゆるタイプの動物組織からトータルRNAを精製(gDNA Eliminator Solution付き)
  • 1 つのキットであらゆる組織タイプに対応
  • QIAzol とRNeasy テクノロジーの組み合わせにより実験時間を短縮
  • 酵素を利用しない迅速なゲノムDNA 除去
  • ダウンストリームアプリケーションに使用可能な高純度RNA

RNeasy Plus Universal Kit は効果的なゲノムDNA 除去を取り入れた迅速で簡便なRNA 精製用キットです。至適化済みのプロトコールにより溶解が困難な組織を含むあらゆる種類の動物組織からの高品質RNA の精製を実現します。本キットには脂肪性組織やその他の組織の溶解用にQIAzol Lysis Reagent が、そして高品質なRNA精製用にRNeasy Spin Columnが含まれています。最高50 mg の組織調製用にRNeasy Plus Universal Mini Kit、最高250 mg の組織調製用にRNeasy Plus Universal Midi Kit の2種類のフォーマットでお届けします。RNeasy Plus Universal Mini KitはQIAcubeで自動化が可能です。

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RNeasy Plus Universal Mini Kit (50)
For 50 RNA minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Solution, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
73404
¥44,000
RNeasy Plus Universal Midi Kit (10)
For 10 RNA midipreps: RNeasy Midi Spin Columns, gDNA Eliminator Solution, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
73442
¥25,000

RNeasy Plus Universal Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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ゲノムDNA の効率的な除去|高品質RNA|RNeasy Plus Universal MiniおよびMidi 操作手順|
RNAlaterで安定した表記量のラット腎臓から、RNeasy Plus Universal Mini Kitを用いてRNA を精製、または他社(AII 社)の沈殿試薬を用いて精製した。RNA溶出液を逆転写反応ありとなしで、QuantiFast Probe RT-PCR KitおよびRotor-Gene Qを用いてリアルタイムRT-PCRで解析した。|RNeasy Plus Universal Mini Kit を用いてgDNA Eliminator Solution を添加あるいは未添加という条件でラット組織からRNA を精製した。[A] 25 mgの凍結肝臓組織から精製したRNA を用いてリアルタイムRT-PCR を行なった。全サンプルのCT 値を比較した。gDNA Eliminator Solution を使用しなかった場合は-RT control でDNA の混入が検出されたが、gDNA Eliminator Solution を使用した場合はDNA の検出は微量、あるいは皆無であった。[B] 安定化した心臓組織、25 mg からRNA を精製した。QIAxcel システムを用いて得られたデータは、gDNA Eliminator Solution を使用してRNAを精製したかどうかに関わらず、RNA分解のないことを示している。||
パフォーマンス

RNeasy Plus Universal Kitは溶解困難な組織を含むあらゆるタイプの組織からも再現性のある高収量のRNA 精製を実現します(表参照)。収量は種や発生段階などの要素(特に脂肪組織)によって大きく変動します。

RNeasy Plus Universal Kitsを用いたトータルRNAの標準的な収量
マウス/ラット組織 (10 mg) トータルRNA収量 (µg)
脂肪組織 0.5~2.5
5~20
心臓 5~25
10~60
腎臓 5~40
肝臓 15~80
5-15
筋肉 5~35
皮膚 2~5
脾臓 15~100
精製RNAをQIAxcel システムとリアルタイムRT-PCRで解析した結果、RNA がインタクトに近いことが示されました(図“高品質RNA”)。gDNA Eliminator SolutionおよびRNeasyテクノロジーにより、DNase 処理無しにゲノムDNAコンタミを効率的に除去します(図 “ゲノムDNAの効率的な除去”)。

原理

RNeasy Plus UniversalKitは 溶解困難な組織を含むあらゆるタイプの組織からもRNA の精製を実現します。RNeasy Plus Universal Kitはフェノール/グアニジンをベースにしたサンプル溶解法とシリカゲルメンブレンによるトータルRNAの精製を組み合わせています。キットに含まれるQIAzol Lysis Reagentはフェノールとグアニジンチオシアネートの混合溶液で、組織の溶解を容易にし、RNaseを阻害します。非常に効率の高い溶解と続く有機溶媒抽出による夾雑物除去により、RNeasy Spin Columnでより多くの組織量からの精製が可能になります。gDNA Eliminator SolutionはゲノムDNAのコンタミを効果的に除去し、中間相へのDNAの分離を著しく向上します。

操作手順

クリーンアップ操作が必要なフェノール・クロロホルム法に比べ、RNeasy Plus Universal での操作は容易で、より迅速かつ効率的に純度と収量の高いRNAが得られます(フローチャート“RNeasy Plus Universal Mini およびMidi操作手順”)。RNeasy Plus Universal Mini Kit を用いて最高50 mgの組織、あるいはRNeasy Plus Universal Midi Kit を用いて最高250 mgの組織からトータルRNAを精製できます。

組織サンプルは TissueRuptor/TissueLyser LT/TissueLyser II を用いてQIAzol Lysis Reagent 中でホモジナイズされます。gDNA Eliminator Solutionとクロロホルムを添加した後、遠心操作により水層と有機溶媒層に分離します。RNAの入った上部の水層を回収し、エタノールと混和、RNeasy Spin ColumnでRNAを精製します。 トータルRNAはスピンカラムメンブレンに結合し、フェノールおよび他の夾雑物は効率的に洗浄除去されます。高品質なRNAをRNaseフリー水で溶出します。

本操作はrRNAsやtRNAのような200ヌクレオチド未満のほとんどのRNAを排除するため、mRNAリッチなトータルRNAが得られます。RNeasy Plus Universal Kitは、培養細胞からmiRNAなどのsmall RNAを含むトータルRNAの精製を可能にするためにプロトコールを変更することができます。 

アプリケーション

RNeasy Plus Universal Kitで精製したRNAは、リアルタイム定量RT-PCRのような微量のDNAコンタミにも感受性が高いアプリケーションやその他のアプリケーションにも最適です。精製RNAは他のアプリケーションにも使用できます。

Feature
Specifications
Applications Northern, dot, and slot blotting, end-point RT-PCR, quantitative, real-time RT-PCR, array analysis, next-generation sequencing
Elution volume Mini: 30µl; Midi:150µl
For automated processing Mini format can be automated on the QIAcube
Format Mini and Midi Format
Integrated removal of genomic DNA Yes
Main sample type Tissue samples including difficult-to-lyse and demanding tissues
Processing Manual (centrifugation), automated (QIAcube)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein RNA
Sample amount Mini: 5-50 mg; Midi: 50-250 mg
Technology QIAzol/Spin column technology

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For purification of total RNA from all types of tissue
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