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QuantiTect Virus Kit (1000)

カタログ番号 / ID.   211015

1000 x 50 µl反応の場合:QuantiTect Virus Master Mix (contains ROX dye)、QuantiTect Virus RT Mix、RNase-Free Water、QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
リファレンス色素
Rox in Mastermix
Rox in vial
反応
1000
200
50
QuantiTect Virus Kitsは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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特徴

  • シングルおよびマルチプレックスアッセイにおける高い感度
  • 同じ反応でウイルスRNAおよび/またはDNAを検出
  • 弱い陽性シグナルを明確に検出
  • 迅速なユニバーサル2ステッププロトコール
  • より多くのサンプルインプットでより高い感度が得られる5xマスターミックス

製品詳細

QuantiTect Virus Kitは、配列特異的プローブを使用するマルチプレックス、リアルタイム1ステップRT-PCRにより、最大4つのウイルス核酸標的を高感度で検出することができるよう特別に設計されています。複数のウイルスRNAおよび/またはDNA標的と内部コントロールを、感度を損なうことなく1本のチューブで検出できます。濃縮5xマスターミックスは、より多くのサンプルインプットを可能にし、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseを含んでいます。QuantiTect Virus RT Mixには、ウイルスRNAを高感度で検出するように最適化したSensiscript Reverse Transcriptaseの独自の組成が含まれています。蛍光正規化にROX色素を必要とするサイクラー用のQuantiTect Virus Kitと、その他のサイクラー用のQuantiTect Virus +ROX Vial Kitの2つのキット形式があります。マスターミックスは2~8℃で保存できるので便利です。

パフォーマンス

QuantiTect Virus Kitsを使用する増幅では、CT値が高い低テンプレート量でも、広範な希釈液で急峻なシグモイド曲線が得られます(図「  広いダイナミックレンジにおけるCT値の明確な決定」参照)。これにより、リアルタイムPCRでのウイルス核酸定量で、正確なCT値の決定が可能になります。

マルチプレックスアッセイでは、感度を損なうことなく、広い直線範囲にわたって、複数のウイルスRNAおよび/またはDNAターゲットと内部コントロールを検出できます(図「 広い直線範囲にわたるウイルスRNAの確実な検出」および「   少量のウイルスRNAの検出の向上」参照)。

キットに付属のQuantiTect Nucleic Acid Dilution Bufferは、希釈および反応セットアップ中にRNAおよびDNAスタンダードを安定化させ、チューブやピペットチップなどのプラスチック表面での核酸の損失を防ぎます。このバッファーにより、ウイルス核酸の定量に使用されるスタンダードの信頼性の高い希釈が可能になり、低~高CT値までの広い直線範囲が得られ、変性することなく標準を長期間保存できます(図「 RNA標準の信頼性の高い希釈と保存」参照)。

原理

QuantiTect Virus Kitsは、シングルまたはマルチプレックスアッセイで、最初の試みでウイルス核酸を高感度で検出します(フローチャート「 QIAGENマルチプレックスキット」参照)。最適化されたマスターミックスは、マルチプレックス反応のPCR産物が、対応するシングル増幅反応のPCR産物と同じ効率と感度で増幅されることを保証します。

コントロール遺伝子と標的遺伝子を別々の反応ではなく、同じ反応で増幅すると、ハンドリングエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が向上します。QuantiTect Virus Bufferには、K+イオンとNH4+イオンのバランスの取れた組み合わせと、独自の合成Factor MP安定化剤が含まれており、ともにプライマーとプローブの核酸テンプレートへの安定的かつ効率的なアニーリングを促進し、高いPCR効率を実現します(図「 独自のPCRバッファー」参照)。さらに、Sensiscript Reverse Transcriptaseの独自の組成により、ウイルスRNAの高感度逆転写が保証され、HotStar Plus DNA Polymeraseは厳密なホットスタートを提供し、非特異的産物の形成を防止します。

QuantiTect Virus Kitのコンポーネント
キットのコンポーネント特徴メリット
5x QuantiTect Virus Master Mix濃縮マスターミックス高濃度で、高感度ウイルス検出できるように最適化感度を上げるため、より多くのテンプレート量をアッセイに添加可能
HotStarTaq Plus DNA Polymerase95ºC 5分で活性化室温でqPCR反応をセットアップ
QuantiTect Virus BufferNH4+ イオンとK+ イオンのバランスの取れた組み合わせ特異的なプライマーアニーリングにより信頼性の高いPCR結果を保証
合成Factor MP同じチューブで最大4つの遺伝子を高い信頼性でマルチプレックス分析
追加キットコンポーネントQuantiTect Virus RT MixSensiscript Reverse Transcriptaseの独自の組成を含むウイルスRNAを高感度検出できるように最適化
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer核酸スタンダードの希釈および保存のための独自のバッファー組成。希釈および反応セットアップ中のRNAおよびDNAスタンダードを安定化し、チューブやピペットチップなどのプラスチック表面での核酸のロスを防ぎます。

操作手順

QuantiTect Virus Kitsは、配列特異的プローブを使用してウイルス核酸(RNAおよび/またはDNA)および内部コントロールの高感度リアルタイムPCR分析を提供します。反応は、逆転写ステップの有無にかかわらず実施でき、RNAターゲット、DNAターゲット、またはRNAとDNAターゲットの両方を検出するマルチプレックスアッセイの柔軟な設計が可能です。迅速で信頼性の高い結果を得るためには、ハンドブックのプロトコールに従ってください。

キットは、マスターミックスにROXパッシブレファレンス色素を含むものと含まないものがあります(表参照)。

正しいQuantiTect Virus Kitを選択
ROX色素キット互換性のあるサイクラー
マスターミックスに含まれるQuantiTect Virus KitApplied Biosystems 7500を除くApplied Biosystemsのすべてのサイクラー
別のチューブで提供QuantiTect Virus +ROX Vial KitApplied Biosystems 7500および
Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent、およびその他のサプライヤーのサイクラー

ウイルス検出を含む迅速かつ高感度のエンドポイント1ステップRT-PCRアプリケーションには、QIAGEN OneStep RT-PCR Kitの使用を推奨します。

アプリケーション

QuantiTect Virus Kitsは、ウイルスDNAおよび/またはRNAと内部コントロールの検出に配列特異的プローブを使用する、シングルまたはマルチプレックス高感度リアルタイムPCR、もしくはワンステップRT-PCRを提供します。このキットは、Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche(キャピラリーサイクラーを除く)、Agilentの装置を含む、幅広いリアルタイムPCRサーマルサイクラーで使用できます。

裏付けデータと数値

仕様

特徴仕様
Applicationsウイルス検出
SYBR Green I or sequence-specific probes配列特異的プローブ
Real-time or endpointリアルタイム
Reaction type逆転写およびPCR
Thermal cyclerほとんどのリアルタイムサイクラー(LightCycler® 1.xおよび2.0などのキャピラリーサイクラーを除く)
Sample/target typeRNAおよび/またはDNAターゲット
With or without ROXマスターミックス中のROXと別バイアルとしてのROXが利用可能
Single or multiplexシングルプレックスまたはマルチプレックス

リソース

パンフレットとガイド (1)
Now with even more applications!
安全データシート (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
キットハンドブック (1)
For highly sensitive real-time singleplex or multiplex PCR or one-step RT-PCR using sequence-specific probes for detection of viral DNA and RNA and internal controls
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

よくある質問

What is the difference between QuantiTect Virus Kit and the new QuantiFast Pathogen +IC Kits?
The QuantiTect Virus Kit and the new QuantiFast Pathogen +IC Kits are based on similar reaction chemistry and show identical sensitivity but as a new feature, the QuantiFast Pathogen kits include an Internal Control template and the corresponding primer/probe set for duplex amplification of a user-defined pathogen target with the provided Internal Control. Additional new features are pack size, kit variants, ROX variants, and speed.
FAQ-2448
Can the Internal Controls be ordered separately in the QuantiFast Pathogen + IC kit for use during purification?

Yes, the Internal Control RNA (High conc.) and Internal Control DNA (High conc.) templates are available under a separate catalog number. After reconstitution according to the description in the handbook, these IC templates have a 10x higher concentration than the Internal Control templates provided in the kits.   They are sufficiently concentrated to be spiked into the sample prep without replacing too much of the sample input volume.

 

**Please note that there is no assay (primer/probe set) for amplification of the IC included in these separate catalog numbers. The assay is only included in the QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit and QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit.  The ICs cannot be used with the QuantiTect Virus kits because the assay (primer/probe set) for the detection of the IC is provided with the QuantiFast Pathogen Kits only.

 

FAQ-2451
What is the threshold cycle or Ct value?
The Ct or threshold cycle value is the cycle number at which the fluorescence generated within a reaction crosses the fluorescence threshold, a fluorescent signal significantly above the background fluorescence. At the threshold cycle, a detectable amount of amplicon product has been generated during the early exponential phase of the reaction. The threshold cycle is inversely proportional to the original relative expression level of the gene of interest.
FAQ-2682
Why should DNA or cDNA targets be less than 250 bp long for real-time PCR?

Shorter amplification products facilitate high PCR efficiencies. Ideally, amplicon length should be less than 150 bp for optimal amplification efficiency. PCR efficiencies close to 100% are a crucial prerequisite for accurate quantification of target copy numbers in real-time PCR.

FAQ-751